三章节经典液相色谱法.ppt

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1、三章节经典液相色谱法 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、液一、液-固吸附色谱固吸附色谱（一）分离原理（一）分离原理（二）常用吸附剂（二）常用吸附剂（三）吸附剂和流动相的选择（三）吸附剂和流动相的选择（一）分离原理（一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂

2、：多孔、微粒状物质 1.1.硅胶硅胶 2.2.氧化铝氧化铝 3.3.聚酰胺聚酰胺1.硅胶（硅胶（SiO2H2O）结构结构结构结构：内部内部硅氧交联结构硅氧交联结构多孔结构多孔结构 表面表面有硅醇基有硅醇基氢键作用氢键作用吸附活性中吸附活性中心心 特性特性特性特性：1 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性物质极性，吸附能力，吸附能力强极性吸附中心，不易洗脱强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型吸附活性次序：活泼型 束缚型束缚型 游离型游离型 2 2）吸水）吸水失活失活 105105110110O OC C烘干烘干3030分钟分钟(可逆失水可逆失

3、水)吸附力最大吸附力最大 500500O OC C烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)活性丧失，无吸附力活性丧失，无吸附力适用适用适用适用：分析酸性或中性物质 续前续前2.氧化铝氧化铝 碱性氧化铝碱性氧化铝 pH 9 pH 910 10 适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝中性氧化铝 pH pH7.5 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝酸性氧化铝 pH 4 pH 45 5 适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质3.聚酰胺聚酰胺 氢键作用氢键作用 氢键能力氢键能力强，组分越后出柱强，组分越后出柱 （三）吸附剂和流动相的选择：（三）吸附剂

4、和流动相的选择：依据被测组分、吸附剂和流动相的性质依据被测组分、吸附剂和流动相的性质1.1.被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）：烃烃 -羧酸，醇羧酸，醇 2.2.吸附剂的活性：吸附剂的活性：吸附剂的活性：吸附剂的活性：吸附剂的活性吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力大，对被测组分的吸附能力强强 强极性物质强极性物质强极性物质强极性物质选择弱吸附剂选择弱吸附剂选择弱吸附剂选择弱吸附剂 弱极性物质弱极性物质弱极性物质弱极性物质选择强吸附剂选择强吸附剂选择强吸附剂选择强吸附剂3.3.流动相的极性：流动相的极性：流动相的极性：流动相的

5、极性：流动相极性流动相极性大，对被测组分的洗脱能力大，对被测组分的洗脱能力大大 “相似相溶相似相溶相似相溶相似相溶”原则原则原则原则 ：根据组分性质、吸附剂的活根据组分性质、吸附剂的活根据组分性质、吸附剂的活根据组分性质、吸附剂的活性，性，性，性，选择适当极性的流动相选择适当极性的流动相选择适当极性的流动相选择适当极性的流动相续前续前4.4.4.4.三者关系图示三者关系图示三者关系图示三者关系图示：组分组分 吸附剂吸附剂 流动相流动相 极性极性 活性小活性小 极性极性 非非(弱弱)极极性性 活活性性大大 非非极极性性或或弱极性弱极性二、薄层色谱法二、薄层色谱法（一）概述（一）概述（二）定性参数

6、（二）定性参数（三）吸附剂的选择（三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择（四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备（五）薄层板的制备（六）定性与定量分析（六）定性与定量分析（一）概述（一）概述1 1定义定义定义定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法形成薄层而进行色谱分离和分析的方法2 2操作过程：操作过程：见图示见图示铺铺板板 活活化化 点点样样 展展开开 定定位位(定定性性)/)/洗洗脱脱(定定量量)3 3分离机制：分离机制：吸附吸附吸附吸附（分配，离子交换，空间排阻）（分配，离子交换，空间排阻）4 4特点：分析快速、灵敏

7、、显色方便特点：分析快速、灵敏、显色方便5 5应用：药物杂质检查、纯度测定应用：药物杂质检查、纯度测定 nextnext图示图示图示图示L0L1L2（二）定性参数（二）定性参数1.1.比移值比移值比移值比移值R Rf f续前续前讨论讨论讨论讨论 R Rf f与与K K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关和展开剂的性质有关 色色谱谱条条件件一一定定，R Rf f只只与与组组分分性性质质有有关关，是是薄薄层层色色谱谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为基本定性参数，说明组分的色谱保留行为续前续前 1 1）KK大，大，R Rf f小小 2

8、2）薄层板一定，对于极性组分）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性展开剂极性大，大，R Rf f大（容易洗脱）大（容易洗脱）展开剂极性展开剂极性小，小，R Rf f小小 （不容易洗脱）（不容易洗脱）3 3）R Rf f范围：范围：0 R0 Rf f 11 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离）（组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离）R Rf f =0.20.8 =0.20.8（常用）（常用）0.30.5 0.30.5（最佳）（最佳）续前续前2.2.相对比移值相对比移值相对比移值相对比移值R Rs s 讨论讨论讨论讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开参考物与被测组分在完全相同

9、条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相相对对比比移移值值R Rs s与与组组分分、参参考考物物性性质质及及色色谱谱条条件件有有关关，范围可以大于或小于范围可以大于或小于1 1（三）吸附剂的选择（三）吸附剂的选择（三）吸附剂的选择（三）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强被测物极性强弱极性吸附剂弱极性吸附剂 被测物极性弱被测物极性弱强极性吸附剂强极性吸附剂（四）展开剂的选择（四）展开剂的选

10、择（四）展开剂的选择（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择）（同液固吸附色谱流动相的选择）根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性（五）薄层板的制备（五）薄层板的制备定性分析定性分析窄条窄条定量分析定量分析1020cm 1020cm （六）定性与定量分析（六）定性与定量分析 定性分析定性分析日光，紫外光，显色日光，紫外光，显色 定量分析定量分析洗脱法，薄层扫描法洗脱法，薄层扫描法硅胶硅胶GG自含粘和剂自含粘和剂硅胶硅胶HH不含粘和剂，铺板时另加入不含粘和剂，铺板时另加入CMCCMC硅胶硅胶FH254FH254含荧光剂，含荧光剂，254nm254nm紫

11、外光照发绿光紫外光照发绿光硅胶硅胶FH365FH365含荧光剂，含荧光剂，365nm365nm紫外光照发光紫外光照发光四、纸色谱法四、纸色谱法将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液定性、和定量的液-液分配色谱法液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：同液分离机制：同液-液分配色谱液分配色谱定性参数：定性参数：讨论讨论讨论讨论：R Rf f与组分性质、流动相及溶解度有关与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分极性组分易保留，易保留，R Rf f 小（流动相极性小（流动相极性，R Rf f ）非极性组分非极性组分易流出，易流出，R Rf f大（流动相极性大（流动相极性，R Rf f ）