常规病理组织学和组织化学.pptx

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1、会计学1常规病理组织学和组织化学常规病理组织学和组织化学细胞化学和组织化学细胞化学和组织化学cytochemistry and histochemistry是以细胞学、组织学为基础，是以细胞学、组织学为基础，运用物理的和化学的技术方法显运用物理的和化学的技术方法显示细胞组织结构中示细胞组织结构中各种化学成分各种化学成分，并对这些化学物质进行并对这些化学物质进行定性、定定性、定位、定量（半定量），位、定量（半定量），从而分析从而分析研究生物在生理或病理状态下细研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化胞组织的代谢、机能及形态变化规律。规律。其在医学研究中具有广泛的其在医学研究中具有

2、广泛的应用价值。应用价值。第1页/共61页细胞和组织化学方法其原则细胞和组织化学方法其原则上是运用已知的化学反应过程使上是运用已知的化学反应过程使细胞组织内的各种化学物质在原细胞组织内的各种化学物质在原位形成可见的位形成可见的最终有色产物最终有色产物。光学显微镜观察显微镜细胞光学显微镜观察显微镜细胞组织化学组织化学 电子显微镜观察电镜细胞化电子显微镜观察电镜细胞化学学 免疫技术方法免疫技术方法 免疫组织化免疫组织化学学 免疫电镜细免疫电镜细胞化学胞化学 用细胞和组织化学方法显示细用细胞和组织化学方法显示细胞组织结构中各种酶的定性、定胞组织结构中各种酶的定性、定位、定量位、定量酶组织化学酶组织化

3、学酶组织化学宏观酶组织化酶组织化学宏观酶组织化学学 光镜酶组织化光镜酶组织化学学 电镜酶组织化电镜酶组织化学学第2页/共61页小脑挫伤，苏木素伊红染色（小脑挫伤，苏木素伊红染色（小脑挫伤，苏木素伊红染色（小脑挫伤，苏木素伊红染色（HEHE）第3页/共61页酶组织化学染色脱氢酶酶组织化学染色脱氢酶NBTNBT:第4页/共61页酶组织化学染色酶组织化学染色SDH第5页/共61页细胞和组织化学方法研究的范细胞和组织化学方法研究的范围围1.1.1.1.组织细胞中的无机物质：组织细胞中的无机物质：组织细胞中的无机物质：组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、主要包括钾、钙、主要包括钾、钙、主要包括钾、钙、

4、锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及各种无机放射性物质等。各种无机放射性物质等。各种无机放射性物质等。各种无机放射性物质等。2.2.2.2.组织细胞中的有机物质组织细胞中的有机物质组织细胞中的有机物质组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂：主要包括中性脂：主要包括中性脂：主要包括中性脂肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类

5、、糖原、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆色素、氨基酸、肽、胆色素、氨基酸、肽、胆色素、氨基酸、肽、胆色素、氨基酸、肽、蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质、DNADNADNADNA、RNARNARNARNA、各种维、各种维、各种维、各种维生素等。生素等。生素等。生素等。3.3.3.3.组织细胞中各种酶类组织细胞中各种酶类组织细胞中各种酶类组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸：如碱性磷酸酶、酸：如碱性磷酸酶、酸：如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、

6、琥珀酸脱性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等氢酶、乳酸脱氢酶等氢酶、乳酸脱氢酶等氢酶、乳酸脱氢酶等-蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质。第6页/共61页细胞和组织化学方法的特点细胞和组织化学方法的特点:1.1.必须最大限度地保存细胞和组织中各种必须最大限度地保存细胞和组织中各种必须最大限度地保存细胞和组织中各种必须最大限度地保存细胞和组织中各种化学成分和化学成分和化学成分和化学成分和/或或或或酶的活性酶的活性酶的活性酶的活性，以保证定性、定量研究；，以保证定性、定量研究；，以保证定性、定量研

