《昆虫杆状病毒载体》PPT课件.ppt

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1、昆虫杆状病毒表达系统昆虫杆状病毒表达系统高遄高遄高遄高遄 生物化学与分子生物生物化学与分子生物生物化学与分子生物生物化学与分子生物 21204222120422原核细胞系统原核细胞系统l大大肠杆菌杆菌细胞胞操作简便周期短、收益大表达产物稳定相对分子质量有限不能对表达产物进行一些翻译后加工、修饰体外基因体外基因表达系统表达系统真核细胞系统真核细胞系统 l哺乳哺乳动物物细胞胞l酵母酵母细胞胞l昆虫昆虫细胞（胞（杆状杆状病毒表达系病毒表达系统）独特特性前言前言高表达高表达低成本低成本安全性高安全性高大大规模生模生产前言前言v昆虫杆状病毒表达系昆虫杆状病毒表达系统是目前国内外十分推崇的是目前国内外十分

2、推崇的真核表达真核表达系系统。利用杆状病毒。利用杆状病毒结构基因中构基因中多角体蛋白多角体蛋白的的强启启动子子构构建的表达建的表达载体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。平的表达。v具有具有高效表达高效表达、基因克隆容量大基因克隆容量大、重重组病毒易于病毒易于筛选、安安全性高全性高、且有完、且有完备的的翻翻译后加工修后加工修饰系系统等特点，等特点，现已成已成为基因工程四大表达系基因工程四大表达系统之一。之一。v利用利用该表达系表达系统获得重得重组蛋白可用于蛋白可用于药物开物开发、疫苗生、疫苗生产、生物生物杀虫虫剂等多个等多个领域。据文献域。据

3、文献统计，已有，已有1000 余种外余种外源基因在昆虫杆状病毒表达系源基因在昆虫杆状病毒表达系统中得到了成功地表达，其中得到了成功地表达，其中中约有有95%的外源重的外源重组蛋白能蛋白能够被正确的被正确的转译后加工修后加工修饰，具有与天然蛋白相同的生物活性。，具有与天然蛋白相同的生物活性。昆虫杆状病毒表达系统昆虫杆状病毒表达系统2.2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点3.3.昆虫杆状病毒表达系统的应用昆虫杆状病毒表达系统的应用昆虫杆状病毒表达系统的应用昆虫杆状病毒表达系统的应用1.1.昆虫杆状病毒表达系统的构成昆虫杆状病毒

4、表达系统的构成昆虫杆状病毒表达系统的构成昆虫杆状病毒表达系统的构成4.4.参考文献参考文献参考文献参考文献1.昆虫杆状病毒表达系统的构成昆虫杆状病毒表达系统的构成1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体1.2 昆虫细胞宿主昆虫细胞宿主表达体系表达体系1.昆虫杆状病毒表达系统的构成昆虫杆状病毒表达系统的构成表达表达过程程1.将外源目的基因将外源目的基因插入插入到启到启动子下游子下游2.与杆状病毒与杆状病毒重重组，获得重得重组病毒病毒3.将重将重组的病毒的病毒纯化化4.感染感染昆虫昆虫细胞或虫体胞或虫体5.外源基因随着病毒的复制而外源基因随着病毒的复制而获得得表达表达1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体v杆状

5、病毒杆状病毒简介介v杆状病毒是研究杆状病毒是研究细胞分子生物学的重要工具，同胞分子生物学的重要工具，同时也是外源基也是外源基因在昆虫因在昆虫细胞中表达的胞中表达的载体。杆状病毒只来源于体。杆状病毒只来源于无脊椎无脊椎动物物，已已发现600多种多种杆状病毒，其中杆状病毒，其中仅有不到有不到20 种种进行了分子生行了分子生物学研究。物学研究。v杆状病毒的基因杆状病毒的基因组为单一一闭合合环状双状双链DNA 分子，分子，大小大小为80 160kb，其基因，其基因组可在昆虫可在昆虫细胞核复制和胞核复制和转录。DNA 复制后复制后组装在杆状病毒的核衣内，后者具有装在杆状病毒的核衣内，后者具有较大的柔大的

