动物寄生虫病学兽医寄生虫实验技术课件.ppt

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1、第第1919章章 兽医寄生虫病的实验诊断技术兽医寄生虫病的实验诊断技术蠕虫病的实验诊断技术蠕虫病的实验诊断技术 粪便内蠕虫虫卵检查法粪便内蠕虫虫卵检查法 （1 1）直接涂片法）直接涂片法 直接涂片法是检查虫卵的最简单方法，但如果直接涂片法是检查虫卵的最简单方法，但如果粪便中虫卵数量少时则不易查到。粪便中虫卵数量少时则不易查到。1 1）操作方法：）操作方法：取取1 12 2滴清水，滴在载玻片；滴清水，滴在载玻片；然后用火柴梗或牙签取黄豆大小的粪便与载玻片然后用火柴梗或牙签取黄豆大小的粪便与载玻片上的清水混匀；上的清水混匀；除去较粗的粪渣；除去较粗的粪渣；将粪液涂成薄膜，薄膜的厚度以透过涂片隐约可

2、将粪液涂成薄膜，薄膜的厚度以透过涂片隐约可见书上的字迹为宜；见书上的字迹为宜；盖上盖玻片，置于低倍镜下检查盖上盖玻片，置于低倍镜下检查。2 2）注意事项：）注意事项：涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可见为宜。纸上的字迹隐约可见为宜。该法简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便该法简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便检查，但对虫卵含量低的粪便检出率低，故此法每检查，但对虫卵含量低的粪便检出率低，故此法每个样品必须检查个样品必须检查3 35 5片。片。检查虫卵时，先用低倍镜顺序观察盖检查虫卵时，先用低倍镜顺序观察盖玻片下所有部分，发

3、现疑似虫卵物时，玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵(特特别是线虫卵别是线虫卵)色彩较淡，镜检时视野宜色彩较淡，镜检时视野宜稍暗一些稍暗一些(聚光器下移聚光器下移)。（2 2）漂浮法）漂浮法 漂浮法是利用比重比虫卵大的溶液稀释粪便，将漂浮法是利用比重比虫卵大的溶液稀释粪便，将粪便中比重小的虫卵浮集于液体表面。常用饱和盐粪便中比重小的虫卵浮集于液体表面。常用饱和盐水（即在水（即在1000m11000m1沸水中加入沸水中加入380g380g食盐）做漂浮液，食盐）做漂浮液，用以检查线虫和绦虫虫卵。此外，尚可采用其他饱用以检查线虫和绦虫虫卵。此

4、外，尚可采用其他饱和溶液，如饱和硫酸镁溶液等。和溶液，如饱和硫酸镁溶液等。1 1）操作方法：）操作方法：取粪便取粪便10g10g；加饱和盐水加饱和盐水l00mll00ml；用玻棒搅匀，通过用玻棒搅匀，通过6060目铜筛过滤到另一胶杯中；目铜筛过滤到另一胶杯中；静置半小时；静置半小时；用直经用直经5 510mm10mm的铁丝圈，与液面平行接触以沾取的铁丝圈，与液面平行接触以沾取表面液膜，抖落于载玻片上，加盖玻片检查表面液膜，抖落于载玻片上，加盖玻片检查2 2）注意事项：）注意事项：漂浮时间：饱和盐水漂浮法漂浮时间为漂浮时间：饱和盐水漂浮法漂浮时间为30min30min左左右较为适宜右较为适宜 漂

5、浮液保存：漂浮液必须饱和，盐类的饱和溶液漂浮液保存：漂浮液必须饱和，盐类的饱和溶液须保存在不低于须保存在不低于1313 漂浮液的选择：除饱和盐水漂浮液以外，饱和硫漂浮液的选择：除饱和盐水漂浮液以外，饱和硫酸锌溶液酸锌溶液,饱和蔗糖溶液也可选用。饱和蔗糖溶液也可选用。漂浮法检查多例粪便时，应避免相互污染，否则漂浮法检查多例粪便时，应避免相互污染，否则影响结果的准确性。影响结果的准确性。静置滤液的容器选择：选用口径相当较小的类似静置滤液的容器选择：选用口径相当较小的类似三角瓶的器皿，如经济实惠的青链霉素瓶。三角瓶的器皿，如经济实惠的青链霉素瓶。如用载玻片或盖玻片蘸取虫卵，则使用的载玻片如用载玻片或

6、盖玻片蘸取虫卵，则使用的载玻片或盖玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取。或盖玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取。（3 3）沉淀法）沉淀法 沉淀法用于检查粪便中的吸虫卵，因为吸虫沉淀法用于检查粪便中的吸虫卵，因为吸虫卵一般来说其比重大于水，可沉集于水底。卵一般来说其比重大于水，可沉集于水底。1 1）操作方法：）操作方法：取粪便取粪便5g5g；加清水加清水l00mll00ml；用玻棒搅匀，通过用玻棒搅匀，通过6060目铜筛过滤到另一胶杯中；目铜筛过滤到另一胶杯中；静置半小时；静置半小时；倾去上层液，保留沉渣；倾去上层液，保留沉渣；再加水混匀；再加水混匀；又静置半小时；又静置半小时；再倾去上层液，保留

