医学标书例文.doc

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1、河河南南省省科科技技攻攻关关计计划划项项目目申申 请请 书书姓姓 名：名： XXX 项目名称：项目名称： *相关研究相关研究 单单 位：位： * 联系电话：联系电话： 填填 报报 说说 明明请根据自己的专业及研究方向，针对某具体临床问题，结合所学习临床科研方法的一种或几种写出一份科研设计。完成后，文件以个人姓名命名，发至：。考核成绩依设计书优略评定。截至日期 2013 年 11 月 8 日。一、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）1全国肿瘤登记地区膀胱癌发病率为 7.49/10 万，世界人口标化发病率（世

2、标 率）为 4.53/10 万，膀胱癌居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第 1 位, 居中国恶性肿瘤发病率第 8 位，居中国男性恶性肿瘤发病率第 6 位 ，全国肿 瘤登记人口膀胱癌发病率,呈现逐年增长趋势1 。孙思邈千金要方卷 一诊候：“古之善为医者，上医医未病之病，中医医欲病之病，下医医 已病之病。在医学如此高速发展的今天，我们显然不会满足大多数“发现无 痛性肉眼血尿-进行膀胱镜检-再行手术切除膀胱灌注”的这一套最常见 的膀胱癌诊治流程。介入科韩新巍教授说过未来医学是微创和介入医学的为 主导的，内外科为辅助的医学。显然对 miRNA 的探求能对膀胱癌的诊治带来 前所未有的契机。微小核糖核酸（

3、microRNA ，miRNA）在转录后水平对基因 的表达进行调控。miRNA 在膀胱癌的演进过程中发挥着类似于癌基因或抑癌 基因的作用。目前研究表明，对 miRNA 的调控可为临床膀胱癌的诊治提供一 个新的靶点，提高膀胱癌患者的远期生存率和生活质量2 。 1：关于关于miRNAmiRNA: miRNAs 是一类大小为19个25个碱基的单小分子RNA。在细 胞核内，它本身不编码蛋白，但是可调节其他基因的翻译表达。miRNA 初级 产物在RNA 聚合酶 作用下合成miRNA 转录前体（PrimiRNA） ，然后经 RNA 聚合酶 （Drosha 酶）和DGCR 蛋白加工后，形成发卡环结构的 mi

4、RNA 前体（Precursor miRNA ，premiRNA），最终被转运体Exportin 转 运至细胞质，由核酸酶Dicer 剪切形成RNA 诱导的沉默复合体 （RNAinduced silencing complex ，RISC）。miRNA 通过与靶mRNA 特异 碱基配对而引起靶miRNA 的降解或翻译抑制，在转录后水平调控基因表达， 从而调控肿瘤细胞的增殖和凋亡 。细胞可分泌含miRNA 的复合物进入体液， 如尿液、血液、唾液、母乳 。一种miRNA可靶向一个或者多个mRNA ，多种 miRNA 也可同时靶向一个mRNA。因此，异常表达的miRNA 不仅能致癌而且有 肿瘤抑制的

5、功能。 2 2：miRNAmiRNA与膀胱癌的关系的研究趋势及范围与膀胱癌的关系的研究趋势及范围表表1 1：部分膀胱癌相关：部分膀胱癌相关miRNAsmiRNAs 的差异表达（数据来源于的差异表达（数据来源于miRNAs 在膀胱癌诊治中的研究进展在膀胱癌诊治中的研究进展） miRNA miRNA 表达变化 推测靶基因 miRNA-a 上调 PTEN miRNA- 上调 miRNAa 下调 FOXA miRNA 下调 IncRNA UCA miRNA 下调 FOXM miRNA 下调 PAK miRNA 下调 miRNA 下调 ADAM miRNAb 下调 SIRT，MALAT2表表 2：miR

6、NA 表达水平变化与膀胱尿路上皮癌的关系表达水平变化与膀胱尿路上皮癌的关系33表 3：miRNA 家族的一些机制细分43.国内外相关研究成果I：miRNA 与膀胱癌早期诊断的一些研究发现 Tolle 等在血液中和尿液中不同表达的miRNAs 来发现膀胱癌，采用数据 库来源于the Sanger database v 的基因芯片分析，在血液中， miRNAbp 、miRNAp 、miRNAp 在浸润 性膀胱癌中高表达，而且miRNAbp 特异度为 ，敏感度为 。在尿液中miRNA 、miRNAbp 在浸润性膀胱 癌中高表达，而且miRNAbp 特异度为 ，敏感度为 。由此推断，根据血液、尿液中一