7、究；，以保证定性、定量研究；2.2.必须最有效地保持细胞组织固有的必须最有效地保持细胞组织固有的必须最有效地保持细胞组织固有的必须最有效地保持细胞组织固有的形态结构形态结构形态结构形态结构，以保证，以保证，以保证，以保证化学成分和各种酶在细胞组织中的定位；化学成分和各种酶在细胞组织中的定位；化学成分和各种酶在细胞组织中的定位；化学成分和各种酶在细胞组织中的定位；3.3.必须掌握被检测的化学必须掌握被检测的化学必须掌握被检测的化学必须掌握被检测的化学物质特性物质特性物质特性物质特性，如水溶性、脂溶性、，如水溶性、脂溶性、，如水溶性、脂溶性、，如水溶性、脂溶性、溶解度及特异反应等；溶解度及特异反应

8、等；溶解度及特异反应等；溶解度及特异反应等；4.4.必须掌握被检测各种必须掌握被检测各种必须掌握被检测各种必须掌握被检测各种酶的特性酶的特性酶的特性酶的特性，如酶的功能、酶存在，如酶的功能、酶存在，如酶的功能、酶存在，如酶的功能、酶存在的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂和抑制剂、影响酶活性的因素等；和抑制剂、影响酶活性的因素等；和抑制剂、影响酶活性的因素等；和抑制剂、影响酶活性的因素等；5.5.必须做必须做必须做必须做对照

9、实验对照实验对照实验对照实验，借助阳性和阴性对照，正确分析实，借助阳性和阴性对照，正确分析实，借助阳性和阴性对照，正确分析实，借助阳性和阴性对照，正确分析实验结果，注意识别假阳性结果。验结果，注意识别假阳性结果。验结果，注意识别假阳性结果。验结果，注意识别假阳性结果。第7页/共61页细胞和组织化学方法的细胞和组织化学方法的基本技术基本技术取材取材取材取材固定固定固定固定水洗水洗水洗水洗脱水脱水脱水脱水透明透明透明透明浸蜡与包埋浸蜡与包埋浸蜡与包埋浸蜡与包埋切片切片切片切片染色染色染色染色:脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明脱蜡

10、、脱苯、水化、染色、脱水、透明封片封片封片封片第8页/共61页一、取材基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片的制作及正确诊断。片的制作及正确诊断。片的制作及正确诊断。片的制作及正确诊断。1 1取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。2 2取材刀要锋利取材刀要锋利取材刀要锋利取材刀要锋利，切取时刀口垂直地切取；严，切取时刀口垂直地切取；严，切取时刀口垂直地

11、切取；严，切取时刀口垂直地切取；严禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人为的损伤。成人为的损伤。成人为的损伤。成人为的损伤。3 3取材大小取材大小取材大小取材大小，一般长，一般长，一般长，一般长l-3l-3厘米，宽厘米，宽厘米，宽厘米，宽1-21-2厘米，厚度厘米，厚度厘米，厚度厘米，厚度为为为为0.3-0.50.3-0.5厘米。科研用光镜标本不超过厘米。科研用光镜标本不超过厘米。科研用光镜标本不超过厘米。科研用光镜标本不超过1cm 1cm 1c

12、m1cm 1cm 1cm，电镜标本直径约，电镜标本直径约，电镜标本直径约，电镜标本直径约0.5mm0.5mm。过大材料在短时间内不易。过大材料在短时间内不易。过大材料在短时间内不易。过大材料在短时间内不易固定透，影响效果。固定透，影响效果。固定透，影响效果。固定透，影响效果。4 4 要要要要兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位。5 5 尽可能尽可能尽可能尽可能在低温条件下操作在低温条件下操作在低温条件下操作在低温条件下操作，0 04 4。第9页/共61页各器官取材方法：各器官取材方法：各器官取材方法：各器官取材方法：脑脑脑脑：取材应能反应出脑

13、各部位的变化，一般采：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈段及脉络丛）。颈段及脉络丛）。颈段及脉络丛）。颈段及脉络丛）。取材部位如下：取材部位如下：取材部位如下：取材部位如下：额极；额极；额极；额极；中央前后回；中央前后回；中央前后回；中央前后回；海马；海马；海马；海马；内囊；内囊；内囊；内囊；丘脑；丘脑；丘脑；丘脑；枕叶；枕叶；枕叶；