7、沉渣；再倾去上层液，保留沉渣；如此反复操作直到上层液体透明，最后倾去上层如此反复操作直到上层液体透明，最后倾去上层液；液；吸取沉渣检查。吸取沉渣检查。沉淀法示意图沉淀法示意图2 2）注意事项：）注意事项：注意此法粪量少，一次粪检最好多看几片，以注意此法粪量少，一次粪检最好多看几片，以提高检出率。提高检出率。可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用。如可先可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用。如可先用漂浮法将虫卵和比虫卵轻的物质漂起来，再用离用漂浮法将虫卵和比虫卵轻的物质漂起来，再用离心沉淀法将虫卵沉下去；或者选用沉淀法使虫卵及心沉淀法将虫卵沉下去；或者选用沉淀法使虫卵及比虫卵重的物质沉下去，再用漂浮法

8、使虫卵浮起来，比虫卵重的物质沉下去，再用漂浮法使虫卵浮起来，以获得更高的检出率。以获得更高的检出率。（4 4）锦纶筛兜淘洗法）锦纶筛兜淘洗法1 1）操作方法：）操作方法：取粪便取粪便5 510g10g；加水搅匀；加水搅匀；通过通过4040或或6060目铜筛过滤；目铜筛过滤；滤下液再通过滤下液再通过260260目锦纶筛兜过滤；目锦纶筛兜过滤；在锦纶筛兜中继续加水冲洗，直到洗出液变清为在锦纶筛兜中继续加水冲洗，直到洗出液变清为止；止；挑取挑取260260目锦纶筛兜中的粪渣抹片检查。目锦纶筛兜中的粪渣抹片检查。2 2）注意事项：）注意事项：此法适用于宽度大于此法适用于宽度大于6060微米球虫卵囊。因

9、微米球虫卵囊。因通过通过260260目锦纶筛兜过滤、冲洗后，直径小目锦纶筛兜过滤、冲洗后，直径小于于4040微米的细粪渣和可溶性色素均被洗去而微米的细粪渣和可溶性色素均被洗去而使虫卵集中。使虫卵集中。（5 5）虫卵计数法）虫卵计数法 虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数，而虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数，而以此推断家畜体内某种寄生虫的数量方法，有时尚以此推断家畜体内某种寄生虫的数量方法，有时尚以使用驱虫药前后虫卵数量的对比，以检查驱虫效以使用驱虫药前后虫卵数量的对比，以检查驱虫效果。方法有多种，这里介绍目前常用的三种方法。果。方法有多种，这里介绍目前常用的三种方法。1)1)斯陶尔氏法

10、斯陶尔氏法(Stolls method)(Stolls method)在一小玻璃容器上（如小三角烧瓶或大试管），在一小玻璃容器上（如小三角烧瓶或大试管），在容量为在容量为56ml56ml和和60ml60ml处各作一个标记；处各作一个标记；先取先取0.40.4（或（或0.1mol/L0.1mol/L）的氢氧化钠溶液注入）的氢氧化钠溶液注入容器内到容器内到56ml56ml处；处；再加入被检粪便使液体升到再加入被检粪便使液体升到60ml60ml处；处；加入一些玻璃珠，振荡使粪便完全破碎混匀；加入一些玻璃珠，振荡使粪便完全破碎混匀；以以1mL1mL的吸管吸取粪液的吸管吸取粪液0.15mL0.15mL，

11、滴于，滴于2 23 3张载玻片张载玻片上，覆以盖玻片；上，覆以盖玻片；在显微镜下循序检查，统计其中虫卵总数；在显微镜下循序检查，统计其中虫卵总数；因因0.15mL0.15mL粪液中实际含原粪量是粪液中实际含原粪量是0.150.154/60=0.01g4/60=0.01g，因此，所得虫卵总数乘，因此，所得虫卵总数乘100100即为即为每克粪便中的虫卵数（每克粪便中的虫卵数（EPGEPG）斯陶尔氏法示意图斯陶尔氏法示意图 （引自秦建华，李国清等，（引自秦建华，李国清等，20052005）2)2)麦克马斯特氏法麦克马斯特氏法(McMasters(McMasters methodmethod)操作如下

12、：操作如下：取粪便取粪便2g2g，置研钵中；，置研钵中；先加入先加入10ml10ml水，搅匀，再加饱和食盐水水，搅匀，再加饱和食盐水50ml50ml；充分振荡混匀；充分振荡混匀；用用6060目铜筛过滤；目铜筛过滤；将滤液振荡混匀后立即吸取粪液充满麦克马斯特计将滤液振荡混匀后立即吸取粪液充满麦克马斯特计数板两个计数室；数板两个计数室；置于显微镜台上，静置置于显微镜台上，静置2 23 3分钟；分钟；检计数两个计数室的虫卵数。该小室中的容积为检计数两个计数室的虫卵数。该小室中的容积为1cm1cmlcmlcm0.15cm=0.15cm30.15cm=0.15cm3，内含粪，内含粪2 2（1010505

13、0）0.15=0.005g0.15=0.005g，两个计数室则为，两个计数室则为0.01g0.01g。故数。故数得的虫卵数乘以得的虫卵数乘以100100即为每克粪便中的虫卵数（即为每克粪便中的虫卵数（OPGOPG值）值）公式：公式：OPGOPGa a100100，a a代表两个计数室的虫卵数值代表两个计数室的虫卵数值 麦克马斯特氏计数法示意图麦克马斯特氏计数法示意图 （引自秦建华，李国清等，（引自秦建华，李国清等，20052005）3)3)片形吸虫卵的计数法片形吸虫卵的计数法对于羊，操作如下：对于羊，操作如下：取羊粪取羊粪10g10g，置于，置于300ml300ml的容量瓶中；的容量瓶中；加入

