国家自然科学基金申请标书的书写.ppt

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1、国家自然科学基金国家自然科学基金NSFCNSFC标书的书写标书的书写第一部分第一部分 如何撰写申请书如何撰写申请书一、摘一、摘 要（限要（限400400字）字）包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。如：采用如：采用方法，进行方法，进行研究，研究，阐明阐明机制或揭示机制或揭示规律，规律，为为奠定基础提供奠定基础提供思路。思路。作用：作用：画龙点睛画龙点睛效果：效果：引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心 “他到底是怎么做的他到底是怎么

2、做的？”采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状体上建立老年性白内障晶状体上建立老年性白内障晶状体上建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。选出白内障相关基因。选出白内障相关基因。选出白内障相关基因。通过基因转染在体和培养的晶状体通过基因转染在体和培养的晶状体通过基因转染在体和培养的晶状体通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞

3、，上皮细胞，上皮细胞，上皮细胞，观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。状体蛋白的变化，研究基因的功能。状体蛋白的变化，研究基因的功能。状体蛋白的变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的从晶状体上皮细胞的从晶状体上皮细胞的从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，为防治白为防治白为防治白为防治白内障提供

4、新思路和理论依据。内障提供新思路和理论依据。内障提供新思路和理论依据。内障提供新思路和理论依据。二、立论依据二、立论依据 对基础研究，对基础研究，对基础研究，对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，论述论述论述论述科学意义科学意义科学意义科学意义 对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中

5、的重要科技问题 论述论述论述论述应用前景应用前景应用前景应用前景从研究方向展开从研究方向展开围绕某一具体科学问题围绕某一具体科学问题（本项目研究目标）（本项目研究目标）进行归纳分析进行归纳分析提出研究提出研究设想设想从研究领域切入从研究领域切入研究意义研究意义国内外现状分析国内外现状分析参考文献参考文献国内外现状分析国内外现状分析在研究领域层面在研究领域层面 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理

6、解 研究领域：研究领域：研究领域：研究领域：白内障的研究：白内障的研究：白内障的研究：白内障的研究：包括发病机制、预防、诊断、包括发病机制、预防、诊断、包括发病机制、预防、诊断、包括发病机制、预防、诊断、治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究 研究方向：研究方向：研究方向：研究方向：白内障发病机制的研究：白内障发病机制的研究：白内障发病机制的研究：白内障发病机制的研究：包括环境因素、致病包括环境因素、致病包括环境因素、致病包括环境因素、致病 靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等 科学问题：科学

7、问题：科学问题：科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究：白内障发病过程中的相关基因研究：白内障发病过程中的相关基因研究：白内障发病过程中的相关基因研究：包括致病包括致病包括致病包括致病 基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等 1 1 1 1、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大 撰写方法：撰写方法：撰写

8、方法：撰写方法：从领域入手，提出主要问题，阐明其重要性，并引出热从领域入手，提出主要问题，阐明其重要性，并引出热从领域入手，提出主要问题，阐明其重要性，并引出热从领域入手，提出主要问题，阐明其重要性，并引出热点研究方向。点研究方向。点研究方向。点研究方向。围绕热点研究方向，找出其中尚未解决的具体科学问题，围绕热点研究方向，找出其中尚未解决的具体科学问题，围绕热点研究方向，找出其中尚未解决的具体科学问题，围绕热点研究方向，找出其中尚未解决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该问题（研究目标）以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该问题（研究目标）以此为切入点提出假设，阐述如果解决了

9、该问题（研究目标）以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。，对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。，对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。，对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。老老老老年年年年性性性性白白白白内内内内障障障障是是是是与与与与年年年年龄龄龄龄相相相相关关关关的的的的疾疾疾疾病病病病，随随随随着着着着年年年年龄龄龄龄的的的的增增增增加加加加，其其其其发发发发病病病病比比比比率率率率也也也也不不不不断断断断升升升升高高高高。特特特特别别别别是是是是人人人人类类类类趋

10、趋趋趋向向向向老老老老龄龄龄龄化化化化，白白白白内内内内障障障障的的的的患患患患病病病病人人人人数数数数还还还还将将将将持持持持续续续续增增增增加加加加。目目目目前前前前它它它它已已已已是是是是人人人人类类类类第第第第一一一一位位位位的的的的致致致致盲盲盲盲疾疾疾疾病病病病。迄迄迄迄今今今今为为为为止止止止,治治治治疗疗疗疗白白白白内内内内障障障障唯唯唯唯一一一一有有有有效效效效的的的的方方方方法法法法是是是是手手手手术术术术摘摘摘摘除除除除混混混混浊浊浊浊的的的的晶晶晶晶状状状状体体体体并并并并植植植植入入入入人人人人工工工工晶晶晶晶状状状状体体体体。虽虽虽虽然然然然手手手手术术术术后后后后