14、枕叶；脉络丛；脉络丛；脉络丛；脉络丛；中脑；中脑；中脑；中脑；桥脑；桥脑；桥脑；桥脑；延髓；延髓；延髓；延髓；小脑；小脑；小脑；小脑；脊髓颈段。脊髓颈段。脊髓颈段。脊髓颈段。取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋利）。锋利）。锋利）。锋利）。垂体：垂体：垂体：垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要兼顾，从前向后纵切。要兼顾，从前向后纵切。要兼顾，从前向后纵切。要兼顾，

15、从前向后纵切。第10页/共61页心：心：心：心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。肺：肺：肺：肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取

16、材应包括左、右两肺（五个肺叶），可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。肾：肾：肾：肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求区别左、右肾。区别左、右

17、肾。区别左、右肾。区别左、右肾。胰：胰：胰：胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、胰尾。胰尾。胰尾。胰尾。肝：肝：肝：肝：取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。脾：脾：脾：脾：取材带被膜。取材带被膜。取材带被膜。取材带被膜。第11页/共61页管腔脏器管腔脏器管腔脏器管腔脏器：取材时注意方向：取材时注意方向：取材时注意方向：取材时注意方向大、小肠：大、小肠：大、小肠：大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的

18、长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取（纵切）；（纵切）；（纵切）；（纵切）；食管：食管：食管：食管：以横切面为宜；以横切面为宜；以横切面为宜；以横切面为宜；胃：胃：胃：胃：常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；气管：气管：气管：气管：横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。为了防止标本入固定液后变形，为了防止标本入固定液后变形，为了防止标本入

19、固定液后变形，为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后将材料取下后将材料取下后将材料取下后（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸上，上，上，上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压变形与收缩。变形与收缩。变形与收缩。变形与收缩。第12页/共61页二、组织固定二、组织固定组织固定的意义：组织固定的意义：组织固定的意义：组织固定的意义：组织

20、固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补救。补救。补救。补救。处死动物立即取材，这时组织及细胞在一定时间处死动物立即取材，这时组织及细胞在一定时间处死动物立即取材，这时组织及细胞在一定时间处死动物立即取材，这时组织及细胞在一定时间内仍然延续着生命活力。内仍然延续着生命活力。内仍然延续着生命

21、活力。内仍然延续着生命活力。迅速将其固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将其固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将其固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将其固定能有效地防止组织及细胞发生死后的一系列变化。的一系列变化。的一系列变化。的一系列变化。固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使

22、组织接近于生前状态。接近于生前状态。接近于生前状态。接近于生前状态。另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，从而有利于保存。质，从而有利于保存。质，从而有利于保存。质，从而有利于保存。第13页/共61页组织固定的目的：组织固定的目的：阻止死后变化阻止死后变化，防止组，防止组织的自溶与

23、腐败。织的自溶与腐败。使组织的结构保存下来使组织的结构保存下来，如蛋白质，脂肪、糖元、酶等各如蛋白质，脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态相仿。种成份与生活时的形态相仿。便于染色便于染色，同时对组织，同时对组织有媒染作用，使不同的组织成份有媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同的亲和力，使细胞对染料有不同的亲和力，使细胞各部易于受色。各部易于受色。能使组织硬化能使组织硬化，为做薄，为做薄切片打下基础。切片打下基础。第14页/共61页组织固定的注意事项：组织固定的注意事项：.材料块不能过大；固定器材料块不能过大；固定器皿不易过小；固定液量不易过少，皿不易过小；固定液量不易过少，大约是固定材料体