14、少量加入少量1.61.6的氢氧化钠溶液，静置过夜；的氢氧化钠溶液，静置过夜；次日，将粪块搅碎，再加入次日，将粪块搅碎，再加入1.61.6的氢氧化钠溶的氢氧化钠溶液到液到300ml300ml刻度处；刻度处；摇匀，立即吸取此粪液摇匀，立即吸取此粪液7.5ml7.5ml注入到一离心管内；注入到一离心管内；在离心机内以每分钟在离心机内以每分钟1 0001 000转速，离心转速，离心2min2min；倾去上层液体，换加饱和盐水；倾去上层液体，换加饱和盐水；再次离心后，再倾去上层液体；再次离心后，再倾去上层液体；再换加饱和盐水，如此反复操作，直到上层液体完全再换加饱和盐水，如此反复操作，直到上层液体完全清

15、澈为止；清澈为止；倾去上层液体，将沉渣全部分别滴于数张载玻片上；倾去上层液体，将沉渣全部分别滴于数张载玻片上；检查全部所制的载玻片，统计其虫卵总数，以总数乘检查全部所制的载玻片，统计其虫卵总数，以总数乘以以4 4，即为每克粪便中的肝片形吸虫虫卵数。，即为每克粪便中的肝片形吸虫虫卵数。在进行牛粪便肝片形吸虫虫卵的计数时，操作步骤基本同上，在进行牛粪便肝片形吸虫虫卵的计数时，操作步骤基本同上，但用粪量改为但用粪量改为30g30g。加入离心管中的粪液量为。加入离心管中的粪液量为5ml5ml，因此，最后，因此，最后计得虫卵总数乘以计得虫卵总数乘以2 2，即为每克粪便中虫卵总数。，即为每克粪便中虫卵总数

16、。在马，当线虫卵数量达到每克粪便中含卵在马，当线虫卵数量达到每克粪便中含卵500500枚时，为轻感染；枚时，为轻感染；8008001 0001 000枚时为中感染；枚时为中感染；l 500l 5002 0002 000枚时为重感染。枚时为重感染。在羔羊，还应考虑感染线虫的种类，一般每克粪便在羔羊，还应考虑感染线虫的种类，一般每克粪便中含中含2 0002 0006 0006 000虫卵时应认为是重感染，在每克虫卵时应认为是重感染，在每克粪便中含虫卵粪便中含虫卵1 0001 000枚以上，即认为应给以驱虫。枚以上，即认为应给以驱虫。在牛，每克粪便中含虫卵在牛，每克粪便中含虫卵30030060060

17、0枚时，即应给以枚时，即应给以驱虫。在肝片形吸虫，牛每克粪便中的虫卵数达到驱虫。在肝片形吸虫，牛每克粪便中的虫卵数达到100100200200枚时，羊达到枚时，羊达到300300600600枚时即应考虑其致枚时即应考虑其致病性病性。4）注意事项：采用麦克马斯特氏法计数时，必须调好显微镜焦采用麦克马斯特氏法计数时，必须调好显微镜焦距距(计数室刻度线条可被看到计数室刻度线条可被看到)。计数虫卵时，不能。计数虫卵时，不能有遗漏和重复。为了取得准确的虫卵计数结果，最有遗漏和重复。为了取得准确的虫卵计数结果，最好在每日的不同时间检查好在每日的不同时间检查3 3次，并连续检查次，并连续检查3 3天，然天，

18、然后取其平均值。将每克粪便虫卵数乘以后取其平均值。将每克粪便虫卵数乘以24h24h粪便的总粪便的总重量重量(g)(g)，即是每日所排虫卵的总数，再将此总数除，即是每日所排虫卵的总数，再将此总数除以已知成虫每日排卵数以已知成虫每日排卵数(可查书得到可查书得到)，即可得出雌，即可得出雌虫的大约寄生数量。如寄生虫是雌雄异体的，则将虫的大约寄生数量。如寄生虫是雌雄异体的，则将上述雌虫数再乘以上述雌虫数再乘以2 2，便可得出雌雄成虫寄生总数。，便可得出雌雄成虫寄生总数。做虫卵计数时，所取粪便应干净，不能掺做虫卵计数时，所取粪便应干净，不能掺杂砂土、草根等。操作过程中杂砂土、草根等。操作过程中,粪便必须彻

19、粪便必须彻底粉碎，混合均匀。用吸管吸取粪液时，必底粉碎，混合均匀。用吸管吸取粪液时，必须摇匀粪液，在一定深度吸取；须摇匀粪液，在一定深度吸取；由于粪中虫卵的数目与宿主机体状况、由于粪中虫卵的数目与宿主机体状况、寄生虫的成熟程度、雌虫数目及排卵周期、寄生虫的成熟程度、雌虫数目及排卵周期、粪便性状粪便性状(干湿干湿)、是否经过驱虫及其他多种、是否经过驱虫及其他多种因素有关，所以虫卵计数只能是对寄生虫感因素有关，所以虫卵计数只能是对寄生虫感染程度的一个大致推断。染程度的一个大致推断。粪便内蠕虫幼虫检查法粪便内蠕虫幼虫检查法（1）幼虫分离法 反刍兽网尾线虫的虫卵在新排出的粪便中已变为反刍兽网尾线虫的虫