11、患患患患者者者者可可可可以以以以恢恢恢恢复复复复良良良良好好好好的的的的视视视视力力力力，但但但但是是是是不不不不可可可可避避避避免免免免的的的的术术术术后后后后并并并并发发发发症症症症以以以以及及及及手手手手术术术术设设设设备备备备、材材材材料料料料耗耗耗耗资资资资巨巨巨巨大大大大，治治治治疗疗疗疗白白白白内内内内障障障障所所所所花花花花费费费费的的的的资资资资金金金金已已已已成成成成为为为为世世世世界界界界各各各各国国国国包包包包括括括括富富富富裕裕裕裕的的的的发发发发达达达达国国国国家家家家严严严严重重重重的的的的医医医医疗疗疗疗负负负负担担担担。最最最最近近近近的的的的调调调调查查查查

12、表表表表明明明明，如如如如果果果果把把把把老老老老年年年年性性性性白白白白内内内内障障障障的的的的发发发发病病病病时时时时间间间间延延延延缓缓缓缓10101010年年年年，白白白白内内内内障障障障手手手手术术术术的的的的数数数数量量量量就就就就会会会会减减减减少少少少45%45%45%45%1111。所所所所以以以以，一一一一些些些些学学学学者者者者认认认认为为为为通通通通过过过过预预预预防防防防白白白白内内内内障障障障发发发发生生生生或或或或延延延延缓缓缓缓其其其其发发发发展展展展的的的的途途途途径征服白内障径征服白内障径征服白内障径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济问题已成为一项全

13、球性的社会和社会经济问题已成为一项全球性的社会和社会经济问题已成为一项全球性的社会和社会经济问题2222。但是目前对老年性白内障但是目前对老年性白内障但是目前对老年性白内障但是目前对老年性白内障发病机理发病机理发病机理发病机理的认识的认识的认识的认识还不十分清楚。还不十分清楚。还不十分清楚。还不十分清楚。多年以来许多学者的多年以来许多学者的多年以来许多学者的多年以来许多学者的研究证实研究证实研究证实研究证实晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞在老年性白内障在老年性白内障在老年性白内障在老年性白内障发生中发生中发生中发生中起重要的作用，起重要的作用，起重要的作用，起重要的作用

14、，但对其中进一步的基因调控知之甚少但对其中进一步的基因调控知之甚少但对其中进一步的基因调控知之甚少但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从如果从如果从如果从参与老年性白内障参与老年性白内障参与老年性白内障参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住研究基因的生物学功能，有可能抓住研究基因的生物学功能，有可能抓住研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的引起白内障发生、发展的引起白内障发生、发展的引起白内障发生、发展的主要环节主要环节主要环节主要

15、环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中象，一次性筛选出老年性白内障全部有

16、差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基从基从基从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。论依据。论依据。论依据。2 2 2 2、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内

17、外现状分析（与综述的区别）存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：A A A A、低水平地重复：、低水平地重复：、低水平地重复：、低水平地重复：不了解最新进展，对国内外现状缺乏真不了解最新进展，对国内外现状缺乏真不了解最新进展，对国内外现状缺乏真不了解最新进展，对国内外现状缺乏真 正了解，提出的问题别人已解决。正了解，提出的问题别人已解决。正了解，提出的问题别人已解决。正了解，提出的问题别人已解决。B B B B、文献复习不全：、文献复习不全：、文献复习不全：、文献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词不妥，检索文献方法不当、选择关键词不妥，检索文献方法不当、选择关键词不妥，检索文献方法不当、

18、选择关键词不妥，甚至人为缩小检索范围。甚至人为缩小检索范围。甚至人为缩小检索范围。甚至人为缩小检索范围。C C C C、总结表达不够：、总结表达不够：、总结表达不够：、总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单 罗列，缺乏逻辑性和针对性。罗列，缺乏逻辑性和针对性。罗列，缺乏逻辑性和针对性。罗列，缺乏逻辑性和针对性。DDD D、方法理解不够：、方法理解不够：、方法理解不够：、方法理解不够：对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其