24、积的大约是固定材料体积的2040倍。倍。.根据检验目的不同选择不根据检验目的不同选择不同固定液，如做糖元检查就不能同固定液，如做糖元检查就不能用含水的固定液，做电镜检查就用含水的固定液，做电镜检查就必须用锇酸固定液等。必须用锇酸固定液等。第15页/共61页固定液：固定液：固定液：固定液：用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。固定液分为两大类：固定液分为两大类：固定液分为两大类：固定液分为两大类：单纯固定液单纯固定液单纯固定液单纯固定液：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。混合固定液混合固定液混合固定液混合固定液

25、（或复合固定液）：由二种以上（或复合固定液）：由二种以上（或复合固定液）：由二种以上（或复合固定液）：由二种以上的药剂组成的固定液。的药剂组成的固定液。的药剂组成的固定液。的药剂组成的固定液。固定液选择标准：固定液选择标准：固定液选择标准：固定液选择标准：具有强的穿透力，具有强的穿透力，具有强的穿透力，具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。不使组织

26、过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形。能迅速使能迅速使能迅速使能迅速使组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。使组织达到使组织达到使组织达到使组织达到一定的硬度一定的硬度一定的硬度一定的硬度，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。价格便宜，容易买到，同时要配制方便价格便宜，容易买到，同时要配制方便价格便宜，容易买到

27、，同时要配制方便价格便宜，容易买到，同时要配制方便。第16页/共61页常用的单纯固定液常用的单纯固定液常用的单纯固定液常用的单纯固定液乙醇（酒精）乙醇（酒精）alcohol 甲醛（福尔马林）（缓冲液配制）甲醛（福尔马林）（缓冲液配制）formalin重铬酸钾重铬酸钾 potassium bichromate 苦味酸苦味酸 picric acid锇酸锇酸 osmic acid 丙酮丙酮 acetone 冰醋酸冰醋酸 glacial acetic acid 多聚甲醛缓冲固定液多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde戊二醛磷酸缓冲固定液戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialde

28、hyde第17页/共61页1.乙醇（酒精）乙醇（酒精）Alcohol它是一种还原剂，不能与氧化它是一种还原剂，不能与氧化剂混合使用。剂混合使用。固定用酒精最好浓度在固定用酒精最好浓度在7 080，酒精浓度愈大，组织收缩愈，酒精浓度愈大，组织收缩愈严重。反之，浓度太低起不到固定严重。反之，浓度太低起不到固定作用。作用。由于酒精能沉淀白蛋白，球蛋由于酒精能沉淀白蛋白，球蛋白和核蛋白，而后者的沉淀物易溶白和核蛋白，而后者的沉淀物易溶于水，所以用酒精固定的标本细胞于水，所以用酒精固定的标本细胞核染色不佳；核染色不佳；酒精还可溶解脂肪、血红蛋白酒精还可溶解脂肪、血红蛋白和多种色素。所以做脂肪染色必须和多

29、种色素。所以做脂肪染色必须要用冰冻切片。要用冰冻切片。第18页/共61页乙醇优点：乙醇优点：乙醇优点：乙醇优点：使用方便、经济，国内市售有：使用方便、经济，国内市售有：使用方便、经济，国内市售有：使用方便、经济，国内市售有：95 95 的乙醇的乙醇的乙醇的乙醇和无水乙醇（和无水乙醇（和无水乙醇（和无水乙醇（100100）；）；）；）；能硬化组织，起固定作用；能硬化组织，起固定作用；能硬化组织，起固定作用；能硬化组织，起固定作用；也是一种最常用的脱水剂也是一种最常用的脱水剂也是一种最常用的脱水剂也是一种最常用的脱水剂缺点：缺点：缺点：缺点：穿透力小，由于表面硬化，固定液不容易渗透穿透力小，由于表

30、面硬化，固定液不容易渗透穿透力小，由于表面硬化，固定液不容易渗透穿透力小，由于表面硬化，固定液不容易渗透到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小；到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小；到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小；到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小；组织收缩严重组织收缩严重组织收缩严重组织收缩严重;染色效果一般。染色效果一般。染色效果一般。染色效果一般。第19页/共61页2.2.甲醛（福尔马林）甲醛（福尔马林）甲醛（福尔马林）甲醛（福尔马林）formalinformalin是一种还原剂，不能与氧化剂混合使用。是一种还原剂，不能与氧化剂混合使用。是一种还原剂，不能与氧化剂混