20、卵在新排出的粪便中已变为幼虫，类圆线虫的虫幼虫，类圆线虫的虫 卵随粪便排出后很快就孵出卵随粪便排出后很快就孵出幼虫。对粪便中幼虫的检查最常用的方法是漏斗幼幼虫。对粪便中幼虫的检查最常用的方法是漏斗幼虫分离法，即贝尔曼法和平皿法。虫分离法，即贝尔曼法和平皿法。1 1）贝尔曼法）贝尔曼法 主要用于生前诊断一些肺线虫病，即从粪便中分主要用于生前诊断一些肺线虫病，即从粪便中分离肺线虫的幼虫，建立生前诊断。离肺线虫的幼虫，建立生前诊断。操作如下：操作如下：取粪便取粪便151520g20g，放在漏斗内的金属筛上；，放在漏斗内的金属筛上；漏斗下接一短橡皮管，管下再接一小试管；漏斗下接一短橡皮管，管下再接一小

21、试管；加入加入4040温水至淹没粪球为止；温水至淹没粪球为止；静置静置l l3 3小时；小时；拔取底部小试管，吸取管底沉淀物，进行镜检。拔取底部小试管，吸取管底沉淀物，进行镜检。贝尔曼幼虫分离装置示意图贝尔曼幼虫分离装置示意图 （引自孔繁瑶，（引自孔繁瑶，19971997）1.1.铜丝网筛铜丝网筛 2.2.水平面水平面 3.3.玻璃漏斗玻璃漏斗 4.4.乳胶管乳胶管 5.5.试剂管试剂管 2 2）平皿法）平皿法特别适用于球状粪便。特别适用于球状粪便。操作如下：操作如下：取粪便取粪便3 31010个；个；放于培氏皿或表面玻璃上；放于培氏皿或表面玻璃上；加少量加少量4040温水；温水；l0 l01

22、5min15min后移去粪球；后移去粪球；将留下的液体在低倍镜下检查。将留下的液体在低倍镜下检查。用上述两种方法检查时，可见到运动活泼用上述两种方法检查时，可见到运动活泼的幼虫，如欲将其致死，做较详细的观察，的幼虫，如欲将其致死，做较详细的观察，可在有幼虫的载玻片上，滴上卢戈氏碘液，可在有幼虫的载玻片上，滴上卢戈氏碘液，则幼虫很快死亡，并染成棕黄色。则幼虫很快死亡，并染成棕黄色。3 3）注意事项）注意事项 若是检查组织器官材料，应尽量撕碎，但检查粪若是检查组织器官材料，应尽量撕碎，但检查粪便时，则将完整粪球放入，不必弄碎，以免渣子落便时，则将完整粪球放入，不必弄碎，以免渣子落人小试管底部，镜检

23、时不易观察。人小试管底部，镜检时不易观察。温水必须充满整个小试管和乳胶管，并使其浸泡温水必须充满整个小试管和乳胶管，并使其浸泡住被检材料住被检材料(使水不致流出为止使水不致流出为止)，中间不得有气泡，中间不得有气泡或空隙。或空隙。为了静态观察幼虫形态构造，可用酒精灯加热或为了静态观察幼虫形态构造，可用酒精灯加热或滴入少量碘液，将载片上的幼虫杀死后进行观察。滴入少量碘液，将载片上的幼虫杀死后进行观察。（2 2）粪便培养法）粪便培养法 该法主要用于研究蠕虫卵或幼虫的生物学该法主要用于研究蠕虫卵或幼虫的生物学特性，鉴别线虫等。另外，做人工寄生性线特性，鉴别线虫等。另外，做人工寄生性线虫感染试验时，也

24、要用到幼虫培养技术。虫感染试验时，也要用到幼虫培养技术。1 1）操作如下：）操作如下：取新鲜粪便若干，弄碎置培氏皿中央堆成半球取新鲜粪便若干，弄碎置培氏皿中央堆成半球状，顶部略高出；状，顶部略高出；然后在培氏皿内边缘加水少许（如粪便稀可不必然后在培氏皿内边缘加水少许（如粪便稀可不必加水），加盖盖好使粪与培氏皿接触；加水），加盖盖好使粪与培氏皿接触；放入放入25253030的温箱内培养的温箱内培养 (夏天放置室内亦可夏天放置室内亦可)；每日观察粪便是否干燥，要保持适宜的湿度；每日观察粪便是否干燥，要保持适宜的湿度；经经7 71515天，第三期幼虫即可出现，它们从粪便天，第三期幼虫即可出现，它们从

25、粪便中出来，爬到培氏皿的盖上或四周；中出来，爬到培氏皿的盖上或四周；用胶帽吸管吸上生理盐水把幼虫冲洗下来，滴在用胶帽吸管吸上生理盐水把幼虫冲洗下来，滴在载玻片上覆以盖片，在显微镜下进行观察。载玻片上覆以盖片，在显微镜下进行观察。2 2）注意事项：）注意事项：培养皿及培养基的选择：培养幼虫时如无培氏皿。培养皿及培养基的选择：培养幼虫时如无培氏皿。将小平皿（去掉盖）加上粪便放于大平皿中央，大将小平皿（去掉盖）加上粪便放于大平皿中央，大平皿内加少许水，然后用大平皿盖盖上，即可进行平皿内加少许水，然后用大平皿盖盖上，即可进行培养。培养。培养温度及培养基的选择：培氏皿内，在培养温度及培养基的选择：培氏皿

