微生物的实验室培养 新人教选修.pptx

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1、一、基础知识：（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途第2页/共47页固体培养基：菌落第3页/共47页液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长第4页/共47页半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动)第5页/共47页选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:

2、分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物第6页/共47页大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心 ,有金属光泽有金属光泽大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝伊红美蓝培养基上典型特征培养基上典型特征 鉴定培养基：鉴定培养基：鉴定所培养生物的类型鉴定所培养生物的类型第7页/共47页3、培养基的营养构成、培养基的营养构成 不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐等营养物质，等营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pH、特特殊营养物质殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌

3、生即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物长必需，而自身不能合成的化合物,如如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。第9页/共47页碳源、氮源、生长因子的比较碳源、氮源、生长因子的比较来来 源源常用原料常用原料功功 能能碳源碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪、糖类、脂肪酸、酸、花生粉饼、石油等花生粉饼、石油等糖类糖类构成细胞物质和一些构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是代谢产物，有些还是异养做生物的主要能异养做生物的主要能源物质源物质氮源氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、尿素、尿素、牛肉

4、膏和蛋白胨等牛肉膏和蛋白胨等铵盐、硝酸盐等铵盐、硝酸盐等合成蛋白质、核酸以合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物及含氮的代谢产物生长因生长因子子维生素、氨基酸、碱基维生素、氨基酸、碱基酶、核酸等的组成成酶、核酸等的组成成分分第10页/共47页（二）无菌技术1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。第11

5、页/共47页（）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。（2）灭菌的定义：第12页/共47页比较比较项项理化因素的作用强理化因素的作用强度度消灭微生物的数量消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消芽孢和孢子能否被消灭灭消毒消毒较为温和较为温和部分生活状态的微生部分生活状态的微生物物不能不能灭菌灭菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较第13页

6、/共47页1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法第14页/共47页1、灼烧灭菌接种环、接种针、试管口2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.(2)灭菌的方法：第15页/共47页 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭

7、菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。第16页/共47页1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3

8、）需要消毒。第17页/共47页3.3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存第18页/共47页三、实验操作（一.）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）第19页/共47页1计算、称量2溶化3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞7包扎操作步骤第20页/共47页 8灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸

9、气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。9倒平板:待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.10无菌检查：将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。第21页/共47页倒平板技术倒平板技术第22页/共47页 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶

10、口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第23页/共47页3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第24页/共47页（二）、纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,

11、将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术第25页/共47页菌落：菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。第26页/共47页菌落细菌的菌落特征因种而异 第27页/共47页霉菌的菌落特征因种而异菌落第28页/共47页接种环接种环接种针接种针第29页/共47页第30页/共

12、47页 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第31页/共47页 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，

13、为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第32页/共47页第33页/共47页涂布器涂布器第34页/共47页第35页/共47页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。第36页/共47页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养第37

14、页/共47页四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，(在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐)则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，(在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。)则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌

15、菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。第38页/共47页微生物的恒温培养微生物的恒温培养第39页/共47页31培养未接种培养基的作用是培养未接种培养基的作用是对照对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。不彻底。32在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白白色，为圆形，光滑有光泽，边色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。缘整齐。33培养培养12h和和24h后的菌落大小后的菌落大小不同不同（相同、不同）；菌落分布位置（相同、不同）；菌落分布位置相同相同（

16、相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。34在某培养基上出现了在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。或杂菌感染等。n结果分析与评价结果分析与评价n课题延伸课题延伸（P20）第40页/共47页菌种的保存1、临时保藏法对象：温度：缺点：2、甘油管藏法：对象：温度：频繁使用的菌种频繁使用的菌种 44（冰箱）（冰箱）容易被污染或容易被污染或产生变异产生变异 长期保存的菌种长期保存

17、的菌种 -20-20（冷冻箱）（冷冻箱）第41页/共47页本课题知识小结:第42页/共47页【典例解析】例1关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaH

18、CO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D第43页/共47页例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是A正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和

19、物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。第44页/共47页编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例3右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 .自养型微生物 含碳有机物 第45页/共47页（3）若除去成分，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。（4）表中营养成分共有 类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。（6）右表中各成分重量确定的原则是 。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）第46页/共47页感谢您的观看！第47页/共47页