6、柔韧性，可性，可容容纳较大片段的外源大片段的外源DNA 插入，因此是表达大片段插入，因此是表达大片段DNA 的理的理想想载体。其中体。其中,用作外源基因表达用作外源基因表达载体的杆状病毒，目前体的杆状病毒，目前仅限限于于核型多角体病毒核型多角体病毒(nuclear poly hedrosis virus,NPV)。1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体v现已知基因已知基因组全序列的杆状病毒全序列的杆状病毒仅有有7 种种:苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)(AcMNPV)家蚕核多角体病毒家蚕核多角体病毒(BmNPV)(BmNPV)黄杉毒蛾多核衣壳核多角体病毒黄杉毒蛾多

7、核衣壳核多角体病毒(OpMNPV)(OpMNPV)舞毒蛾多核衣壳核多角体病毒舞毒蛾多核衣壳核多角体病毒(LdMNPV)(LdMNPV)甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病毒甜菜夜蛾多核衣壳核多角体病毒(SeMNPV)(SeMNPV)棉铃虫核型多角体病毒棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)(HaNPV)斜纹夜蛾核型多角体病毒斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)(SpltMNPV)1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体vAcMNPV 是昆虫杆状病毒表达系是昆虫杆状病毒表达系统中最常用的中最常用的载体，基因表达分体，基因表达分为4 个个阶段段:立即早期基因表达立即早期基因表达、早期基因表达早期基因表达、晚期基因

8、表达晚期基因表达和和极晚期基因表极晚期基因表达达。早于早于DNA 复制复制 病毒病毒DNA 合成合成v多角体蛋白多角体蛋白是形成包含体的主要成分，感染后期在是形成包含体的主要成分，感染后期在细胞中的胞中的积累可高达累可高达30%50%，是病毒复制，是病毒复制非必需成分非必需成分，但，但对病毒粒子却有病毒粒子却有保保护作用作用，可使之保持可使之保持稳定和感染能力。定和感染能力。vP10 蛋白蛋白为另一另一类高效表达的极晚期蛋白，也是一高效表达的极晚期蛋白，也是一类病毒复制病毒复制非必需成非必需成分分，可在，可在细胞中形成胞中形成纤维状物状物质，可能与，可能与细胞溶解胞溶解有关。有关。理想的外源基

9、理想的外源基因插入位点因插入位点1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体v载体重体重组原理：原理是人原理：原理是人为将杆状病毒多角体蛋白两翼序列的将杆状病毒多角体蛋白两翼序列的同源序列引入含外源基因的同源序列引入含外源基因的质粒粒载体中，通体中，通过同源重同源重组方式来方式来实现外源基因外源基因对病毒多角体蛋白基因的替病毒多角体蛋白基因的替换。v由于杆状病毒分子由于杆状病毒分子质量量约为134kb，不能利用，不能利用多克隆位点多克隆位点（酶切切连接）接）进行基因重行基因重组，只能利用杆状病毒和，只能利用杆状病毒和带有外源基有外源基因的因的质粒粒载体体进行行共共转染染（转移移载体的介体的介导）。）。多克

10、隆位点：DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有多个限制内切酶识别位点。能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。共转染：物理上不相连的基因被整合到同一整合序列并在同一转染细胞内表达的现象。1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体杆状病毒杆状病毒载体的重体的重组将极晚期基因将极晚期基因(如多角体基因及其如多角体基因及其边界区界区)克隆克隆入入细菌的菌的质粒粒中中消除消除其其编码区和不合适的区和不合适的酶切位点切位点保留保留其其5c端端对高效表达必需的高效表达必需的调控区控区在下游在下游引入引入合适的合适的酶切位点供外源基因的插入，即得到切位点供外源基因的插入，即得到转移移载体体。将要表达的外源基因

11、将要表达的外源基因插入插入其启其启动子下游子下游与野生型与野生型AcNPV DNA 共共转染染昆虫昆虫细胞胞通通过两两侧同源同源边界区在体内界区在体内发生生同源重同源重组，使多角体蛋白基因，使多角体蛋白基因被外源基因取代。被外源基因取代。1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体杆状病毒杆状病毒载体的体的筛选v由于由于多角体基因多角体基因被破坏，被破坏，则不能形成多角体。不能形成多角体。这种表型在种表型在进行行常常规空斑空斑测定定时，可同野生型具有多角体的病毒空斑区，可同野生型具有多角体的病毒空斑区别开来，开来，这就是最初的就是最初的筛选重重组病毒的方式。病毒的方式。v由于重由于重组效率效率较低低(0.