26、内，在25253030的温箱中进行培育。培氏皿内须预先放好培养的温箱中进行培育。培氏皿内须预先放好培养基。对于吸虫卵、绦虫卵、棘头虫卵和大多数线虫基。对于吸虫卵、绦虫卵、棘头虫卵和大多数线虫卵，可用水或生理盐水做培养基。最好的培养基是卵，可用水或生理盐水做培养基。最好的培养基是灭菌的粪便或粪汁，尤以后者为佳。灭菌的粪便或粪汁，尤以后者为佳。粪便和粪汁的灭菌方法是粪便和粪汁的灭菌方法是100100的温度下煮沸的温度下煮沸2h2h。粪。粪汁接种虫卵或幼虫之前，须先用棉絮过滤。汁接种虫卵或幼虫之前，须先用棉絮过滤。（3 3）毛蚴孵化法）毛蚴孵化法 毛蚴孵化法是专门用来诊断血吸虫病的，其原理毛蚴孵化法

27、是专门用来诊断血吸虫病的，其原理是将含有血吸虫卵的粪便在适宜的温度条件下进行是将含有血吸虫卵的粪便在适宜的温度条件下进行孵化，等毛蚴从虫卵内孵出来后，借着蚴虫向上、孵化，等毛蚴从虫卵内孵出来后，借着蚴虫向上、向光、向清的特性，进行观察，做出诊断。向光、向清的特性，进行观察，做出诊断。1 1）常规沉孵法）常规沉孵法操作如下：操作如下：取新鲜粪便取新鲜粪便100g100g，置，置500ml500ml容器内；容器内；加水调成糊状，通过加水调成糊状，通过40406060目铜筛过滤至另一个容器目铜筛过滤至另一个容器内；内；加水至九成满，静置沉淀加水至九成满，静置沉淀30min30min；之后将上清液倒掉

28、，再加清水搅匀，沉淀之后将上清液倒掉，再加清水搅匀，沉淀20min20min；如此反复如此反复3 3或或4 4次；次；最后将上述反复淘洗后的沉淀材料加最后将上述反复淘洗后的沉淀材料加3030的温水的温水置于三角烧杯中，瓶口用中央插有玻璃管的胶塞塞置于三角烧杯中，瓶口用中央插有玻璃管的胶塞塞上上(或用搪瓷杯加硬纸片盖上倒插试管的办法或用搪瓷杯加硬纸片盖上倒插试管的办法)，杯，杯内的水量以至杯口内的水量以至杯口2cm2cm处为宜，且使玻璃管或试管中处为宜，且使玻璃管或试管中必须有一段漏出的水柱；必须有一段漏出的水柱；后放入后放入25253535的温箱中孵化；的温箱中孵化；30min 30min后开

29、始观察水柱内是否有毛蚴；如没有，以后开始观察水柱内是否有毛蚴；如没有，以后每后每1h1h观察观察1 1次，共观察数次。任何一次发现毛蚴，次，共观察数次。任何一次发现毛蚴，即可停止观察。即可停止观察。2 2）棉析毛蚴孵化法）棉析毛蚴孵化法操作如下：操作如下：取粪便取粪便50g50g，经反复淘洗或锦纶筛淘洗后（不淘洗，经反复淘洗或锦纶筛淘洗后（不淘洗也可）；也可）；将粪渣移入将粪渣移入300mL300mL的平底孵化瓶中，灌注的平底孵化瓶中，灌注2525的清的清水至瓶颈下部；水至瓶颈下部；在液面上方塞一薄层脱脂棉，大小以塞住瓶颈下在液面上方塞一薄层脱脂棉，大小以塞住瓶颈下部不浮动为宜；部不浮动为宜；

30、再缓慢加入再缓慢加入2020清水至瓶口清水至瓶口l l3mm3mm处，如棉层上处，如棉层上面水中有粪便浮动，可将这部分水吸去再加清水，面水中有粪便浮动，可将这部分水吸去再加清水，然后进行孵化。然后进行孵化。棉析毛蚴孵化法装置示意图（引自秦建华，李国清等，棉析毛蚴孵化法装置示意图（引自秦建华，李国清等，20052005）1.1.水平面水平面 2.2.棉花棉花3.3.浊水层浊水层 4.4.粪渣粪渣3 3）注意事项：）注意事项：被检粪便务必新鲜，不可触地污染，洗粪容器不宜被检粪便务必新鲜，不可触地污染，洗粪容器不宜过小，免得增加换水次数，影响毛蚴早期孵出。过小，免得增加换水次数，影响毛蚴早期孵出。换

31、水时要一次倒完，避免沉淀物翻动。如有翻动，换水时要一次倒完，避免沉淀物翻动。如有翻动，须等沉淀后再换水。须等沉淀后再换水。孵化用水一定要清洁，自来水须放置过夜脱氯后使孵化用水一定要清洁，自来水须放置过夜脱氯后使用，所有与粪便接触过的用具，须清洗后再沸水烫泡，用，所有与粪便接触过的用具，须清洗后再沸水烫泡，方可再用。方可再用。多畜检查时，需做好登记，附好标签，避免混乱。多畜检查时，需做好登记，附好标签，避免混乱。粪便内蠕虫虫体检查法粪便内蠕虫虫体检查法 粪便中的节片和虫体，其中较大型者，通过肉眼粪便中的节片和虫体，其中较大型者，通过肉眼观察即可发现，然后可用镊子或挑针挑出。对较小观察即可发现，然

32、后可用镊子或挑针挑出。对较小的，应先将粪便收集于盆的，应先将粪便收集于盆(桶桶)内，加入内，加入5 51010倍清水，倍清水，搅匀，静置沉淀，而后倾去上清液，重新加入清水，搅匀，静置沉淀，而后倾去上清液，重新加入清水，搅拌沉淀，反复操作，直到上层液清澈为止。最后搅拌沉淀，反复操作，直到上层液清澈为止。最后将上层液倾去，取沉渣置大玻皿内，先后在白色和将上层液倾去，取沉渣置大玻皿内，先后在白色和黑色背景上，以肉眼或借助于放大镜寻找虫体，发黑色背景上，以肉眼或借助于放大镜寻找虫体，发现虫体时，用挑针或毛笔挑出供检查。现虫体时，用挑针或毛笔挑出供检查。螨病的实验室诊断技术螨病的实验室诊断技术病料的采集

