EP2.2.25译文.pdf

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1、1 紫外可见分光光度法吸光度的定义：溶液的吸光度可以定义为以10 为底的单色光辐射的透光率的倒数的对数。A=log10（1/T）=log10（I0/I）T= I0/I I0=单色光反射的入射光强度I=单色光反射的透射光的强度吸光度 A 与辐射路径的长度和溶液中物质的浓度成正比。A= cb =摩尔吸光度， b 的单位是厘米， c 的单位是摩尔每升。A1 per cent1 cm代表 10g/l 的溶液在 1cm比色池中在特定波长下的吸光度，A1 per cent1 cm=10/Mr除非另有规定，在规定波长下在201，1cm比色池中测定吸光度。除非另有规定，测定时对照采用相同的溶剂或者混合溶剂。溶

2、剂在规定波长处的吸收不应该超过 0.4，最好小于 0.2。将吸光度或者吸光度的函数作为纵坐标，波长或波长的函数作为横坐标。如果专论中规定的最大吸收处的单一值，则可认为测得值不超过2 nm。仪器： 适用于紫外及可见区光谱测定的分光光度计由一个能在200-800nm 范围内提供单色光的光学系统和一个测定吸光度的装置所组成。波长的控制：利用高氯酸钬溶液的最大吸收来确认波长范围。在表 2.2.25-1 中列出了氢或氘高压灯或汞蒸汽。在紫外范围内的允许偏差为1 nm，在可见范围内的偏差为3 nm。选用合适的参比物。2 表 2.2.25-1 控制波长范围的最大吸收241.15 nm（Ho）404.66 n

3、m（Hg）253.7 nm（Hg）435.83 nm（Hg）287.15 nm（Ho）486.0 nm（D）302.25 nm（Hg）486.1 nm（H）313.16 nm（Hg）536.3 nm（Ho）334.15 nm（Hg）546.07 nm（Hg）361.5 nm（Ho）576.96 nm（Hg）365.48 nm（Hg）579.07 nm（Hg）吸光度的控制：用合适的滤器或重铬酸钾溶液在表2.2.25-1 中的波长下测定吸光度， 每个波长下都有一个真实值以及允许的偏差。吸光度的偏差限度0.01。重铬酸钾在使用之前要在130下干燥至恒重。在235nm，257nm，313nm 和350

4、nm波长下，溶解 57.0-63.0mg重铬酸钾于 0.005M 硫酸中并稀释到 1000ml。在 430nm波长下， 溶解 57.0-63.0mg重铬酸钾于 0.005M 硫酸中并稀释到 100.0ml。可以使用合适的参比物。表 2.2.25-2 波长（ nm）特征吸收 A1 per cent1 cm最大接受限度235 124.5 122.9 to 126.2 257 144.5 142.8 to 146.2 313 48.6 47.0 to 50.3 350 107.3 105.6 to 109.0 430 15.9 15.7 to 16.1 杂散光的限度：杂散光可以在给定的波长下利用合适

5、的滤光片或者溶液检测。例如：测定12g/l氯化钾溶液在1cm 比色池中的吸光度，用水作为校正溶液，其吸光度在200nm到 220nm 之间突然增加， 且 198nm 处吸光度大于 2.0。应使用适当的规定的参比3 物。分辨能力 （定性分析）：当专论中规定时，按以下测分辨能力：记录0.02%（v/v）的甲苯己烷溶液的图谱。在专论中规定了在最大吸收处269nm 的吸光度与在最小吸收处266nm处的吸光度的最小比值。应使用适当的规定的参比物。光谱狭缝宽度（定量分析） ：为了避免光谱狭缝宽度引起的误差， 当使用的仪器在选择的波长时其狭缝宽度是可变的，其狭缝宽度与吸收带的半宽度相比应小一些，但是它又必须

6、足够大可以获得 Ic值。所以应逐步降低狭缝宽度而不引起吸光度读数的改变。比色池：比色池的光程误差允许范围为0.005 cm。当注入相同溶剂时，比色池中包含供试溶液，参比溶液必须具有相同的透光率。否则必须进行校正。 比色池必须洁净并小心使用。英国药典中吸光度的测定：除非另有规定， 吸光度是指在规定波长处于19-21用 1cm光程的比色池测量而得。如果某些条件不适用于一些特定的仪器，根据比尔定律， 改变光程长或者浓度。除非另有规定， 参考制备供试溶液的溶剂或者混合溶剂来进行测试。参比池中的溶液应该和制备溶液是同一批号。在某些情况下， 测定混合试剂的方法的细节在专论项下有规定。当含量测定或者检验规定

7、使用对照品时，使用法定方法制备对照溶液和供试溶液。进行完第一次测定后， 马上使用同一个比色池在相同的试验环境下进行第二次测定。衍生化分光光度法：衍生化分光光度法包含吸光度（零级）向一级，二级或更高级图谱的转化。一级衍生图谱是吸光度曲线与波长的梯度图。二级衍生图谱是吸光度与波长的曲率图。4 在任何波长下的二级衍生图与浓度的关系见下面的方程：d2A/d2= d2A1 percent1 cm/d2c b/10= d2A/d2cb/10 c :吸收溶液的浓度， g/l 仪器：使用符合以上要求的仪器， 并且安装有模拟耐电容区分组件或者数字微分器或其他产生衍射图谱的装置。 一些产生二级图谱的方法相对于零级图谱产生一个波长转移，这个是需要考虑的。分辨力：当在药典中有规定时，记录0.02%（v/v）甲苯的甲醇溶液的二级衍生图谱，甲醇作为对照液。图谱在两个负极值波长261nm和268nm有小的极值，在图 2.2.25-1中显示。除非另有规定，A/B 比值不小于 0.2。操作：制备供试溶液，根据生产商的说明调节仪器设置，计算测定的物质的量。dZVdA.2363Ar2&5B26126S240260280290nmFigure2.2.25.-1