12、1%1%)，表型差，表型差别不不显著，著，应用上有一定的困用上有一定的困难。1.1 杆状病毒载体杆状病毒载体杆状病毒杆状病毒载体的体的筛选v为此，此，经过不断探索，在重不断探索，在重组杆状病毒的杆状病毒的筛选与与鉴定方面取定方面取得了很大改得了很大改进。v具体方法有以下几种：具体方法有以下几种：1.-半乳糖苷半乳糖苷酶的的蓝白白筛选2.体外体外酶促定位重促定位重组3.Bacmid4.TK 基因基因5.Neo 基因基因BacmidvLuckow 等开等开发。快速、高效。快速、高效产生重生重组AcMNPV 病毒。取病毒。取杆状病毒杆状病毒(baculovirus)和和质粒粒(plasmid)的英文

13、字的英文字头字尾命名字尾命名为Bacmid，即杆状病毒，即杆状病毒质粒之意。粒之意。v根据根据F因子因子载体原理，用体原理，用类似于酵母体内重似于酵母体内重组的方法，的方法，构建构建了了一种新杆状病毒穿梭一种新杆状病毒穿梭载体体Bacmid。该载体可像体可像质粒一粒一样在在大大肠杆菌中生杆菌中生长，又，又对鳞翅目昆虫翅目昆虫细胞具有感染性。胞具有感染性。vBacmid 含有含有F因子复制子因子复制子(可在大可在大肠杆菌中复制杆菌中复制)、卡那霉、卡那霉素抗性基因及素抗性基因及Tn7 转座位点座位点attTn7。v转移移载体中，外源基因体中，外源基因置于置于杆状病毒启杆状病毒启动子之下子之下,两

14、端分两端分别为Tn7的左右端。以其的左右端。以其转化化含含Bacmid的菌株，由的菌株，由辅助助质粒提粒提供反式作用供反式作用发生生转座座，而将外源基因，而将外源基因转到到Bacmid的的attTn7位置。位置。Bacmidv在在Bacmid 中，外源基因被核多角体启中，外源基因被核多角体启动子控制，子控制，并包含了多种抗性基因及并包含了多种抗性基因及LacZ 缺失缺失标记，极大地方，极大地方便了重便了重组病毒的病毒的筛选及及鉴定。定。这种重种重组了外源基因的了外源基因的Bacmid转染的昆虫染的昆虫细胞，可得到胞，可得到100%阳性重阳性重组病毒病毒。v操作操作简单方便，只需方便，只需1 周

15、即可完成重周即可完成重组病毒病毒载体的构体的构建。建。Bacmidv由于我国有养蚕由于我国有养蚕业，还可在可在AcMNPV Bac-to-Bac表达系表达系统的基的基础上上进行改造，构建能行改造，构建能够应用于家蚕的用于家蚕的BmNPV Bac-to-Bac 表达系表达系统，这将大大减少将大大减少传统昆虫杆状病毒昆虫杆状病毒表达系表达系统表达外源重表达外源重组蛋白所需蛋白所需时间，极大地提高了工作效，极大地提高了工作效率。率。还能能够解决培养昆虫解决培养昆虫细胞成本高，胞成本高，难于于规模化生模化生产等等问题。v重重组率率100%、操作、操作简便、便、1 周完成重周完成重组、全部操作都在、全部

16、操作都在细菌中菌中进行，取名行，取名为Bac-to-Bac 表达系表达系统1.2 昆虫昆虫细胞宿主胞宿主v昆虫昆虫细胞在生物学、医学、胞在生物学、医学、农业等等领域中被作域中被作为非常重要的研非常重要的研究工具。究工具。v目前全世界建立的昆虫目前全世界建立的昆虫细胞系有胞系有800 多株，分多株，分别来源于来源于鳞翅翅目、双翅目、鞘翅目、蜚蠊目、直翅目、膜翅目、同翅目和半目、双翅目、鞘翅目、蜚蠊目、直翅目、膜翅目、同翅目和半翅目翅目8 个目的个目的170 余种昆虫，其中具有余种昆虫，其中具有实际应用的用的细胞系大胞系大部分来自部分来自鳞翅目翅目和和双翅目双翅目。v以昆虫杆状病毒以昆虫杆状病毒为