33、病料的采集 选选取取部部位位(患患部部与与健健康康部部交交界界处处)剪剪毛毛消毒消毒刮取皮屑。刮取皮屑。、刀刀刃刃与与皮皮肤肤表表面面要要垂直；垂直；、刮刮至至皮皮肤肤渗渗出出血血为为宜）宜）消毒。消毒。直接检查法直接检查法 将刮下物放在黑纸上或有黑色背景的容器内，置将刮下物放在黑纸上或有黑色背景的容器内，置温箱中温箱中(30(3040)40)或用白炽灯照射一段时间，然后或用白炽灯照射一段时间，然后收集从皮屑中爬出的黄白色针尖大小的点状物在镜收集从皮屑中爬出的黄白色针尖大小的点状物在镜下检查。此法较适用于体形较大的螨下检查。此法较适用于体形较大的螨(如痒螨如痒螨)。检。检查水牛痒螨时，可把水牛

34、牵到阳光下揭去查水牛痒螨时，可把水牛牵到阳光下揭去“油漆起油漆起爆爆”状的痂皮，即可看到淡黄白色的麸皮样缓慢爬状的痂皮，即可看到淡黄白色的麸皮样缓慢爬动的痒螨。还可以把刮取的皮屑握在手里，不久会动的痒螨。还可以把刮取的皮屑握在手里，不久会有虫体爬动的感觉。有虫体爬动的感觉。显微镜直接检查法显微镜直接检查法 将刮下的皮屑，放于载玻片上，滴加煤油，覆以将刮下的皮屑，放于载玻片上，滴加煤油，覆以另一张载玻片。搓压玻片使病料散开，分开载玻片，另一张载玻片。搓压玻片使病料散开，分开载玻片，置显微镜下检查。煤油有透明皮屑的作用，使其中置显微镜下检查。煤油有透明皮屑的作用，使其中虫体易被发现，但虫体在煤油中

35、容易死亡；如欲观虫体易被发现，但虫体在煤油中容易死亡；如欲观察活螨，可用察活螨，可用10%10%氢氧化钠溶液、液体石蜡或氢氧化钠溶液、液体石蜡或50%50%甘甘油水溶液滴于病料上，在这些溶液中，虫体短期内油水溶液滴于病料上，在这些溶液中，虫体短期内不会死亡，可观察到其活动不会死亡，可观察到其活动 虫体浓集法虫体浓集法 此法先取较多的病料，置于试管中，加入此法先取较多的病料，置于试管中，加入10%10%氢氧氢氧化钠溶液，浸泡过夜化钠溶液，浸泡过夜(如急待检查可在酒精灯上煮数如急待检查可在酒精灯上煮数分钟分钟)，使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来。尔后，使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来。尔后待其自然

36、沉淀待其自然沉淀(或以每分钟或以每分钟2 0002 000转的速度离心沉淀转的速度离心沉淀5min)5min)，虫体即沉于管底，弃去上层液，吸取沉渣检，虫体即沉于管底，弃去上层液，吸取沉渣检查。查。也可采用上述方法的病料加热离心后，倾去上清也可采用上述方法的病料加热离心后，倾去上清液，再加入液，再加入6060硫代硫酸钠溶液，充分混匀后再离硫代硫酸钠溶液，充分混匀后再离心心2 23min3min，螨虫即漂浮于液面，再取表面溶液检查。，螨虫即漂浮于液面，再取表面溶液检查。温水检查法温水检查法 即用幼虫分离法装置，将刮取物放在盛有即用幼虫分离法装置，将刮取物放在盛有4040左左右温水的漏斗上的铜筛中

37、，经右温水的漏斗上的铜筛中，经0.50.51h1h，由于温热作，由于温热作用，螨从痂皮中爬出集成小团沉于管底，取沉淀物用，螨从痂皮中爬出集成小团沉于管底，取沉淀物进行检查。也可将病料浸入进行检查。也可将病料浸入40404545的温水里，置的温水里，置恒温箱中，恒温箱中，1 12h2h后，将其倾在表玻璃上，解剖镜下后，将其倾在表玻璃上，解剖镜下检查。活螨在温热的作用下，由皮屑内爬出，集结检查。活螨在温热的作用下，由皮屑内爬出，集结成团，沉于水底部。成团，沉于水底部。培养皿内加温法培养皿内加温法 将刮取到的干的病料，放于培养皿内，加盖。将将刮取到的干的病料，放于培养皿内，加盖。将培养皿放于盛有培养

38、皿放于盛有40404545温水的杯上，经温水的杯上，经101015min15min后，将皿翻转，则虫体与少量皮屑黏附于皿底，大后，将皿翻转，则虫体与少量皮屑黏附于皿底，大量皮屑则落于皿盖上，取皿底检查。可以反复进行量皮屑则落于皿盖上，取皿底检查。可以反复进行如上操作。该方法可收集到与皮屑分离的干净虫体，如上操作。该方法可收集到与皮屑分离的干净虫体，供观察和制作封片标本之用。供观察和制作封片标本之用。蠕形螨的检查蠕形螨的检查 蠕形螨寄生在毛囊内，检查时先在动物四肢的外蠕形螨寄生在毛囊内，检查时先在动物四肢的外侧和腹部两侧、背部、眼眶四周，颊部和鼻部的皮侧和腹部两侧、背部、眼眶四周，颊部和鼻部的皮