31、合使用。是一种还原剂，不能与氧化剂混合使用。它是一种最常用的固定液，可应用于组织学、酶它是一种最常用的固定液，可应用于组织学、酶它是一种最常用的固定液，可应用于组织学、酶它是一种最常用的固定液，可应用于组织学、酶组织化学、免疫组织化学等染色，最好临用时现配。组织化学、免疫组织化学等染色，最好临用时现配。组织化学、免疫组织化学等染色，最好临用时现配。组织化学、免疫组织化学等染色，最好临用时现配。目前认为甲醛是一种致癌剂、致畸剂等。目前认为甲醛是一种致癌剂、致畸剂等。目前认为甲醛是一种致癌剂、致畸剂等。目前认为甲醛是一种致癌剂、致畸剂等。甲醛液是一种无色透明极易挥发有强烈刺激性气甲醛液是一种无色透

32、明极易挥发有强烈刺激性气甲醛液是一种无色透明极易挥发有强烈刺激性气甲醛液是一种无色透明极易挥发有强烈刺激性气味的液体。味的液体。味的液体。味的液体。商品甲醛为商品甲醛为商品甲醛为商品甲醛为37374040甲醛水溶液，也即福尔甲醛水溶液，也即福尔甲醛水溶液，也即福尔甲醛水溶液，也即福尔马林。马林。马林。马林。一般固定用配制的浓度为一般固定用配制的浓度为一般固定用配制的浓度为一般固定用配制的浓度为4 48 8，习惯上称为，习惯上称为，习惯上称为，习惯上称为1010或或或或2020的福尔马林。的福尔马林。的福尔马林。的福尔马林。此液可按前述取材大小在常温下固定此液可按前述取材大小在常温下固定此液可按

33、前述取材大小在常温下固定此液可按前述取材大小在常温下固定2424小时小时小时小时4848小时。若需要快速固定，可加温到小时。若需要快速固定，可加温到小时。若需要快速固定，可加温到小时。若需要快速固定，可加温到70708080或者加温煮或者加温煮或者加温煮或者加温煮沸沸沸沸1010分钟即可达到固定要求，这种快速固定组织块不宜分钟即可达到固定要求，这种快速固定组织块不宜分钟即可达到固定要求，这种快速固定组织块不宜分钟即可达到固定要求，这种快速固定组织块不宜过厚或过大。缺点是组织收缩较严重。过厚或过大。缺点是组织收缩较严重。过厚或过大。缺点是组织收缩较严重。过厚或过大。缺点是组织收缩较严重。第20页

34、/共61页配法配法配法配法：将商品甲醛：将商品甲醛：将商品甲醛：将商品甲醛1 1份与份与份与份与9 9份自来水（最好用份自来水（最好用份自来水（最好用份自来水（最好用PBSPBS等缓等缓等缓等缓冲液配制）混合即为冲液配制）混合即为冲液配制）混合即为冲液配制）混合即为4 4浓度的甲醛固定液。浓度的甲醛固定液。浓度的甲醛固定液。浓度的甲醛固定液。优点优点优点优点：渗透力较强；渗透力较强；渗透力较强；渗透力较强；组织收缩小；组织收缩小；组织收缩小；组织收缩小；细胞核染色细胞核染色细胞核染色细胞核染色较好。较好。较好。较好。缺点缺点缺点缺点：一般质量较差的：一般质量较差的：一般质量较差的：一般质量较差