17、载体的昆虫体的昆虫细胞可成功、高效地表达外源基胞可成功、高效地表达外源基因，生因，生产具有重要具有重要药用价用价值和具和具备天然活性的重天然活性的重组蛋白。因此，蛋白。因此，在众多昆虫在众多昆虫细胞系中胞系中鳞翅目翅目昆虫昆虫细胞系胞系应用最用最为广泛。广泛。1.2 昆虫昆虫细胞宿主胞宿主v昆虫杆状病毒表达系昆虫杆状病毒表达系统既可在既可在昆虫培养昆虫培养细胞胞中，又可在中，又可在昆虫和昆虫和蛹蛹内内进行表达。究竟在昆虫体内行表达。究竟在昆虫体内还是在培养是在培养细胞中表达外源基胞中表达外源基因，可根据外源蛋白的性因，可根据外源蛋白的性质及其用途、表达水平高低、分离及其用途、表达水平高低、分离

18、纯化化难易、易、纯化要求高低等因素来考化要求高低等因素来考虑。v然而，然而，对于常于常规小量小量及及高高纯度度的蛋白的蛋白质生生产而言，利用而言，利用体外培体外培养养的昆虫的昆虫细胞来胞来进行表达是首行表达是首选途径。途径。v相相对于已知的上百万种昆虫以及昆虫于已知的上百万种昆虫以及昆虫细胞系的广泛用途来胞系的广泛用途来说，已已经建立的建立的细胞系胞系还远远不不够，仍需建立更多的昆虫，仍需建立更多的昆虫细胞系以胞系以满足足实际需要。需要。Company Logo2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点安全性高安全性高基因容量大基因容量大表达水平高表达水平高能能进行翻行翻译后的加

19、工修后的加工修饰重重组蛋白具有完整的生物学功能蛋白具有完整的生物学功能2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点相相对其他表达系其他表达系统它具有以下几个方面的特点：它具有以下几个方面的特点：重重组蛋白具有完整的生物学功能蛋白具有完整的生物学功能：杆状病毒表达系：杆状病毒表达系统可可为高高表达的外源蛋白在表达的外源蛋白在细胞内胞内进行正确折叠、二硫行正确折叠、二硫键的搭配及寡聚的搭配及寡聚物的形成提供良好的物的形成提供良好的环境，可使表达境，可使表达产物在物在结构及功能上接近构及功能上接近天然蛋白。天然蛋白。利用昆虫杆状病毒表达系统来表达富含二硫键的一些具有神经毒性的生物毒素肽将

20、是一个最佳的选择。2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点能能进行翻行翻译后的加工修后的加工修饰：杆状病毒表达系：杆状病毒表达系统具有具有对蛋白蛋白质完整的翻完整的翻译后加工能力，包括糖基化、磷酸化、后加工能力，包括糖基化、磷酸化、酰基化、信号基化、信号肽切除及切除及肽段的切割和分解等，修段的切割和分解等，修饰的位点与天然蛋白在的位点与天然蛋白在细胞胞内的情况完全一致。内的情况完全一致。对比实验证明，在昆虫细胞发生的糖基化位点与哺乳动物细胞中完全一致，但修饰的寡糖种类却不完全一样。这种不一致对不同目的蛋白的活性影响不同，所以昆虫表达系统还可作为一个研究糖基化对蛋白质结构与功能影

21、响方面的理想模型。2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点表达水平高表达水平高：与其它真核表达系：与其它真核表达系统相比相比较，此系，此系统最突出的特最突出的特点就是能点就是能获得重得重组蛋白高水平的表达，最高可使目的蛋白的量达蛋白高水平的表达，最高可使目的蛋白的量达到到细胞胞总蛋白的蛋白的50。虽然目前科研工作者大都是在细胞培养条件下进行表达外源基因，当条件成熟时需要大量制备某类外源蛋白时，最好采用昆虫幼虫或蛹。因为培养昆虫幼虫和蛹远比培养细胞简单、廉价，而且利用昆虫幼虫或蛹能够显著提高外源基因的表达水平。利用BmNPV 载体在家蚕幼虫中成功表达出重组蜘蛛牵引丝蛋白，表达量高

22、达每个昆虫活体6mg。一般在幼虫体内的淋巴液中，蛋白质表达量较在细胞培养基中高10倍以上。因此，通过昆虫杆状病毒表达系统可利用昆虫活体大规模生产各种重组蛋白。2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点基因容量大基因容量大：昆虫杆状病毒的基因：昆虫杆状病毒的基因组为单一一闭合合环状双状双链DNA分子，大小分子，大小为80 200kb，其基因，其基因组可在昆虫可在昆虫细胞核中胞核中复制和复制和转录。DNA 复制后复制后组装在杆状病毒的毒粒内，由于毒粒装在杆状病毒的毒粒内，由于毒粒具有具有较大的柔大的柔韧性，能包装性，能包装较大的基因片段，可表达非常大大的基因片段，可表达非常大(100