7、些特异的根据血液、尿液中一些特异的miRNAsmiRNAs 来诊断浸润性膀来诊断浸润性膀 胱癌成为一种可能胱癌成为一种可能4。 Zhang等检测 例膀胱癌患者手术标本的癌组织和邻近正常组织 miRNA 表达水平，分析它们与临床病理参数和预后评估相关性。结 果显示肿瘤组织miRNA 的表达水平显著高于相应的非癌组织（ P ） 。KaplanMeier 分析表明，具有较高miR表 达水平的患者与低表达水平患者相比较， 年生存率分别为 和 。其中包括miRNA 过表达，肿瘤病理分级，肿瘤 分期和肿瘤数目的多变量Cox 回归分析，miRNA 的过表达与较差存 活率独立相关（HR ， CI ： ，P ）

8、 。miRNAmiRNA 的过表达提示膀胱癌预后不良的过表达提示膀胱癌预后不良， 并且可以被用来作为警示预后不良的生物标志物5。 Feng 等利用Taqman 探针茎 环法PCR 精确测量 对患者的膀胱 癌组织、相邻的非肿瘤组织、膀胱癌患者和正常人对照的血浆miRNAa 水平。用miRNAa 模拟和抑制剂转染膀胱癌细胞。结果发现 miRNAa 在膀胱癌组织中显著上调，而且miRNAa 的表达水平与 癌细胞的侵袭能力相对应。同时，获得或丢失miRNAa 的功能性试验印 证了它可能在膀胱癌的发展中起癌基因作用。此外，膀胱癌患者的血浆中检 出的miRNAmiRNAa a 支持发展为膀胱癌的潜在诊断标

9、记物支持发展为膀胱癌的潜在诊断标记物。另一组研究者利用 互补的反义核酸转染到原先上调的miRNAs，发现其表达明显受到抑制，并检 测出肿瘤细胞增殖明显减缓6。Zhu 等通过小干扰RNA（siRNA）和miRNA 介导的IGFIR 的敲除 实验揭示了miRNAmiRNA 促进癌细胞凋亡促进癌细胞凋亡，进一步分析发现主要通过影响 的IGFIR 信号传导，以抑制IGFIR 的表达，抑 制癌细胞增殖和迁移，起到抑癌基因的作用起到抑癌基因的作用。另一组研究者发现膀胱癌中 miRNAa 、miRNA 、miRNA 、miRNA 均体现 为抑癌基因的作用。他们采用转染的方式上调其表达，发现癌细胞增殖、分 化

10、能力明显受抑制，而且侵袭、迁移能力也减弱，印证了它抑癌基因作用的 推测7.（检测出来了说明对于膀胱癌患者是好的）（检测出来了说明对于膀胱癌患者是好的）5II:miRNA 与膀胱癌的治疗Li 等研究发现，以顺铂为基础的化疗诱导了 miRNAmiRNAa a 的启动子去 甲基化，增加 miRNAa 的表达，反过来增强了肌层侵入性膀胱癌细胞增强了肌层侵入性膀胱癌细胞 对顺铂的敏感性，降低了癌细胞侵袭性和增殖能对顺铂的敏感性，降低了癌细胞侵袭性和增殖能力力8 。Kozinn 等根据 miRNAs 的变化来预测是否对吉西他滨有抵抗性，研究结 果提示 miRNAmiRNA 、miRNAmiRNA 、miR

11、NAletmiRNAleti i 、miRNAletmiRNAletb b 通过调节黏蛋白通过调节黏蛋白 ，使吉西他滨产生耐药性，使吉西他滨产生耐药性。由此设想， 通过调控的特定 miRNAs 的表达或者影响其上游基因信息传递通路，可以增 强膀胱癌化疗的敏感性以及减少其耐药性9 。把表达 p 基因的腺病毒载体和靶向于 CDKNA 基因的人工 miRNAmiRNA 转转 染进入癌细胞可增加癌细胞对阿霉素的化疗敏感性染进入癌细胞可增加癌细胞对阿霉素的化疗敏感性；miRNAmiRNA 的表达的表达 增加可通过靶向增加可通过靶向 DNADNA 修复酶位点增强肿瘤细胞在辐射中的敏感性修复酶位点增强肿瘤细