19、对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其 作用，缺乏实际应用的可行性。作用，缺乏实际应用的可行性。作用，缺乏实际应用的可行性。作用，缺乏实际应用的可行性。撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：要紧紧围绕本次申请项目的主题。要紧紧围绕本次申请项目的主题。要紧紧围绕本次申请项目的主题。要紧紧围绕本次申请项目的主题。A A A A、从领域切入，、从领域切入，、从领域切入，、从领域切入，简要论述简要论述简要论述简要论述国内外研究国内外研究国内外研究国内外研究成果成果成果成果，并引出当前，并引出当前，并引出当前，并引出当前 的热点研究方向。的热点研究方向。的热点研究方向。的热点研究方向。(注意与意义呼应注意

20、与意义呼应注意与意义呼应注意与意义呼应)B B B B、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析较详细地分析较详细地分析国内外的研究国内外的研究国内外的研究国内外的研究进展进展进展进展，阐明在该方向上存在的问题。阐明在该方向上存在的问题。阐明在该方向上存在的问题。阐明在该方向上存在的问题。C C C C、围绕存在的问题，、围绕存在的问题，、围绕存在的问题，、围绕存在的问题，结合结合结合结合国内外研究国内外研究国内外研究国内外研究结果、结果、结果、结果、当前的当前的当前的当前的现状现状现状现状 以及今后的以及今后的以及今后的以及今后的发展趋势

21、发展趋势发展趋势发展趋势，详细论述和分析这些问题产生详细论述和分析这些问题产生详细论述和分析这些问题产生详细论述和分析这些问题产生 的原因，以及研究的难点、焦点，的原因，以及研究的难点、焦点，的原因，以及研究的难点、焦点，的原因，以及研究的难点、焦点，从而为本次申请项从而为本次申请项从而为本次申请项从而为本次申请项 目确立研究目标奠定充分的立论基础。目确立研究目标奠定充分的立论基础。目确立研究目标奠定充分的立论基础。目确立研究目标奠定充分的立论基础。D DD D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介

22、绍和分析。成熟的方法成熟的方法成熟的方法成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实 验依据。验依据。验依据。验依据。新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可以应用于本，阐明可以应用于本，阐明可以应用于本，阐明可以应用于本 研究的理论依据和实验依据。研究的理论依据和实验依据。研究的理论依据和实验依据。研究的理论依据和实验依据。绝不能简单的移植：绝不能简单的移植：绝不能简单的移植：绝不能简单的

23、移植：必须对所运用的技术方法的原理、必须对所运用的技术方法的原理、必须对所运用的技术方法的原理、必须对所运用的技术方法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚。例如：例如：例如：例如：抗体抗体抗体抗体 +功能基团功能基团功能基团功能基团，理论上可以实现融合，理论上可以实现融合，理论上可以实现融合，理论上可以实现融合，但存在但存在但存在但存在“活性、表达载体选择、纯化活性、表达载体选择、纯化活性、表达载体选择、纯化活性、表达载体选择、纯化等问题。

24、等问题。等问题。等问题。E E E E、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年来，国内外防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年来，国内外防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年来，国内外防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致病的环境因素就致病的环境因素就致病的环境因素就致病的环境因素讲，讲，讲，讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环

25、境中离子浓度改变氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。关。关。关。就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体

26、纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的层的层的层的晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞在白内障的形成中的变化在白内障的形成中的变化在白内障的形成中的变化在白内障的形成中的变化更引人关注更引人关注更引人关注更引人关注。因为因为因为因为晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、数量相是晶状体中唯一有分裂活性、数量相是晶状体中唯一有分裂活性、数量相是晶状体中唯一有

27、分裂活性、数量相对稳定的细胞对稳定的细胞对稳定的细胞对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，晶状体的透明起重要作用。不仅如此，晶状体的透明起重要作用。不仅如此，晶状体的透明起重要作用。不仅如此，晶状体上皮细胞晶

28、状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶还是晶还是晶还是晶状体中状体中状体中状体中受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响较早的部位，已有研究证实老年性白内较早的部位，已有研究证实老年性白内较早的部位，已有研究证实老年性白内较早的部位，已有研究证实老年性白内障的障的障的障的晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细细细细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，胞内

29、酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单与单与单与单纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异3-53-53-53-5 。体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素多种因素多种因素(H2O2(H2O2(H2O2(H2O2、UV-BUV-BUV-BUV-B、晶状体蛋白的、晶状体蛋白的、晶状体蛋白的、晶状体蛋白的自身抗体自身抗体自身抗体自身抗体)诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体上皮的损伤是晶状体混晶状体