23、kb)的外源性基因。因此是表达大片段的外源性基因。因此是表达大片段DNA 的理想的理想载体。体。但目前尚无但目前尚无实验得知杆状病毒所能容得知杆状病毒所能容纳的外源基因的外源基因长度的上限。度的上限。我们感兴趣的另外一个特点是在昆虫杆状病毒载体内还可多基因同时表达，具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个外源基因的能力。根据设计需要既可采用不同的重组杆状病毒同时感染细胞的形式，也可在同一杆状病毒载体上同时克隆多个外源基因，其表达产物之间可有蛋白质的相互作用或加工形成具有活性的异源二聚体或多聚体。2.杆状病毒载体表达系统的特点杆状病毒载体表达系统的特点安全性高安全性高：由于杆状病毒的天然宿主是昆虫

24、，不能在哺乳：由于杆状病毒的天然宿主是昆虫，不能在哺乳动物物细胞内复制病毒胞内复制病毒DNA 以及增殖病毒，杆状病毒不会感染人。因以及增殖病毒，杆状病毒不会感染人。因此此对细胞的生理影响胞的生理影响较哺乳哺乳类病毒病毒载体要小，同体要小，同时实验操作者的操作者的自身安全也比自身安全也比较有保障。有保障。现有研究也表明其启动子在哺乳动物细胞中没有活性，因此在表达癌基因或有潜在毒性的蛋白质时可能优于其他表达系统。最新研究发现，AcMNPV 病毒作为哺乳动物细胞基因转移载体，也可以将外源基因导入哺乳动物的细胞，如人的肝细胞。这意味AcMNPV 病毒可能成为哺乳动物基因治疗的媒介体，因此杆状病毒有望在

25、未来人类的基因治疗中得到应用。3.昆虫杆状病毒表达系统的应用昆虫杆状病毒表达系统的应用应用应用应用应用产业产业产业产业基础研究基础研究基础研究基础研究医用疫苗医用疫苗医用疫苗医用疫苗和药物和药物和药物和药物v昆虫杆状病毒表达系昆虫杆状病毒表达系统广泛广泛应用于用于药物研物研发、疫苗生、疫苗生产、重、重组病毒病毒杀虫虫剂等等众多众多领域中。其中，在生物分子研究中，具有代表性的是重域中。其中，在生物分子研究中，具有代表性的是重组蛋白的表达，蛋白的表达，是目前杆状病毒表达系是目前杆状病毒表达系统应用最多的用最多的领域。成功表达出具有域。成功表达出具有药用价用价值的蛋白的蛋白质又可用于又可用于药物研物

26、研发和疫苗生和疫苗生产。3.1 基基础研究研究v功能基因功能基因组学学（functional genomics）的重要内容是研究）的重要内容是研究基因基因组内各种蛋白内各种蛋白质的的结构和功能，蛋白构和功能，蛋白质之之间以及蛋白以及蛋白质和核和核酸之酸之间的相互关系。的相互关系。v实现这一一计划的前提是要生划的前提是要生产几万种蛋白几万种蛋白质，这就要求蛋白就要求蛋白质表达系表达系统提供新的技提供新的技术，诸如：通如：通过简单的操作，生的操作，生产各种活性各种活性形式的蛋白形式的蛋白质简化操作化操作过程，程，缩短从基因生短从基因生产蛋白蛋白质的的时间以以简便的操作，同便的操作，同时生生产许多种

27、蛋白多种蛋白质。v最新的研究和技最新的研究和技术发展展业已表明，昆虫杆状病毒表达系已表明，昆虫杆状病毒表达系统是解决是解决上述上述问题的的优良系良系统，以昆虫虫体，以昆虫虫体为宿主是十分有魅力的。宿主是十分有魅力的。v日本片仓公司在这方面进行了卓有成效的探索导入Invitrogen公司的GATEWAY系统，利用Bac-to-Bac系统的载体，通过单一的LR Clonase就能同时构建各种带目的基因的BEVS质粒转移载体；用缺失增殖所必须的线型化病毒DNA、含缺失增殖所必需基因的质粒转移载体和外源基因同时感染蚕蛹，通过此法，不用筛选就能在短期内获得正确的重组病毒和目的蛋白，由于使用的是蚕蛹，这种