12、胞在辐射中的敏感性10.为解决临床膀胱癌患者对顺铂耐药的问题，Drayton 等研究发现 SLCA 基因的表达与 miRNAa 的表达呈负相关，当 miRNAa 高表达或者通过 siRNA、柳氮磺胺吡啶降低 SLCA 基因的活性时，耐药 的膀胱癌细胞株的致敏性得以恢复，由此可推测 miRNAmiRNAa a 可作为治疗可作为治疗 膀胱癌患者对顺铂耐药的一条途径膀胱癌患者对顺铂耐药的一条途径11 。 4 4：选取自己感兴趣的：选取自己感兴趣的 mi-RNAmi-RNA 家族成员进行研究家族成员进行研究相关研究表明 mi-RNA99a 作为一个肿瘤抑制因子，在膀胱癌中水平降低，有 降低尿路上皮癌侵

13、袭性可能。其他相关研究：mi-RNA 在人类可以通过靶基因 mTOR 促进食管鳞状细胞的凋亡12 ，mi-RNA 的低表达也能促进口腔鳞癌 细胞的增殖13 。那么它的高表达是否意味着膀胱癌患者癌细胞同样受到抑 制，提示着患者预后较好？或者依据 miRNAs 表达的时序性和组织特异性特 征，可以探索膀胱癌各个发展阶段中的特定 miRNA 表达谱，用于判断膀胱癌 恶性程度和临床分期？或者是提前通过测量其相关调控基因产物预测患者患 膀胱肿瘤风险？或者是了解它的表达是否能增强治疗膀胱肿瘤药物的敏感性 及耐药性等？我选取一个比较小的研究点：我选取一个比较小的研究点：研究可以反其道而行之，根据临床上已经确

14、诊的膀胱癌的标本或者细胞株来 测量 mi-RNA 的含量，同时测量一定标本正常人群 mi-RNA 的含量，来推测膀 胱尿路上皮癌各个发展阶段中的特定 miRNA 表达谱是否与膀胱癌恶性程度和 临床分期存在着某些统计学上的联系。1：韩苏军, 张思维，陈万青，李长岭。中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析。中国医学科学院肿瘤医院肿瘤 研究所，泌尿外科。62：梁敏，王海峰，王剑松。 miRNAs 在膀胱癌诊治中的研究进展 。医学与哲学 2015 年 6 月第 36 卷第 6B 期总第 527 期。3孙阳综述,郭剑明审校.miRNA 调控与膀胱癌的关系研究进展 。International Journal

15、of Urology and Nephmlogy。Jan 201 1V0131 NOI4Tolle A ，Jung M ，Rabenhorst S ，et al Identification of microRNAs in blood and urine as tumour markers for the detection of urinary bladder cancerJ Oncol Rep ，2013 ，30（4） ：1949 1956 5Zhang D Q ，Zhou C K ，Jiang X W ，et al Increased expression of miRNA222 is

16、associated with poor prognosis in bladder cancer J World J Surg Oncol ，2014 ，12 ：241 6张 明，魏 巍，刘禄成，等反义微小RNA21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响J 吉林大学学报：医学 版，2010 ，36（3）：450 452 7张 超，姚志勇，朱鸣阳，等microRNA34a 通过 Notch 对膀胱肿瘤细胞株 T24 增殖的影响J 解放军医 学杂志，2012 ，37（5） ：426 430 8Li H ，Yu G ，Shi R ，et al Cisplatininduced epigenetic acti

17、vation of miR34 a sensitizes bladder cancer cells to chemotherapy J Mol Cancer ，2014 ，13（1） ：8 9Kozinn S I ，Harty N J ，Delong J M ，et al MicroRNA Profile to Predict Gemictabine Resistance in Bladder Carcinoma Cell Line J Genes Cancer ，2013 ，4（1 /2） ：61 -69 10Josson S ，Sung S Y ，Lao K ，et al Radiatio

18、n modulation of microRNA in prostate cancer cell linesJ Prostate ，2008 ，68（15） ：1599 1606 11Drayton R M ，Dudziec E ，Peter S ，et al Reduced Expression of miRNA27 a Modulates Cisplatin Resistance in Bladder Cancer by Targeting the CystineGlutamate Exchanger SLCAJ Clin Cancer Res ，2014 ，20（7） ：1900 200