30、上皮的损伤是晶状体混晶状体上皮的损伤是晶状体混晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节浊的主要环节浊的主要环节浊的主要环节6-86-86-86-8。因此，因此，因此，因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨从晶状体上皮细胞的变化入手探讨从晶状体上皮细胞的变化入手探讨从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。其中晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所在，其中晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关

31、键所在，其中晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所在，其中晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。也是有待我们深入研究的问题。也是有待我们深入研究的问题。也是有待我们深入研究的问题。白内障的形成白内障的形成白内障的形成白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化的极端表现。晶状体的老化的极端表现。晶状体的老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果是多种因素相互作用的结果是多种因素相互作用的结果是多种因素相

32、互作用的结果，包括包括包括包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性机性的组织特异性机性的组织特异性机性的组织特异性多种基因表达的改变。多种基因表达的改变。多种基因表达的改变。多种基因表达的改变。目前，目前，目前，目前，国内外对白内国内外对白内国内外对白内国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：障相关基因的研究主要以下三方面：障相关基因的研究主要以下三方面：障相关基因的研究主要以下三方面：一是体外培

33、养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究一是体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究一是体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究一是体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究 UV-BUV-BUV-BUV-B辐辐辐辐射射射射作作作作用用用用诱诱诱诱导导导导的的的的白白白白内内内内障障障障中中中中晶晶晶晶状状状状体体体体上上上上皮皮皮皮细细细细胞胞胞胞是是是是主主主主要要要要的的的的靶靶靶靶细细细细胞胞胞胞，其其其其Na-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATP酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性增增增增加加加加，蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的合合合合成成成成和和和和分分分分泌泌

34、泌泌增增增增加加加加；上上上上皮皮皮皮细细细细胞胞胞胞的的的的凋凋凋凋亡亡亡亡增增增增加加加加，其其其其中中中中c-fosc-fosc-fosc-fos基基基基因因因因的的的的表表表表达达达达增增增增加加加加；还还还还有有有有组组组组蛋蛋蛋蛋白白白白H4H4H4H4、H3H3H3H3的的的的低低低低表表表表达达达达 和和和和蛋蛋蛋蛋白白白白酶酶酶酶C C C C、-肌肌肌肌动动动动蛋蛋蛋蛋白白白白、-肌肌肌肌动动动动蛋蛋蛋蛋白白白白基基基基因因因因的的的的高高高高表表表表达达达达9-129-129-129-12。CarperCarperCarperCarper等等等等13131313利利利利用

35、用用用 RT-PCR-RT-PCR-RT-PCR-RT-PCR-DD DD DD DD 技技技技术术术术研研研研究究究究H2O2H2O2H2O2H2O2诱诱诱诱导导导导的的的的晶晶晶晶体体体体上上上上皮皮皮皮细细细细胞胞胞胞的的的的基基基基因因因因差差差差异异异异性性性性表表表表达达达达结结结结果果果果显显显显示示示示NADHNADHNADHNADH脱脱脱脱氢氢氢氢酶酶酶酶4 4 4 4亚亚亚亚基基基基、细细细细胞胞胞胞色色色色素素素素b b b b、谷谷谷谷氨氨氨氨酰酰酰酰胺胺胺胺转转转转移移移移酶酶酶酶基基基基因因因因表表表表达达达达减减减减少少少少及及及及细细细细胞胞胞胞因因因因子子子子

36、的的的的核核核核蛋蛋蛋蛋白白白白、替替替替代代代代拼拼拼拼接接接接因因因因子子子子2 2 2 2、-三三三三羟基异丁酰辅酶羟基异丁酰辅酶羟基异丁酰辅酶羟基异丁酰辅酶A A A A水解酶水解酶水解酶水解酶基因表达增加基因表达增加基因表达增加基因表达增加。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因、杂交的波形纤维蛋白基因、杂交的波形纤维蛋白基因、杂交的波形纤维蛋白基因、杂交的型中间纤维蛋白基因的转型中间纤维蛋白基因的转型中间纤维蛋白基因的转型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重基因小鼠

37、表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制制制制14,1514,1514,1514,15。GongGongGongGong等等等等16161616报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白3333基因敲除小

38、鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（knockout mouseknockout mouseknockout mouseknockout mouse）在晶状体形成的早期及）在晶状体形成的早期及）在晶状体形成的早期及）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。关的核性白内障。关的核性白内障。关的核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提

