水中细菌总数测定.pptx

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1、（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验器材（三）实验器材（四）实验方法（四）实验方法（五）实验作业（五）实验作业培 养 基 的 制 备 与 灭 菌第1页/共27页（一）实验目的（一）实验目的1、明确培养基的配制原则；2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。第2页/共27页（二）实验原理（二）实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需

2、营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基.培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。第3页/共27页常用加热灭菌法：1、干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法 煮沸消毒法 灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。第4页/共27页（三）实验器材（三）实验器材1.药品和试剂：药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaClNaC

3、l、1010NaOHNaOH溶液、溶液、1010盐酸溶液。盐酸溶液。2.器材：器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、PHPH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。棉花、线绳、干燥箱、高压锅。第5页/共27页1.1.称量称量按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏配方：牛肉膏5.0g,5.0g,蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g，NaCl5.0g,NaCl5.0g,琼琼脂脂20.0g,20.0g,蒸馏水蒸馏水1000ml,pH7.01000ml,

4、pH7.0。（四）实验方法 培养基的制备过程称量-溶解-调节pH值-过滤-分装及包扎-灭菌-灭菌后试管摆放斜面第6页/共27页2.2.溶解溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。3.3.调节调节pHpH值值用玻璃棒沾少许液体，测量用玻璃棒沾少许液体，测量PHPH值。用氢氧化钠值。用氢氧化钠和盐酸调节和盐酸调

5、节PHPH。第7页/共27页4.4.过滤过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。省去。5.5.分装及包扎分装及包扎根据不同的需要，可将制好的培养基分装入根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。第8页/共27页6.6.灭菌：灭菌：高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌，1211210 0C C灭菌灭菌2020分钟。分钟。第9页/共27页7.灭菌后试管摆放斜面第10页/共27页第11页/共27页第12页/共2

6、7页注 意 事 项1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。返 回第13页/共27页（五）实验作（五）实验作业业为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？第14页/共

7、27页消毒与灭菌 1干热灭菌法 2高压蒸汽灭菌 3紫外线灭菌法第15页/共27页（二）高压蒸汽灭菌 1、原理 利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。一般培养基用0.1Mpa，121.5,1530min 2、步骤加水装待灭菌物品加盖加热灭菌时间到后断电源压力降为零开箱取物第16页/共27页（三）紫外线灭菌法1、原理 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成O

8、，再使O2 氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有杀菌作用。适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。第17页/共27页2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30min，将开关关闭。2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，再用紫外线灯照射15imn第18页/共27页水中细菌总数测定第19页/共27页一、水样的采集 1.采水容器 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 采样瓶的洗涤 采样瓶的灭菌:160170干热灭菌2h，或用高压蒸汽灭菌器，121灭菌15min第20页/共27页一、水样的采集2.采样步骤

9、及注意事项(1)去氯和高浓度重金属：灭菌前按500mL采样瓶加入0.3mL10%Na2S2O3溶液(2)采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面1015cm处采集（3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最大，放水35min，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品（6）采样完毕，做好记录 第21页/共27页二、样品保存 采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检

10、验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应使用10以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h 第22页/共27页 细菌总数的测定 细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于37培养24h后，所生长细菌菌落的总数。一、细菌总数测定的意义 可以反映水体有机污染的程度 生活饮用水的细菌总数lmL不得超过100个第23页/共27页 细菌总数的测定二、培养基的制作 三、测定方法及步骤 1.稀释水样2.接种水样3.培养：37下倒置培养24h第24页/共27页 细菌总数的测定水样225mL无 菌水25mL1mL1mLckck10-110-110-210-210-310-31mL1mL1mL1mL1mL1mL三、

11、菌落计数 3724h第25页/共27页 细菌总数的测定例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数/CFUmL-1报告方式/CFUmL-110-110-210-31234561 3652 7602 890无法计算27无法计算1642952711 650113052046605135121.62.216 40037 75027 100513 00027030 50016 000或1.610438 000或3.810427 000或2.7104510 000或5.1105270或2.710231 000或3.1104四、计算和报告计数结果 第26页/共27页谢谢您的观看！第27页/共27页