35、的FormalinFormalin在低温下久存容易产在低温下久存容易产在低温下久存容易产在低温下久存容易产生一种白色的沉淀物，称为生一种白色的沉淀物，称为生一种白色的沉淀物，称为生一种白色的沉淀物，称为三聚甲醛，即付醛三聚甲醛，即付醛三聚甲醛，即付醛三聚甲醛，即付醛。后者经氧。后者经氧。后者经氧。后者经氧化便成为甲酸而使溶液呈酸性，可影响细胞核的嗜硷性染化便成为甲酸而使溶液呈酸性，可影响细胞核的嗜硷性染化便成为甲酸而使溶液呈酸性，可影响细胞核的嗜硷性染化便成为甲酸而使溶液呈酸性，可影响细胞核的嗜硷性染色。色。色。色。纠正办法纠正办法纠正办法纠正办法：可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙、：可在备

36、用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙、：可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙、：可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙、碳酸镁或简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白碳酸镁或简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白碳酸镁或简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白碳酸镁或简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白粉笔作为中和剂。粉笔作为中和剂。粉笔作为中和剂。粉笔作为中和剂。另外酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑另外酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑另外酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑另外酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色素称福尔马林色素，在切片上见到的是黑色小颗粒

37、，这色素称福尔马林色素，在切片上见到的是黑色小颗粒，这色素称福尔马林色素，在切片上见到的是黑色小颗粒，这色素称福尔马林色素，在切片上见到的是黑色小颗粒，这种色素颗粒即不溶于水也不溶于酒精，影响染色效果和切种色素颗粒即不溶于水也不溶于酒精，影响染色效果和切种色素颗粒即不溶于水也不溶于酒精，影响染色效果和切种色素颗粒即不溶于水也不溶于酒精，影响染色效果和切片的观察。片的观察。片的观察。片的观察。第21页/共61页除掉福尔马林色素颗粒的办法除掉福尔马林色素颗粒的办法除掉福尔马林色素颗粒的办法除掉福尔马林色素颗粒的办法：SchriddeSchridde氏法氏法氏法氏法2 52 5氨水氨水氨水氨水 lm

38、llml7575酒精酒精酒精酒精 200ml200ml切片脱蜡后经切片脱蜡后经切片脱蜡后经切片脱蜡后经7070酒精时用上液浸泡半小酒精时用上液浸泡半小酒精时用上液浸泡半小酒精时用上液浸泡半小时或稍长一些时间，然后水洗再行染色。时或稍长一些时间，然后水洗再行染色。时或稍长一些时间，然后水洗再行染色。时或稍长一些时间，然后水洗再行染色。VerocayVerocay氏法氏法氏法氏法l l氢氧化钾氢氧化钾氢氧化钾氢氧化钾 lmllml7070酒精酒精酒精酒精 100ml100ml切片脱蜡后经切片脱蜡后经切片脱蜡后经切片脱蜡后经 8 08 0酒精时入上液处理酒精时入上液处理酒精时入上液处理酒精时入上液处

39、理1010分钟，再经分钟，再经分钟，再经分钟，再经7070酒精入水。酒精入水。酒精入水。酒精入水。第22页/共61页3.3.锇酸（四氧化锇，锇酸（四氧化锇，锇酸（四氧化锇，锇酸（四氧化锇，osmic acidosmic acid）它并不是酸，实际上是一种金属氧化物，其水溶液它并不是酸，实际上是一种金属氧化物，其水溶液它并不是酸，实际上是一种金属氧化物，其水溶液它并不是酸，实际上是一种金属氧化物，其水溶液呈中性反应，为淡黄色结晶，价昂贵，只适用于特殊染色呈中性反应，为淡黄色结晶，价昂贵，只适用于特殊染色呈中性反应，为淡黄色结晶，价昂贵，只适用于特殊染色呈中性反应，为淡黄色结晶，价昂贵，只适用于特

40、殊染色中，如制作电镜超薄切片前的小组织块固定。中，如制作电镜超薄切片前的小组织块固定。中，如制作电镜超薄切片前的小组织块固定。中，如制作电镜超薄切片前的小组织块固定。锇酸为强氧化剂，不可与酒精及甲醛混用。锇酸为强氧化剂，不可与酒精及甲醛混用。锇酸为强氧化剂，不可与酒精及甲醛混用。锇酸为强氧化剂，不可与酒精及甲醛混用。锇酸极易挥发，气味有强烈的刺激性和固定作用，锇酸极易挥发，气味有强烈的刺激性和固定作用，锇酸极易挥发，气味有强烈的刺激性和固定作用，锇酸极易挥发，气味有强烈的刺激性和固定作用，用时必须十分小心，要有防护措施。用时必须十分小心，要有防护措施。用时必须十分小心，要有防护措施。用时必须十