39、示我们一些基因虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性

40、白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17Lee17Lee17利利利利用用用用RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR技技技技术术术术研研研研究究究究显显显显示示示示前前前前极极极极性性性性白白白白内内内内障障障障与与与与核核核核性性性性白白白白内内内内障障障障上上上上皮皮皮皮细细细细胞胞胞胞中中中中纤纤纤纤维维维维连连连连接接接接蛋蛋蛋蛋白白白白、I I I I型型型型胶胶胶胶原原原原纤纤纤纤维维维维、-平平平平滑滑滑滑肌肌肌肌蛋蛋蛋蛋白白白白、TGF-1TGF-1TGF-1TGF-1、TGF-2TGF-2TGF-2TGF-2、TGF-TGF-TGF-TGF-型型型型受受受受体体体体

41、、结结结结缔缔缔缔组组组组织织织织生生生生长长长长因因因因子子子子的的的的基基基基因因因因表表表表达达达达有有有有差差差差异异异异。KantorowKantorowKantorowKantorow等等等等18181818利利利利用用用用RT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DDRT-PCR-DD研研研研究究究究老老老老年年年年性性性性白白白白内内内内障障障障与与与与正正正正常常常常晶晶晶晶状状状状体体体体上上上上皮皮皮皮的的的的基基基基因因因因差差差差异异异异性性性性表表表表达达达达的的的的初初初初步步步步结结结结果果果果是是是是老老老老年年年年性性性性白白白白内内内内障障障障有有

42、有有三三三三个个个个高高高高表表表表达达达达基基基基因因因因和和和和12121212个个个个低低低低表表表表达达达达的的的的基基基基因因因因。但但但但就就就就DD-PCRDD-PCRDD-PCRDD-PCR技技技技术术术术来来来来讲讲讲讲，在在在在实实实实验验验验中中中中难难难难以以以以解解解解决决决决假假假假阴阴阴阴性性性性、假假假假阳性以及克隆全长阳性以及克隆全长阳性以及克隆全长阳性以及克隆全长cDNAcDNAcDNAcDNA的问题。的问题。的问题。的问题。上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果上述三方

43、面的研究均取得了不同程度的研究结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。寻找寻找寻找寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间胞间胞间胞间差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。差异表达的基因有可能揭示

44、白内障的发病机理。差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术 它是它是它是它是，但是实验操作复杂。，但是实验操作复杂。，但是实验操作复杂。，但是实验操作复杂。经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交 是是是是DiatchenkoDiatchenkoDiatchenkoDiatchenko等等等等1996199619961996年年年年建建建建立立立立的的的的方方方方法法法法

45、）简简简简化化化化了了了了实实实实验验验验操操操操作作作作，但仍然问题很多。但仍然问题很多。但仍然问题很多。但仍然问题很多。改良消减杂交技术改良消减杂交技术改良消减杂交技术改良消减杂交技术19191919，20202020 是是是是我我我我校校校校生生生生化化化化教教教教研研研研室室室室建建建建立立立立了了了了的的的的，其其其其特特特特点点点点是是是是：简简简简便便便便易易易易行行行行，能能能能够够够够获获获获得得得得 目的细胞特异表达的目的细胞特异表达的目的细胞特异表达的目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离全长基因，对低丰度基因也能有效分离全长基因，对低丰度基因也能有效分离全

46、长基因，对低丰度基因也能有效分离。该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞人牙髓细胞人牙髓细胞人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中5 5 5 5个为新基因个为新基因个为新基因个为新基因。同理，利用此方法也能快。同理，利用此方法也能快。同理，利用此方

47、法也能快。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长细胞间差异表达的基因，并克隆到全长细胞间差异表达的基因，并克隆到全长细胞间差异表达的基因，并克隆到全长cDNAcDNAcDNAcDNA，为进一步，为进一步，为进一步，为进一步的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。的结构和功能研究打下基础。基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术

48、的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知DNADNADNADNA分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。分子变得更快捷、准确、高效。基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在基因芯片是在1996199619961996年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的DNADNADNADNA探探探探针集中到针集中到针集中到针集中到1 1 1 1厘米见方的基片上，

49、利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，DNADNADNADNA探针中的已知碱基序列与被测定的未知探针中的已知碱基序列与被测定的未知探针中的已知碱基序列与被测定的未知探针中的已知碱基序列与被测定的未知DNADNADNADNA分子杂交后分子杂交后分子杂交后分子杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而从而从而从而对检测基因进行定性、定量和结构分析

50、，确定未知对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知DNADNADNADNA分子。分子。分子。分子。由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯片，根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达的所有基因建立立立立cDNAcDNAc