39、肤上按摩，是否砂粒样或黄豆大的结节。如有，用肤上按摩，是否砂粒样或黄豆大的结节。如有，用小刀切开挤压，看到有脓性分泌物或淡黄色干酪样小刀切开挤压，看到有脓性分泌物或淡黄色干酪样团块时，则可将其挑在载片上，滴加生理盐水团块时，则可将其挑在载片上，滴加生理盐水1 12 2滴，均匀涂成薄片，上覆盖玻片，在显微镜下进行滴，均匀涂成薄片，上覆盖玻片，在显微镜下进行观察。观察。实验注意事项实验注意事项 （1 1）螨对寄生部位有一定的选择性，多数寄生于螨对寄生部位有一定的选择性，多数寄生于体表皮肤柔软而毛少的部位。根据其发育规律和生体表皮肤柔软而毛少的部位。根据其发育规律和生活习性，确定采集虫体的时间和部位

40、。活习性，确定采集虫体的时间和部位。（2 2）虫体和病料采取中应严防散布病原。虫体和病料采取中应严防散布病原。原虫病的实验室诊断技术原虫病的实验室诊断技术 寄生于消化道的原虫，如球虫、隐孢子虫、结肠寄生于消化道的原虫，如球虫、隐孢子虫、结肠小袋纤毛虫等都可以通过粪便检查来确诊。检查时，小袋纤毛虫等都可以通过粪便检查来确诊。检查时，要求粪便新鲜、盛粪便的容器要干净，并防止污染要求粪便新鲜、盛粪便的容器要干净，并防止污染及干燥。采用各种镜检方法之前，可以先对粪便进及干燥。采用各种镜检方法之前，可以先对粪便进行观察，看其颜色、稠度、气味、有无血液等，以行观察，看其颜色、稠度、气味、有无血液等，以便初

41、步了解宿主感染的时间和程度。便初步了解宿主感染的时间和程度。粪便内原虫检查法粪便内原虫检查法球虫卵囊检查法球虫卵囊检查法（1 1）检查方法）检查方法 根据所采取的方法不同，粪便内球虫卵囊的检根据所采取的方法不同，粪便内球虫卵囊的检查方法分为直接涂片法、漂浮法、锦纶筛兜淘洗法查方法分为直接涂片法、漂浮法、锦纶筛兜淘洗法等（操作方法同粪便内蠕虫虫卵检查法）。等（操作方法同粪便内蠕虫虫卵检查法）。2 2）注意事项）注意事项 因大部分球虫卵囊直径小于因大部分球虫卵囊直径小于4040微米，若使用锦纶微米，若使用锦纶筛兜淘洗法时，虫卵可以通过筛兜淘洗法时，虫卵可以通过260260目网筛筛孔，故应目网筛筛孔

42、，故应取滤液，待其沉淀或离心后，吸取沉渣检查。取滤液，待其沉淀或离心后，吸取沉渣检查。当需要鉴定球虫的种类时，可将浓集后的卵囊加当需要鉴定球虫的种类时，可将浓集后的卵囊加2.52.5的重铬酸钾溶液，在的重铬酸钾溶液，在2525温箱中培养，待其孢温箱中培养，待其孢子形成后进行观察。子形成后进行观察。在生产实践当中，为了推测动物体内球虫的感染在生产实践当中，为了推测动物体内球虫的感染强度、判断抗球虫药物的疗效、评价疫苗的免疫保强度、判断抗球虫药物的疗效、评价疫苗的免疫保护性，通常要进行卵囊的计数，即克粪样中球虫卵护性，通常要进行卵囊的计数，即克粪样中球虫卵囊数值（囊数值（OPGOPG）。常用的方法

43、有血球板计数，载玻片）。常用的方法有血球板计数，载玻片计数，麦克马斯特计数等等。计数，麦克马斯特计数等等。附附:克粪样中球虫卵囊数值记数方法克粪样中球虫卵囊数值记数方法血球板计数法：血球板计数法：.取取1g1g粪样，溶于粪样，溶于10ml10ml水中，制成水中，制成1010倍稀释液。倍稀释液。.经充分搅拌均匀后，取其经充分搅拌均匀后，取其1 1滴置血球计数板中，在滴置血球计数板中，在低倍显微镜下计数计数室四角低倍显微镜下计数计数室四角4 4个大方格（每个大方个大方格（每个大方格又分成格又分成1616个中方格）中球虫卵囊总数，除以个中方格）中球虫卵囊总数，除以4 4求其求其平均值，乘平均值，乘1

44、04104即为即为1ml1ml液体的卵囊数，然后再乘液体的卵囊数，然后再乘1010即为即为OPGOPG值。值。.为了数据的可靠性，可以重复几次计数，算其平均为了数据的可靠性，可以重复几次计数，算其平均（OPGOPGa a105105，a a代表代表4 4个大方格卵囊平均数值）。个大方格卵囊平均数值）。载玻片计数法：载玻片计数法：.取取1g1g粪样，溶于粪样，溶于10ml10ml水中，制成水中，制成1010倍稀释液。倍稀释液。.取取0.05ml0.05ml（5050微升）置于载玻片上，盖上盖玻片后，微升）置于载玻片上，盖上盖玻片后，计算整个卵囊数（计算整个卵囊数（OPGOPGb b200200，

