细胞系和细胞株的建立ppt课件.ppt

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1、篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统Chapter 4 Animal Cell Culture Biology of cells in culture Fluid for cell culture Standard cell culture techniques Establishing a cell line or cell strain Cell freezing and recoveryAnimal Cell Engineering篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系

2、统是一种得分类型的系统Section 5：细胞系和细胞株的建立细胞系和细胞株的建立一、肿瘤细胞的体外培养与建系过程一、肿瘤细胞的体外培养与建系过程以人上皮型鼻咽癌以人上皮型鼻咽癌CNE-2CNE-2细胞系的建立为例细胞系的建立为例问题：问题：具体的建系过程应该包括？具体的建系过程应该包括？篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统1.1.取材取材用鼻咽活检钳从一鼻咽癌患者的鼻咽部肿物获得组织块。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统2.2.原代培养原代培养1）

3、鼻咽部肿物组织放入含青霉素和链霉素的RPMI 1640培养液内，于4下静置2小时。2）然后将组织剪切成1-2mm3的小块。用含青霉素和链霉素的RPMI 1640培养液洗涤后，接种于预先涂有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中。3）37、CO2培养箱内培养2小时后，再补加含20%的小牛血清的RPMI 1640培养液，继续培养。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统3.3.建系过程建系过程组织块在接种1周后，上皮细胞从组织块周围向外迅速迁移和生长，相互连接成片。2周后，可以见到成纤维细胞生长。8周后，上皮细胞生长开始明显加快，并向周围延伸。用

4、胰蛋白酶消化法和刮脱法等手段除掉成纤维细胞。这样处理后的细胞在传代三次后，贴壁生长的细胞呈现上皮状，核清晰可见核仁。2周后细胞形成群落。第4代后细胞开始呈单层生长，命名为CNE-2。CNE-2经生物学特性分析后确定细胞系建立成功篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统克隆细胞株克隆细胞株 v通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的获得的稳定的稳定的、具有特殊性质或标志具有特殊性质或标志的培养物。的培养物。v稳定的特殊标记稳定的特殊标记，如：染色体组型，特殊的染色体，如：染色

5、体组型，特殊的染色体标志或特定的同功酶谱。标志或特定的同功酶谱。v特殊性质特殊性质，如：一定的生化特性，温度敏感突变株，如：一定的生化特性，温度敏感突变株二、二、细胞株细胞株的建立过程的建立过程篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统1.1.细胞克隆技术细胞克隆技术(p59)(p59)v培育细胞株可采用细胞克隆技术。培育细胞株可采用细胞克隆技术。v一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来繁殖而来，分离单一细胞并使其繁殖为一细分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法称为克隆化胞群体的方法称

6、为克隆化(cloning)。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统2.2.细胞克隆培养的技术方法细胞克隆培养的技术方法 稀释铺板法稀释铺板法 饲养层克隆法饲养层克隆法 胶原膜板或血纤维蛋白膜板克隆法胶原膜板或血纤维蛋白膜板克隆法 琼脂克隆法琼脂克隆法 毛细管单细胞克隆法毛细管单细胞克隆法篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统饲养层克隆法饲养层克隆法饲

7、养细胞：一层经过特殊处理的用做克隆细胞底物的细胞层。制备过程过程如下：篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统饲细胞层克隆法篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统琼脂克隆培养篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统3.3.影响影响克隆形成率克隆形成率的因素的因素 接种细胞的密度接种细胞的密度 培养基、血清培养基、血清 饲养细胞饲养细胞 激素和生长因子激素和生长因子 CO2CO2、适应性生长基

8、质、适应性生长基质篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统 原代培养的培养物中所含的细胞类型多而复杂。因此在培养初期，存活和生长的细胞类型也是多种多样的。所以再再培培养养不不仅仅仅仅是是为为了了维维持持细细胞胞不不断断地地生生长长，而而且且是是使使培培养养物物逐逐步步成成为为具具有有增增殖殖能能力力、特特征征专专一一、类类型型均均匀匀的的培培养养细细胞胞，即即细细胞系胞系(或株或株)。三、细胞系（或株）的鉴定三、细胞系（或株）的鉴定篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得

9、分类型的系统1.1.细胞系鉴定指标细胞系鉴定指标当当细细胞胞系系建建立立后后，应应对对细细胞胞系系进进行行一一系系列列鉴鉴定定后后，才才能能应应用用于于细细胞胞生生物物学学、免疫学、细胞遗传学等方面的研究。鉴定内容应包括免疫学、细胞遗传学等方面的研究。鉴定内容应包括:1)1)细胞系的细胞来源细胞系的细胞来源；2)2)细胞系的纯度细胞系的纯度，即除了主类细胞外，还杂有哪类细胞；，即除了主类细胞外，还杂有哪类细胞；3)3)细胞系的稳定性细胞系的稳定性，即细胞连续培养过程中主要指标应无明显变化；，即细胞连续培养过程中主要指标应无明显变化；4)4)累累积积细细胞胞系系的的形形态态及及其其表表达达特特征

10、征的的基基本本数数据据，以以及及其其与与来来源细胞的差异等源细胞的差异等篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统2.2.细胞系的鉴定方法细胞系的鉴定方法1）形态学形态学：活细胞观察；固定染色观察培养细胞。活细胞观察；固定染色观察培养细胞。2）染色体染色体：染色体是一种鉴定细胞系的种属、性别来源较为确切的指标；也是检查细胞系是否趋于稳定，在离体培养条件下细胞有否发生转化的可靠指标；是区别正常细胞与恶性细胞的指标。采用染染色色体体数数目目、核核型型分分析析以及染染色色体体分分带带技技术术检测。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里

11、得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统3）同工酶谱同工酶谱：通常采用通常采用G6PD(葡萄糖葡萄糖-6-磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶)、LDH(乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶)、核苷磷酸化酶三种方法，根、核苷磷酸化酶三种方法，根据条件选择。据条件选择。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统4）细胞细胞DNA遗传特征遗传特征:限制性片断长度多态性(restriction fragment length polymorphism RFLP)是指那些在生物进化过程中，DNA序列发生某些中性突变，突变的结果是失去或获得

12、一个酶切点，因此当基因组DNA用限制性内切酶酶切后，限制性内切酶片断加长或缩短；用同源的克隆DNA为探针可以探测出来。另外也可能在生物进化过程中DNA分子结构发生重排，使DNA碱基排列序列改变，影响内切酶切点,使内切酶酶切片断呈多态性。一般采用Southern印迹杂交法检测。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统细胞转化及恶性程度检查一般利用软琼脂培养法检测篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统四、档案资料的建立及其管理四、档案资料的建立及其管理 细胞系（

13、或株）的建立者细胞系（或株）的建立者 组织来源组织来源 细胞学性状细胞学性状 培养条件和方法培养条件和方法 冻存液等冻存液等篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统建立细胞株（系）的要求组织起源和已经传代的代数冻存液细胞活力培养液：培养基、血清和抗生素融解后细胞生长特性接种存活率细胞形态核型无菌检测：细菌、真菌等物种检测：检测同工酶谱反转录酶检测细胞建立者检测者以美国ATCC细胞库的标准，必须有以下的鉴定数据，才能入库。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统细胞系或细胞株的命名 HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）CHO：中国地鼠卵巢细胞（：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary）宫宫-743：宫颈癌上皮细胞，：宫颈癌上皮细胞，1974年年3月建立月建立NIH3T3：美国国立卫生研究院（：美国国立卫生研究院（National Institute of Health）建立；每）建立；每3天传代，每次接种天传代，每次接种3105细胞毫升。细胞毫升。