28、技术还可以自动化操作。开开发医用疫苗和医用疫苗和药物物v由由BEVS生生产的疫苗研究早已开始，的疫苗研究早已开始，HIV疫苗于疫苗于20世世纪80年代年代,疟疾疫苗于疾疫苗于90年代年代进人人临床床,但由于但由于这2种疾病的特殊性，所有种疾病的特殊性，所有其他来源的疫苗都缺乏良好保其他来源的疫苗都缺乏良好保护性，所以未能被使用。性，所以未能被使用。v尽管如此，尽管如此，临床床试验亦亦证明了昆虫杆状病毒表达系明了昆虫杆状病毒表达系统来源的重来源的重组蛋白蛋白对人是安全的。由家蚕宿主昆虫杆状病毒表达系人是安全的。由家蚕宿主昆虫杆状病毒表达系统重重组多肤多肤药物国内外尚无物国内外尚无产品，其主要障碍

29、在于品，其主要障碍在于这是一个新的宿主系是一个新的宿主系统，且且发达国家无养蚕达国家无养蚕业。国内口服重。国内口服重组昆虫杆状病毒表达系昆虫杆状病毒表达系统多肤多肤药物已有开物已有开发，正，正进人人药物物审批批阶段，相信昆虫杆状病毒表达系段，相信昆虫杆状病毒表达系统重重组多肤生多肤生产医用医用药物会有物会有较好的前景。好的前景。3.3 产业化产业化v在众多在众多应用中，重用中，重组病毒病毒杀虫虫剂作作为一一类重要的具有开重要的具有开发潜力的潜力的生物生物杀虫虫剂，将是未来最容易，将是未来最容易产业化的一条成功之路。化的一条成功之路。v昆虫杆状病毒具有宿主昆虫杆状病毒具有宿主专一、致病力一、致病

30、力强、传播快、无残留、无抗播快、无残留、无抗药性、性、对脊椎脊椎动物和植物安全、不易引起广泛物和植物安全、不易引起广泛规模的生模的生态平衡的平衡的破坏等特点。昆虫杆状病毒作破坏等特点。昆虫杆状病毒作为生物生物杀虫虫剂第一次第一次进入市入市场在在20 世世纪70 年代，当年代，当时是直接使用野生型病毒。是直接使用野生型病毒。实践表明，生践表明，生物物杀虫虫剂与化学与化学杀虫虫剂相比，具有相比，具有杀虫速度慢、虫速度慢、杀虫虫谱窄、成本窄、成本高等缺点。故使病毒高等缺点。故使病毒杀虫虫剂的商品化生的商品化生产和推广和推广应用受到了很大用受到了很大限制。限制。为此，科研人此，科研人员通通过基因工程方

31、法改造杆状病毒，不基因工程方法改造杆状病毒，不仅可可以克服野生型病毒的固有缺点，而且以克服野生型病毒的固有缺点，而且为扩大病毒大病毒杀虫功能提供了虫功能提供了潜在可能。潜在可能。参考文献参考文献v朱帮福朱帮福,卢兹凡凡.昆虫杆状病毒表达系昆虫杆状病毒表达系统的研究的研究进展展.细胞与分子免疫学胞与分子免疫学杂志志,2002,18(6):681-683.v高炳淼高炳淼,李宝珠李宝珠,于津于津鹏,胡胡远艳,长孙东亭亭,罗素素兰.外源基因在昆虫杆状病毒表达系外源基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达中的表达.中国生物工程中国生物工程杂志志China Biotechnology，2011，31(11):1

32、23-129v马景霞景霞.昆虫杆状病毒作昆虫杆状病毒作为外源基因表达外源基因表达载体的体的应用用.中国家禽中国家禽兽2008,30(11):36-38v孙柏欣柏欣,刘刘长远,陈彦彦,赵华,赵彤彤华,李柏宏李柏宏.基因表达系基因表达系统研究研究进展展.现代代农业科技科技,2008,2:205-209v吴小吴小锋,岳万福岳万福,刘刘剑梅梅,李广立李广立,缪云根云根.Bac-to-Bac系系统的研究的研究进展及在家蚕中展及在家蚕中的的应用用.蚕蚕业科学科学.2007;33(1):146-150v郭广君郭广君,吕素芳素芳,王荣富王荣富.外源基因表达系外源基因表达系统的研究的研究进展展.科学技科学技术与工程与工程,2006,6(5):582-592