19、012Sun J, Chen Z, Tan X, Zhou F, Tan F, Gao Y, Sun N, Xu X, Shao K, He J:MicroRNA-99a/100 promotes apoptosis by targeting mTOR in human esophageal squamous cell carcinoma. Med Oncol 2013, 30:411.13Yan B, Fu Q, Lai L, Tao X, Fei Y, Shen J, Chen Z, Wang Q: Downregulation of microRNA 99a in oral squamo

20、us cell carcinomas contributes to the growth and survival of oral cancer cells. Mol Med Rep 2012, 6:675681.二、项目创新点、主要研究开发内容及目标（实施方案、技术关键、技术路线和技术经济指标等）二、项目创新点、主要研究开发内容及目标（实施方案、技术关键、技术路线和技术经济指标等）7实施方案：通过实验测量膀胱癌标本不同临床分期，病理分期 mi-RNA 含量，同时测量一定标本正常人 群 mi-RNA 的含量，来推测膀胱尿路上皮癌各个发展阶段中的特定 miRNA 表达谱是否与膀胱癌恶性程度 和临

21、床分期存在着某些统计学上的联系。 1：技术经济指标哺乳动物血清中循环核酸表达水平稳定，检测的可重复性良好，具有作为肿瘤标志物的潜 力1 。尿液、粪便甚至毛发，也是临床上易于获得的检测样本。如果能找到相应的 miRNAs 表达谱，又具有较高的敏感性和特异性，来作为膀胱癌诊断的生物标记物，替代目 前的有创性检查，将是巨大的突破。最终我们希望通过大量实验证实：可以依据 miRNAs 表达的时序性和组织特异性特征，探 索膀胱癌各个发展阶段中的特定 miRNA 表达谱，用于判断膀胱癌恶性程度和临床分期，从 而为诊治提供依据。 2：技术路线 i：选取实验对象：选取实验对象：选取我院住院患者中 40 例（便

22、于统计学检验）正常膀胱粘膜上皮组织 （可取材于成人尿道下裂手术） ，选取 50 例已经确诊为膀胱癌患者的手术标本（可非浸润 性 I,II,III 级各 10 例，浸润性标本 20 例，需由病理科配合完成） 。沟通患者签署研究知情同 意书，研究方案交医院伦理委员会批准。ii：组织总：组织总 RNA 的提取及质量检测：的提取及质量检测：从上述组织标本中取 50 100 mg 组织块以提取总 RNA，组织块在液氮中研磨成粉末状后倒入匀浆器中，加 1 ml TRIzol （TRIZOL 是一种新型 总 RNA 抽提试剂）处理，然后倒入 Ep 管中，12 000 r /min，4离心 20 min 后取

23、上清，按 照 Invitrogen 公司的 TRIzol 使用说明书提取总 RNA。甲醛变性胶电泳检测总 RNA 质量.iii：逆转录：逆转录 cDNA 合成，定量合成，定量 PCR: 采用 50 l 反应体系:5 l 模板( 逆转录产物)，4 l 引物混合物(10 pmol /l)，25 l 2 SYBR Green，16 l 水。反应条件:95 15 min;95 15 s，56 20 s，68 20 s，扩增 40 个循环;95 1 min，56 1 min，95 1 min，采集熔解 曲线.iv：实时定量反转录聚合酶链反应：实时定量反转录聚合酶链反应(RTqPCR)检测检测 miRNA

24、-99a 的相对表达量的相对表达量vi：基因表达水平计算：基因表达水平计算：以 CT （ CT 标本目的基因 CT 值标本内参基因 CT 值）表示样本中目的基因的相对表达量， CT 越高，表达量越低。vii：统计学处理：统计学处理： 用 SPSS 软件对数据进行统计，对其肿瘤组织中 mi-RNA99a 表达量（Ct 值）进行独立样本的 t 检验。相关性采用 Spearman 相关分析。对肿瘤恶性程度（G1-G2 和 G3)，肿瘤的临床分期（I-II 和 III-IV)分组不同的无进展生存期差异,进行 log-rank 检验, 并分别采用 Kaplan-Meier 方法绘制生存曲线；多因素分析釆