41、分小心，要有防护措施。特点特点特点特点：它固定的组织必须小而薄，其主要优点是能：它固定的组织必须小而薄，其主要优点是能：它固定的组织必须小而薄，其主要优点是能：它固定的组织必须小而薄，其主要优点是能将组织固定与生活时期相仿。锇酸为脂肪及类脂质的优良将组织固定与生活时期相仿。锇酸为脂肪及类脂质的优良将组织固定与生活时期相仿。锇酸为脂肪及类脂质的优良将组织固定与生活时期相仿。锇酸为脂肪及类脂质的优良固定剂，特别对显示线粒体及内质网等细胞器有良好的效固定剂，特别对显示线粒体及内质网等细胞器有良好的效固定剂，特别对显示线粒体及内质网等细胞器有良好的效固定剂，特别对显示线粒体及内质网等细胞器有良好的效果

42、。果。果。果。配制：配制：配制：配制：电镜超薄切片的小组织块后固定用锇酸浓度电镜超薄切片的小组织块后固定用锇酸浓度电镜超薄切片的小组织块后固定用锇酸浓度电镜超薄切片的小组织块后固定用锇酸浓度为为为为1%1%。0.2mol/L 0.2mol/L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液 pH7.2pH7.27.4 10ml+2%7.4 10ml+2%四氧化四氧化四氧化四氧化锇水溶液锇水溶液锇水溶液锇水溶液 10ml10ml。第23页/共61页4.丙酮丙酮 acetone丙酮能使蛋白质沉淀，其渗丙酮能使蛋白质沉淀，其渗透力强但对组织收缩严重；对细透力强但对组织收缩严重；对细胞核的固定欠佳。胞核的固

43、定欠佳。目前在组织化学中，特别是目前在组织化学中，特别是酶的保存方面多采用酶的保存方面多采用冷丙酮冷丙酮固定固定法，主要用于磷酸酶及氧化酶的法，主要用于磷酸酶及氧化酶的固定，有时也用于混合固定液中。固定，有时也用于混合固定液中。第24页/共61页5.多聚甲醛缓冲固定液多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde多聚甲醛多聚甲醛多聚甲醛多聚甲醛 4g4g4g4g，加入，加入，加入，加入0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液 pH7.2 pH7.2 pH7.2 pH7.2 100ml100ml100ml100ml中，加热中，

44、加热中，加热中，加热6060606080808080溶解。溶解。溶解。溶解。固定固定固定固定15min15min15min15min24h,024h,024h,024h,04444。主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。6.戊二醛磷酸缓冲固定液戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric d

45、ialdehyde 25%戊二醛戊二醛10ml，加入，加入0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L磷酸磷酸磷酸磷酸缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液 pH7.2pH7.2pH7.2pH7.27.47.47.47.4 90ml 90ml 90ml 90ml中。中。中。中。固定时间为固定时间为固定时间为固定时间为60min,060min,060min,060min,04444。主要用于科研组织标本的固定，尤其用于主要用于科研组织标本的固定，尤其用于主要用于科研组织标本的固定，尤其用于主要用于科研组织标本的固定，尤其用于电镜超电镜超电镜超电镜超薄切片的小组织块薄切片的小组织块薄切片的小

