山西生物应用职业技术学院教学质量工程21161.pptx

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1、山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院 山西生物应用职业技术学院山西生物应用职业技术学院中药化学实用技术学习情景八学习情景八 中药中其他类型化学成分的提取分离技术中药中其他类型化学成分的提取分离技术学习目标学习目标1掌握中药中其他类型化学成分的提取分离技术。知识要求知识要求2掌握儿茶中鞣质类化学成分的提取分离原理及操作技术；熟悉青木香中有机酸类化学成分的提取分离原理及操作技术；了解丁南瓜子中南瓜子氨酸及决明子中蛋白质类化学成分提取分离原理及操作技术。能力要求能力要求3熟练进行儿茶中鞣质

2、类化学成分及青木香中有机酸类化学成分的提取分离操作；能进行南瓜子中南瓜子氨酸及决明子中蛋白质类化学成分的提取分离操作。教学内容教学内容二二二二有机酸类化学成分的提取分离技术有机酸类化学成分的提取分离技术三三三三氨基酸类化学成分的提取分离技术氨基酸类化学成分的提取分离技术四四四四蛋白质和酶类化学成分的提取分离技术蛋白质和酶类化学成分的提取分离技术一一一一鞣质类化学成分的提取分离技术鞣质类化学成分的提取分离技术鞣质类化学成分的提取分离知识鞣质类化学成分的提取分离知识 儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术三三二二鞣质类成分的结构类型鞣质类成分的结构类型一一鞣质类化学成

3、分的提取分离技术鞣质类化学成分的提取分离技术鞣质定定 义义鞣质又称单宁（tannin）或鞣酸（tannin acid），是一类复杂的多元酚类高分子化合物，能沉淀蛋白质。分分 布布鞣质广泛存在于植物界，约70%以上的药材中含有鞣质类化合物，在裸子植物及双子叶植物的杨柳科、山毛榉科、蓼科、豆科、蔷薇科和茜草科中为多。生物活性生物活性鞣质具有收敛、止血作用。内服可用于治疗胃肠道出血、溃疡和水泻等症，外用于灼伤、创伤的创面，可使创伤表面渗出物中的蛋白质凝固，形成痂膜，保护创面，防止细菌感染。一、一、鞣质类成鞣质类成分的结构类型分的结构类型 缩合鞣质缩合鞣质此类鞣质一般不能水解，此类鞣质一般不能水解，但

4、经酸处理后可缩合成但经酸处理后可缩合成为不溶于水的高分子化为不溶于水的高分子化合物鞣酐，又称鞣红。合物鞣酐，又称鞣红。有多元醇与没食子酸酯有多元醇与没食子酸酯化的产物。这类鞣质具化的产物。这类鞣质具有酯键或苷键结构，易有酯键或苷键结构，易被酸、碱、鞣酸或苦杏被酸、碱、鞣酸或苦杏仁酶水解。根据水解后仁酶水解。根据水解后的产物又可分为没食子的产物又可分为没食子酸和鞣花酸鞣质两类。酸和鞣花酸鞣质两类。可水解鞣质可水解鞣质 复合鞣质复合鞣质是逆没食子鞣质部是逆没食子鞣质部分与原花色素部分分与原花色素部分结合组成的，具有结合组成的，具有可水解鞣质和缩合可水解鞣质和缩合鞣质的一切特征。鞣质的一切特征。（一

5、）（一）.可水解鞣质可水解鞣质可水解鞣质可水解鞣质分类分类没食子酸鞣质没食子酸鞣质 没食子酸鞣质水解后产没食子酸鞣质水解后产生没食子酸和糖（或多生没食子酸和糖（或多元醇），如大黄和五倍元醇），如大黄和五倍子中的鞣质。子中的鞣质。逆没食子酸鞣质逆没食子酸鞣质水解后能生成逆没食子酸和水解后能生成逆没食子酸和糖或同时有没食子酸或其他糖或同时有没食子酸或其他的酸生成，但有些逆没食子的酸生成，但有些逆没食子酸鞣质的原始结构中并无逆酸鞣质的原始结构中并无逆没食子酸的组成，其逆没食没食子酸的组成，其逆没食子酸是由鞣质水解所产生的子酸是由鞣质水解所产生的黄没食子酸或六羟基联苯二黄没食子酸或六羟基联苯二甲酸失水