25、用 Cox 比例风险回归模型进行 分析。将单因素分析中有统计学意义的临床病理因素：临床分期、mi-RNA99a 表达量纳入 Cox 比例风险回归模型进行综合分析,变量筛选采用逐步向前回归法,以 PS 0. 05 为纳入标 准，P0. 10 为剔除标准。可简单绘制如下统计表格：可简单绘制如下统计表格：RTqPCR 检测膀胱上皮癌和正常膀胱上皮组织中差异 mi-RNA99a 基因的表达（xs）标本分组 标本数 mi-RNA99a基因的表达检测值 正常 20 分级 I级 10II级 10III级 10 分型浸润性 20 非浸润性 30 1李先承，李秀男，宋希双MicroRNA 与实体肿瘤关系的研究进

26、展J 大连医科大学学报， ，（） ： 8三、实施本项目已具备的条件（说明已具备的试验手段、技术力量、前期科研基础情况）三、实施本项目已具备的条件（说明已具备的试验手段、技术力量、前期科研基础情况）91：检测：检测 miRNA 的方法的方法：目前已经开发出多种 miRNAs 的表达检测手段，如 Northem blotting 、实时定量 PCR （RT-PCR） 、基因芯片技术等。Northem blotting 是基于 分子杂交的检测技术，它是最先运用于 miRNAs 的半定量检测，视作该检测的金标准1 。 RT PCR 是现今 miRNAs 应用得最广泛的定量检测方法，其中常用的有 pol

27、yA 聚合酶加尾法 和茎环法（stemloop） 2 。通过对比这两类基于 PCR 技术的 miRNAs 定量检测方法的基 本原理和试验流程，比较了它们技术间的异同，认为茎环引物法能够检测到pg miRNAs,而加尾法能检测到pg 的 miRNAs ，前者的灵敏性更高。基因芯片技术（DNA microarray） ，其工作原理也是通过分子杂交进行定性与定量分析。但是基因芯片可以一 次性分析数万个基因，进行 miRNAs 高通量筛选和分析。并可以经实时定量基因扩增荧光 检测系统（QRPCR）验证膀胱癌组织差异表达的 miRNAs。最近，也有研究者运用荧光 DNA 探针技术来分析成熟 miRNAs

28、3 。现今 miRNA 调控与膀胱癌的关系研究着眼于表达 谱研究(miRNA profile)及功能性实验（functional experiment)。表达谱研究指已知正常组织 细胞中表达的特定多个 miRNA，比较相关肿瘤组织(如膀胱内正常尿路上皮对应尿路上皮 癌组织)内这些 miRNA 表达水平的变化4 。功能性实验旨在确定某些 miRNA 是否调控已 知原癌或者抑癌基因的表达，即确定 miRNA 调控的靶点5 。 2: 科研技术力量：科研技术力量：郑州大学河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室为河南省 级医学研究实力较强的科研机构，成立以来每年可支配大量科研经费，拥有许多具有硕士 或

29、博士学位的专业技术人员和完成该实验所需的大型仪器。统计处理方案方面可以请教公共卫生学院的各位资深统计学者作指导。医学院研究方面与一附院合作紧密。通过病理科资深专家和泌尿外科手术室的协助， 可谓是如虎添翼。 3：前期科研基础：前期科研基础：人员：人员：资深病理学家对膀胱癌患者标本的采集，专业从事 mi-RNA 基础研究的基础医学院 学者，专业的公共卫生学院的统计学者，娴熟泌尿外科手术专家财政：财政：可以申请专门的实验经费来完成这个项目，国家自然基金，青年基金，学校科研部 门经费的支持等。硬件环境硬件环境：专业的现代化分子研究实验室，各种现代化研究大型仪器已完成科研成果已完成科研成果：相关专家对于

30、 mi-RNA 家族其它部分成员有深刻的研究，对于试验中发 现的新的生化指标应用于临床诊治有着一套熟悉的流程，科学的推断，严谨的论证。这些 资料可以通过文献获得。、1Cissell K A ，Deo S K Trends in microRNA detectionJ Anal Bioanal Chem ，2009，394（4）：1109 10162陈新，曾长英，卢 诚，等基于 PCR 技术的 miRNA 定量检测方法J 。中国生物工程杂志， 2010 ，30（11） ：88-93 3Kato Y An efficient fluorescent method for selectivedete

