细胞培养基本方法21705.pdf

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1、实用文档.1.操作台基本要求：2.随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20或-80冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。3.细胞污染：（1）细菌污染 实用文档.（2）酵母污染 （3）霉菌污染 初期 PH 值维持稳定，污染严重后 PH 值迅速升高，导致培养基浑浊。（4）病毒污染 一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA 实验或者采用适当病毒引物的 PCR 技术可以检测出细胞为病毒污染。（5）支原体污染 唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影 4.抗生素只

2、能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出 5适合贴壁的细胞和悬浮的细胞 实用文档.6.基础培养基，减血清培养基，无血清培养基 7.PH 值：大多数正常哺乳动物细胞系 PH 为 7.4；成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7）Sf9 和 sf21 等昆虫细胞系最适合在 PH 值为 6.2 的环境中生长 8.温度：大多数人和哺乳动物细胞系在 36至 37最佳 昆虫细胞在 27为最佳 禽类细胞在 38.5最佳 冷血动物（15-26）9.动物细胞形态划分：成纤维细胞，贴附生长 上皮样细胞呈多角形，贴附 淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附 特殊形态：I 型有长突触 型没有轴突 10.细胞增长模式 实用文档.11.何时传代？哺乳动物：生长的 PH 值通常表示乳酸储积，且有毒性，当 PH 迅速降低（）0.1-0.2PH 单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。昆虫细胞 PH 值会上升但不超过 6.4 12贴壁细胞的解离 实用文档.13.贴壁细胞的传代 实用文档.14.贴壁昆虫细胞传代：实用文档.15.悬浮细胞传代流程 16.细胞冻存：17.冷冻细胞解冻方案：实用文档.18.利用血球计数器进行细胞计数：19.台盼蓝拒染法：实用文档.