FLASH快速制备色谱分离提纯的方法.pptx

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1、快速制备色谱-flash1978年W.C.Still等化学家提出了快速制备色谱这一概念，与传统的柱色谱相比该技术在“一闪间”就可以完成分离纯化，这就是flash一说的由来。第1页/共24页快速制备色谱的原理此图为flash仪器的一个简单构造图第2页/共24页flash与传统柱层析的比较省时 省力 省溶剂紫外检测易判断目标产物 减少点板次数第3页/共24页flash的应用与操作flash正相应用flash反相应用flash仪器操作第4页/共24页flash正相应用一 TLC爬板选择极性和溶解性都较合适的展开剂，并使目标产物的Rf值保证在0.150.3左右为最好左图为某个组份点在某个Rf值出需要多

2、少个cv（柱体积）的溶剂才能洗脱下来一般情况下我们在实际的flash应用中应用的柱体积都会多于这个数据，以保证产物的纯度第5页/共24页flash正相应用二 溶剂的选择为了确保产物既要在TLC板上Rf处于0.150.3也要保证各组份分离度，因此我们在溶剂的选择上也需要尝试不同的配搭。右表为我们在正相柱层析中常用溶剂的极性表展开剂的极性可以根据极性强度和溶剂所占体积百分比计算得出eg:正己烷：乙酸乙酯（1：1）=0.5*0.01+0.5*0.58=0.3正己烷：二氯甲烷（3：7）=0.3*0.01+0.7*0.42=0.3第6页/共24页flash正相应用三 flash柱的选择和上样量的关系公司

3、现在常用的flash正相柱为奥秘科技公司生产的柱子，其装柱的填料为普通硅胶目数为200300目，规格有4g、12g、20g、40g、80g、120g等.根据样品的质量可选择相对应的，一般柱子最大载样量为该柱子硅胶量的1/20,即20g的柱子一般最多为1克的粗品，在实际的应用中还应根据各组份的分离程度和溶解性等来判断具体的上样量.第7页/共24页flash正相应用四 上样方法的选择 湿法和干法湿法上样：一般样品的溶解性较好时可以采用湿法上样，湿法上样具有方便损失少的特点。但必须注意湿法上样的溶剂必须是淋洗剂中极性较小的溶剂或掺入百分比较少的极性溶剂，否则组份将很容易被洗脱下来。且溶剂量不宜超过柱

4、体积的10%干法上样：绝大多数的样品我们都采用干法上样，干法上样所要注意的是，硅胶量和规格的选择。硅胶量控制在是样品的12倍，硅胶规格选择上尽量和柱子的目数一样的200300的硅胶，切记当样品比较难以拌匀拌干时请选择100200目硅胶，主要是因为当你拌样硅胶越多时整个柱子的压力就会上去，以免出现仪器过压现象！第8页/共24页flash反相应用一 反相的原理 反相填料是在硅胶基质上键合的诸如C4,C8,C18脂肪链的非极性填料。非极性或疏水性化合物被强烈保留，而极性样品被弱保留，更快的通过柱床。“反相”用来描述其色谱过程与正相色谱正好相反。第9页/共24页flash反相应用二 反相色谱的流动相常

5、用的流动相为水和乙腈或水和甲醇，偶尔我们也会采用水和四氢呋喃。在水相中我们一般都会滴加些弱酸弱碱，把整个体系调至偏酸偏碱，以保证组份能起峰。常用的弱酸弱碱是甲酸、三氟乙酸，氨水，碳酸氢铵等，所加的百分比一般与液质体系相同。第10页/共24页flash反相应用三 反相柱的选择 公司现在用的反相柱大多是自己装填的（进口填料加国产这柱套），现成的成柱也有，为国产柱，效果上比自填柱稍差，但其有价格优势！这些都可以在在公司采购平台上可以询价订购。一般我们经常用的反相柱规格为40g,其上样量一般在200mg左右。第11页/共24页flash反相应用四 反相样品的上样 反相上样我们一般都采用液体上样，一般用

6、水，甲醇，四氢呋喃，乙腈，DMF,DMSO等溶剂来溶解样品。选取能使样品溶解状态最好的溶剂溶解！最好是100mg样品能溶解在1ml溶剂中为佳！样品中的重金属和催化剂以及一些与水不互溶的正相溶剂都要处理掉，才能上反相柱子。第12页/共24页flash反相应用五 梯度编辑反相的梯度设置与正相不同，我们无法通过点板也确定，只能靠液质上的保留时间来设置来设置梯度。液质一般采用的一个线性梯度5%至95%（流动相是水和乙腈），根据目标峰的保留时间推算出该峰起来时的乙腈含量，由于液质使用的柱子粒径一般为3um3.5um，而反相柱所用的填料粒径是4060um，粒径越小保留性越好，所以在反相柱上它的出峰浓度会比

7、液质上小。第13页/共24页flash仪器操作公司现有2种型号的flash 仪器ISCO COMPANIONBIOTAGE SPI2种仪器的原理是一样的，各有其优缺点.主要的区别在与软件操作上的不一样！第14页/共24页ISCO COMPANION的操作仪器开机之后会进入这样一个工作界面第15页/共24页ISCO COMPANION的操作编辑具体详细的方法应点击edit method 进入编辑菜单，界面如下第16页/共24页ISCO COMPANION的操作 此界面就是具体方法编辑菜单第17页/共24页ISCO COMPANION的操作旋钮水平说明上管路是通的旋钮垂直说明上管路是关闭的第18页

8、/共24页ISCO COMPANION的操作查看结果，提取方法（点open）；保存方法；导出结果在File选项里选择第19页/共24页ISCO COMPANION的操作点击open后可根据样品的名字以及日期，打开你所需的结果。第20页/共24页ISCO COMPANION的操作这是一个样品过完之后的结果图，不同颜色代表不同峰下试管组份第21页/共24页ISCO COMPANION的操作点击tools主要用于冲洗柱子和系统，点击manual control 进入以下界面第22页/共24页ISCO COMPANION的操作这里有冲洗流动相和空气，前者是用于冲洗系统和柱子，后者是用于压干体系和柱子第23页/共24页感谢您的观看！第24页/共24页