46、组织块薄切片的小组织块标本的初标本的初标本的初标本的初固定固定固定固定。第25页/共61页常用混合固定液常用混合固定液常用混合固定液常用混合固定液：种类很多。种类很多。可根据检查目的不同选择不同可根据检查目的不同选择不同的固定液。的固定液。1.Zenker固定液：固定液：重铬酸钾重铬酸钾 2.5 g升汞升汞（氯化高汞，（氯化高汞，HgCl2）5 g蒸馏水蒸馏水 100 ml冰醋酸（临用时加入）冰醋酸（临用时加入）5 ml第26页/共61页配制方法配制方法配制方法配制方法：首先将重铬酸钾、升汞和蒸馏水混：首先将重铬酸钾、升汞和蒸馏水混：首先将重铬酸钾、升汞和蒸馏水混：首先将重铬酸钾、升汞和蒸馏水

47、混合后加温溶解，冷却后过滤，置于棕色玻璃瓶中避光合后加温溶解，冷却后过滤，置于棕色玻璃瓶中避光合后加温溶解，冷却后过滤，置于棕色玻璃瓶中避光合后加温溶解，冷却后过滤，置于棕色玻璃瓶中避光保存，这种配制的液体一般称为保存，这种配制的液体一般称为保存，这种配制的液体一般称为保存，这种配制的液体一般称为ZenkerZenker氏干液（储存氏干液（储存氏干液（储存氏干液（储存液、底液）。此液较为稳定，即使配制液、底液）。此液较为稳定，即使配制液、底液）。此液较为稳定，即使配制液、底液）。此液较为稳定，即使配制1 12 2年后仍有年后仍有年后仍有年后仍有固定作用，待组织取材时则在固定作用，待组织取材时则

48、在固定作用，待组织取材时则在固定作用，待组织取材时则在ZenkerZenker干液干液干液干液100ml100ml中加中加中加中加入入入入5ml5ml冰醋酸即可使用，但加入冰醋酸后必须立即使冰醋酸即可使用，但加入冰醋酸后必须立即使冰醋酸即可使用，但加入冰醋酸后必须立即使冰醋酸即可使用，但加入冰醋酸后必须立即使用，否则失去固定作用。用，否则失去固定作用。用，否则失去固定作用。用，否则失去固定作用。特点：特点：特点：特点：对细胞核、胞浆染色均较清晰，也较稳对细胞核、胞浆染色均较清晰，也较稳对细胞核、胞浆染色均较清晰，也较稳对细胞核、胞浆染色均较清晰，也较稳定，对肌组织及结缔组织染色效果好。材料厚度

49、不超定，对肌组织及结缔组织染色效果好。材料厚度不超定，对肌组织及结缔组织染色效果好。材料厚度不超定，对肌组织及结缔组织染色效果好。材料厚度不超过过过过2 mm 2 mm 固定固定固定固定3 34 4小时即可，一般固定为小时即可，一般固定为小时即可，一般固定为小时即可，一般固定为12122424小时。小时。小时。小时。但必须经流水洗但必须经流水洗但必须经流水洗但必须经流水洗12122424小时后再经酒精脱水。小时后再经酒精脱水。小时后再经酒精脱水。小时后再经酒精脱水。第27页/共61页2Carnoy固定液固定液纯酒精（或者纯酒精（或者纯酒精（或者纯酒精（或者9595）6 6份份份份氯氯氯氯 仿仿

50、仿仿 3 3份份份份冰醋酸冰醋酸冰醋酸冰醋酸 1 1份份份份优点优点优点优点：此液穿透速度快，小块组织：此液穿透速度快，小块组织：此液穿透速度快，小块组织：此液穿透速度快，小块组织l l2 2小时即可。小时即可。小时即可。小时即可。此固定液可固定细胞浆及糖原。冰醋酸对染色质有固此固定液可固定细胞浆及糖原。冰醋酸对染色质有固此固定液可固定细胞浆及糖原。冰醋酸对染色质有固此固定液可固定细胞浆及糖原。冰醋酸对染色质有固定作用，同时能抵消由于酒精引起的过度收缩与硬化。定作用，同时能抵消由于酒精引起的过度收缩与硬化。定作用，同时能抵消由于酒精引起的过度收缩与硬化。定作用，同时能抵消由于酒精引起的过度收缩