45、b b代表整个卵囊数代表整个卵囊数值）。值）。麦克马斯特法计数法麦克马斯特法计数法 操作方法同粪便内蠕虫虫卵检查法操作方法同粪便内蠕虫虫卵检查法隐孢子虫卵囊检查法隐孢子虫卵囊检查法 隐孢子虫卵囊的采集与球虫相似，但其比球虫小，隐孢子虫卵囊的采集与球虫相似，但其比球虫小，可采用饱和蔗糖溶液漂浮法收集粪便中的卵囊，油可采用饱和蔗糖溶液漂浮法收集粪便中的卵囊，油镜观察，或加以染色后再油镜镜检。镜观察，或加以染色后再油镜镜检。（1 1）饱和蔗糖溶液漂浮法）饱和蔗糖溶液漂浮法 取粪样取粪样5 51010克，加克，加5 5倍自来水搅匀，倍自来水搅匀，6060目筛网过目筛网过滤，滤液以滤，滤液以250025

46、0030003000转转/分钟速度离心分钟速度离心1010分钟，弃分钟，弃上清，按粪样量的上清，按粪样量的1010倍体积加饱和蔗糖液（蔗糖倍体积加饱和蔗糖液（蔗糖500g500g，蒸馏水，蒸馏水320ml320ml，石炭酸，石炭酸9ml9ml），搅匀后以），搅匀后以20002000转转/分钟离心分钟离心1010分钟，然后用小铁丝环蘸取漂浮液表分钟，然后用小铁丝环蘸取漂浮液表层涂片，以层涂片，以1010100100倍油镜镜检。倍油镜镜检。（2 2）抗酸染色法）抗酸染色法 取粪样取粪样5 51010克，加克，加5 5倍水搅匀，倍水搅匀，6060目尼龙筛过滤，将滤液目尼龙筛过滤，将滤液涂片，自然干燥

47、或采用火焰快速干燥，在涂片区域滴加改良抗涂片，自然干燥或采用火焰快速干燥，在涂片区域滴加改良抗酸染色液第一液（碱性复红酸染色液第一液（碱性复红4g4g，95%95%酒精酒精20ml20ml，石炭酸，石炭酸8ml8ml，蒸，蒸馏水馏水100ml100ml），以固定玻片上的滤液膜，），以固定玻片上的滤液膜，5 51010分钟后用水冲洗，分钟后用水冲洗，再滴加第二液（再滴加第二液（98%98%浓硫酸浓硫酸10ml10ml，蒸馏水，蒸馏水90ml90ml），），5 51010分钟后分钟后用水冲洗，滴加第三液（用水冲洗，滴加第三液（0.2g0.2g孔雀绿，蒸馏水孔雀绿，蒸馏水100ml100ml）1 1

48、分钟后分钟后水洗，自然干燥后以油镜观察。卵囊染成橘红色，背景为蓝色。水洗，自然干燥后以油镜观察。卵囊染成橘红色，背景为蓝色。有些杂质可能也染成橘红色，应加以区分。有些杂质可能也染成橘红色，应加以区分。结肠小袋纤毛虫检查法结肠小袋纤毛虫检查法 检查时取新鲜的稀粪一小团，放在载玻片上加检查时取新鲜的稀粪一小团，放在载玻片上加1-1-2 2滴温热的生理盐水混匀，挑去粗大的粪渣，盖上盖滴温热的生理盐水混匀，挑去粗大的粪渣，盖上盖玻片，在低倍镜下检查时即可见到活动的虫体。也玻片，在低倍镜下检查时即可见到活动的虫体。也可以滴加碘液（碘可以滴加碘液（碘2g2g，碘化钾，碘化钾4g4g，蒸馏水，蒸馏水1000

49、ml1000ml）进行染色，若粪样中有肠小袋纤毛虫，则其细胞质进行染色，若粪样中有肠小袋纤毛虫，则其细胞质染成淡黄色，虫体内的含有的肝糖呈暗褐色，核则染成淡黄色，虫体内的含有的肝糖呈暗褐色，核则透明。透明。血液内原虫检查法血液内原虫检查法 寄生于血液中的伊氏锥虫、梨形虫和住白细胞虫，寄生于血液中的伊氏锥虫、梨形虫和住白细胞虫，一般可采血检查。采血部位：牛、羊、猪，犬、猫一般可采血检查。采血部位：牛、羊、猪，犬、猫和兔均可选用耳静脉，小白鼠取尾尖，禽类取翅静和兔均可选用耳静脉，小白鼠取尾尖，禽类取翅静脉。检查方法有以下各种：脉。检查方法有以下各种：1.直接镜检法直接镜检法 将采出的血液滴在洁净的

50、载玻片上，加等量的生将采出的血液滴在洁净的载玻片上，加等量的生理盐水与之混合，加上盖玻片，立即放显微镜下用理盐水与之混合，加上盖玻片，立即放显微镜下用低倍镜检查，发现有运动的可疑虫体时，可再换高低倍镜检查，发现有运动的可疑虫体时，可再换高倍镜检查。为增加血液中虫体活动性，可以将玻片倍镜检查。为增加血液中虫体活动性，可以将玻片在火焰上方略加温。此法适用于检查伊氏锥虫。在火焰上方略加温。此法适用于检查伊氏锥虫。2.2.涂片染色镜检法涂片染色镜检法涂片涂片 采血部位用酒精棉球消毒，再用消毒针头采血，滴于洁净的采血部位用酒精棉球消毒，再用消毒针头采血，滴于洁净的载玻片一端；载玻片一端；另取一块边缘光滑