31、ction of mature miRNA speciesJ Nucleic Acids SympSer （Oxf） ，2008，52 （1） ：71-724Volinia S，Calin GALiu CG。el a1A microRNA expression siguature of human solid tumors de?nes cancer gene targetsProc Nail Acad Sci USA。2006。103：2257226I5Lindow MGorodkin JPrinciples and limitations of computationalmicroRNA

32、gene and target?ndingDNA Cell Biol。2007。26：33935110四、项目的预期经济、社会和环境效益四、项目的预期经济、社会和环境效益11目前，膀胱癌的发病率在世界范围内有上升趋势，这种变化在我国尤其明 显。关于癌症发病机制、转移、复发等基础方面的研究发展迅速。miRNAs 在膀胱癌中抑制或者促进癌症演变的报道越来越多，其具体作用机制尚不了 解。但是，随着基因芯片和生物信息学技术的发展，为 miRNAs 的研究提供 了难得的机遇。研究方向上，深入探讨 miRNAs 作用机制仍是主要任务之一， 应注重系统性研究，确定重要 miRNAs 的位点基因，研究不同 m

33、iRNAs 的协 作机制，开发用于诊断与预后评估的特异 miRNAs 谱。我们相信，随着研究 的逐步深入， miRNAs 参与生命活动的分子机制将会更加明朗。 这将为寄予厚望的分子诊断和靶向治疗提供新的切入点，为膀胱癌的预后判 断提供有力的科学依据。miRNA 的研究前景是广阔的，相比现在膀胱癌的诊疗，miRNA 带来了以 下可能性： 为膀胱癌的分级、分期提供了新的参考； 在基因治疗基础上提供了可能的治疗新靶点； 可以更全面地分析病情，了解预后。但尚有不足，首先很多 miRNA 未被发现，且确切调控机制仍然未明，很 多 miRNA 的功能存在争议。其次在诊断方面，需取膀胱上皮组织做 miRNA

34、 分 析，在病理可以明确的情况下显得不是很必要，需探寻易得可测的标本，如 血标本,尿标本。最后对膀胱癌演进过程中的 miRNA 研究过少，仍有许多问 题值得深入探索。例如：膀胱癌中特异表达的 miRNA 谱、miRNA 靶基因的 确定、miRNA 在膀胱癌的发生发展中的作用及机制等。随着对膀胱癌 miRNA 研究的逐步深入，可预期 miRNA 在未来可运用于膀胱癌的临床诊断及靶基因 治疗。本课题的的顺利完成，不仅为膀胱癌发病机制的研究提供了新的线索， 而且，为膀胱癌的生物学治疗探索了一种有效的新方法，并为最终过渡到临 床应用提供强有力的实验依据，具有较好的经济效益和社会效益。本课题的 进行不会

35、造成对环境的污染，并充分利用现有的综合资源包括：泌尿外科研 究所的的实验室、仪器设备、已积累的组织标本和病例资料、已经进行的与 本课题有关的预实验基础等。12五、项目实施的计划进度五、项目实施的计划进度2015-11 月至 2016-06 月系统统计大量患者，随机选择出实验对象。2016-06 月至 2016-12 月对实验对象的标本进行采取，收集，处理。2016-12 月至 2017-07 月进行正式实验。2017-07 月至 2017-10 月进行实验数据的整理，文章的写作过程。六、经费概算六、经费概算131：实验耗材费用（参考文献）：实验耗材费用（参考文献）采集标本所需的载玻片，标本袋等

36、TRIzol 购自 Invitrogen 公司;poly(A)聚合酶购自 Ambion 公司;Impro 逆转录酶购自 Promega 公司；RNA 酶抑制剂购自 TaKaRa 公司;实时定量 PCR 试剂盒购自 Qiagen 公司;荧光定量 PCR 仪（美国 BioRad 公司， ）高速冷冻离心机（美国 ThermoForma 公司，D ）miRNA 芯片由美国 LC Sciences 公司完成;引物为上海生工公司合成;其他试剂均为进口分装或国产分析纯。2.实验过程中实验人员的交通，出行以及与技术人员交流所消耗的费用；实验过程中实验人员的交通，出行以及与技术人员交流所消耗的费用；3.实验结束后发表文章投稿过程中审稿等费用。实验结束后发表文章投稿过程中审稿等费用。