有肝损伤能用环磷酰胺治疗吗 [杜仲总多糖的提取及其对环磷酰胺致肝损伤小鼠的保护作用] .docx

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1、有肝损伤能用环磷酰胺治疗吗 杜仲总多糖的提取及其对环磷酰胺致肝损伤小鼠的保护作用 摘要：目的：探讨杜仲总多糖对环磷酰胺所致肝损伤小鼠的影响。方法：用水提醇沉法制备杜仲总多糖，应用环磷酰胺建立肝损伤模型，赐予不同剂量杜仲总多糖后，测定血清谷丙转胺酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)、肝组织的丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等各项指标。结果：杜仲总多糖能显著降低环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALT、AST值(P0.05)、肝组织的丙二醛MDA值，并能明显降低肝组织SOD值。结论：杜仲总多糖对环磷酰胺致小鼠肝损伤有较好的爱护作用。 关键词：杜仲总多糖；环磷酰胺；肝爱护作用 中图分类号：R285.5

2、文献标识码：A文章编号：16737717(2007)09189604 杜仲Eucommia ulmoidesOliv.EUO，又名思仙、思仲、木棉等，在我国南自五岭，北至长城的广袤地区普遍种植，是我国特有的植物资源。杜仲人药已有2千多年的历史，神农本草经将其列为“药之上品”，具补中益气、坚筋骨、强志、安胎、久服轻身耐劳之功效。中药大辞典和本草纲目中载杜仲，归经入肝，肾经。杜仲总多糖(Eucommiaulmoides Oliv Polysaccharides，EOP)是从杜仲科植物杜仲的干燥树皮中提取出的水溶性糖性成分，是近年来发觉的杜仲又一活性成分。本次试验首次视察杜仲总多糖对传统化疗药物环磷

3、酰胺致肝损伤小鼠的爱护作用，并初步探讨其作用机制，为杜仲的进一步开发利用供应试验依据。 1材料与仪器 11试验动物昆明种清洁级8周龄小白鼠，60只，体重(2l4)g，雌雄各半，由泰山医学院试验动物中心供应，合格证号：鲁动质字020103。标准饲料喂养，试验前试养5天。 12药品与试剂杜仲，中药饮片，由本校中药学教研室高红莉老师鉴定为真品；环磷酰胺粉针剂，上海华联制药有限公司生产，批号：041109(用时以生理盐水配成2mgmL溶液)；联苯双酯滴丸，德州德药制药有限公司生产，批号：051013(用时以生理盐水配成8mgmL混悬液)；维生素C注射液(Vitamin C)，山东鲁抗辰欣药业有限公司，

4、批号：050901；ALT、AST、SOD、MDA试剂盒，南京建成生物工程探讨所供应。 13试验仪器RE52A型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SHB1395A型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；SPectrumlab54紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司造。 2 方法 21杜仲总多糖的提取分别取杜仲皮300g，粉碎，用4倍体积的95乙醇回流4h，冷却过滤，滤渣晾干即为提取多糖的预处理材料。在预处理材料，加入8倍体积的蒸馏水于80水浴中提取2h，过滤，滤渣接着用8倍体积的蒸馏水于80水浴中提取2h，如此重复2次，合并3次滤液，滤液并于70浓缩至原体积的110，得粗提液。取粗提液

5、加入15倍体积的氯仿和125倍体积的正丁醇，振荡10min，在4000rmin下离心10min，分别，水相再如此重复3次，得最终水相溶液。水相溶液用4倍体积的95乙醇醇沉，静置过夜，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，沉淀烘干称重，即得提取物结晶品。 22试验分组及给药方法取健康小白鼠60只，体重(214)g，雌雄各半，随机分为6组，分别为空白比照组，模型组，阳性药联苯双酯组0.2mL10g，杜仲总多糖高、中、低剂量组(200、100、50mgkg)，除空白比照组外，余动物第1、3、5、7天均腹腔注射(ip)环磷酰胺40mg/kg；杜仲总多糖高、中、低剂量组，联苯双酯组按指定剂量灌胃给药，空白

6、比照组和模型组赐予等量生理盐水(NS)。末次给药后，动物禁食不禁水12h，之后小鼠眼球静脉丛取血，3500rmin离心后，参照赖氏法，按试剂盒运用说明书操作测ALT、AST。而后将小鼠快速剖腹，每只取相同部位肝组织100mg,4下制备2异丙醇肝匀浆液，3000rmin离心15min，取上清液测MDA值。同法取肝组织200mg，4下制备10的生理盐水肝匀浆液，离心取上清液测定SOD值。 23统计学方法应用SPSS10.0中相应程序对数据进行统计学处理，两组间均数采纳t检验，组内比较采纳单因素方差分析。 3 结果 31多糖的提取结果杜仲生药300g经提取烘干后得杜仲提取粗品9.3g。杜仲提取物呈咖

7、啡色结晶，不易吸湿，易溶于热水。 32对环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALTAST的影响赐予环磷酰胺后，模型组小鼠血清ALT、AST活性显著性上升(P0.05)；与模型组相比杜仲总多糖中、高剂量组小鼠血清ALT、AST活性下降，且可显著降低环磷酰胺致小鼠血清ALT、AST活性上升(P0.05，P0.01)。 4讨论 杜仲总多糖组成明确的成分有Gonda等从杜仲皮中分别出的酸性聚多糖杜仲糖A(Euconmman A)和Tomoda等分别出的杜仲糖B(Eucomman B)。杜仲糖A是由L阿拉伯糖、D半乳糖、D葡萄糖、L鼠李糖、D半乳糖醛酸按摩尔比8:6:4:5:8组成；杜仲糖B的结构主要为1，2L鼠李

8、糖1，4D半乳糖。据报道，杜仲总多糖有显著的抗肿瘤活性。 环磷酰胺是治疗恶性肿瘤最常用的烷化剂代表药物，具有广谱抗癌作用，是常用的化疗药物之一，但环磷酰胺的主要的毒副作用肝损伤始终是困扰临床用药的一个突出的难题，现在我们国家中西医结合治疗之路正日渐成熟，如何将两者的“互补”作用扩大为“协同”，又是摆在探讨着面前一个重要的课题。 本试验显示，杜仲总多糖能明显抑制环磷酰胺致肝损伤小鼠血清ALT、AST的上升和肝组织的过氧化物MDA的过量产生，还显著上升受损肝组织SOD活性，这有利于清除自由基，削减膜脂质的过氧化，其对环磷酰胺造成的肝损伤有良好的治疗作用，为肿瘤的中西医结合治疗供应了试验依据，两者相互作用的机制有待进一步探讨。 33对环磷酰胺致小鼠肝组织SOD MDA的影响赐予环磷酰胺后，模型组小鼠肝组织SOD含量显著降低(P0.05)，MDA含量明显上升；与模型组相比，杜仲总多糖中、高剂量组可上升环磷酰胺致小鼠肝组织SOD含量(P0.05)，并能降低MDA含量(P0.05)。