6、转化而来。如诃子甲酸失水转化而来。如诃子鞣质鞣质 各种五倍子鞣质的结构各种五倍子鞣质的结构诃子鞣质诃子鞣质实例实例%含量五没食子酰葡萄糖X+Y+Z=04六没食子酰葡萄糖X+Y+Z=112七没食子酰葡萄糖X+Y+Z=219八没食子酰葡萄糖X+Y+Z=325九没食子酰葡萄糖20十至十一没食子酰葡萄糖21（二）（二）.缩合鞣质缩合鞣质 缩合鞣质在中药中分布较广，天然鞣质多数属于此类，如虎缩合鞣质在中药中分布较广，天然鞣质多数属于此类，如虎杖、四季青、儿茶、桂皮、麻黄等所含的鞣质均属缩合鞣质，但有杖、四季青、儿茶、桂皮、麻黄等所含的鞣质均属缩合鞣质，但有些中药中所含的鞣质为可水解鞣质与缩合鞣质的混合物

7、。些中药中所含的鞣质为可水解鞣质与缩合鞣质的混合物。缩合鞣质的结构比较复杂，一般认为它与羟基黄烷类，特别是缩合鞣质的结构比较复杂，一般认为它与羟基黄烷类，特别是羟基黄烷羟基黄烷-3-3-醇和羟基黄烷醇和羟基黄烷-3-3，4-4-二醇有密切的关系，可以认为羟二醇有密切的关系，可以认为羟基黄烷类是缩合肉制的前体，羟基黄烷之间以碳基黄烷类是缩合肉制的前体，羟基黄烷之间以碳-碳键缩合成鞣质，碳键缩合成鞣质，故不能水解。羟基黄烷类主要以儿茶素为代表，儿茶素不是鞣质，故不能水解。羟基黄烷类主要以儿茶素为代表，儿茶素不是鞣质，不具有鞣质的通性，当它们相互缩合成大分子多聚物后即具有鞣质不具有鞣质的通性，当它们

8、相互缩合成大分子多聚物后即具有鞣质的特性。如双儿茶素为二聚物，只有部分鞣质的性质，仍属于前体的特性。如双儿茶素为二聚物，只有部分鞣质的性质，仍属于前体物，随着聚合度的增加，鞣质的性质越显著，真正的缩合鞣质为三、物，随着聚合度的增加，鞣质的性质越显著，真正的缩合鞣质为三、四及五聚合物等。四及五聚合物等。（-）儿茶素的结构）儿茶素的结构双儿茶素的结构双儿茶素的结构实例实例课堂互动课堂互动1.1.鞣质可以分为哪几类？分类依据是什么？鞣质可以分为哪几类？分类依据是什么？2.2.去除鞣质的方法有哪些？为何要去除存在于多数中药中去除鞣质的方法有哪些？为何要去除存在于多数中药中的鞣质类成分？的鞣质类成分？三

9、三 鞣质类化学成分的的提取分离与鞣质类化学成分的的提取分离与检识检识鞣鞣质质类类化化学学成成分分的的提提取取分分离离与与检检识识提取提取 检识检识 分离分离 醋酸铅沉淀法三氯化铁反应和铁氰化钾反应生物碱及重金属盐反应明胶沉淀法生物碱沉淀法课堂互动课堂互动 用前述知识说明儿茶中各种化学成分的特点和性质，用前述知识说明儿茶中各种化学成分的特点和性质，并分析生产工艺中如何提取各种不同的鞣质类成分。并分析生产工艺中如何提取各种不同的鞣质类成分。知识链接（凝胶色谱）知识链接（凝胶色谱）以多孔凝胶作为固定相的柱色谱形式称为凝胶色谱。以多孔凝胶作为固定相的柱色谱形式称为凝胶色谱。（一）（一）凝胶凝胶色谱色谱

10、原理原理 凝胶色谱原理是分子筛原理。因凝胶颗粒具三维凝胶色谱原理是分子筛原理。因凝胶颗粒具三维 的网状结构，在水中可膨胀并有许多一定大小的网眼。的网状结构，在水中可膨胀并有许多一定大小的网眼。当溶液通过凝胶颗粒时，溶液中分子直径小于网眼的成当溶液通过凝胶颗粒时，溶液中分子直径小于网眼的成分可进入凝胶内部，而分子直径大于网眼的成分则被排分可进入凝胶内部，而分子直径大于网眼的成分则被排阻在凝胶颗粒之外，按分子由大到小的顺序流出。因此阻在凝胶颗粒之外，按分子由大到小的顺序流出。因此凝胶色谱又称为分子排组色谱、凝胶过滤色谱、凝胶渗凝胶色谱又称为分子排组色谱、凝胶过滤色谱、凝胶渗透色谱等。透色谱等。（二

11、）基本（二）基本构成要素构成要素（三）类（三）类型型 凝胶色谱的基本构成要素有固定相、流动相以凝胶色谱的基本构成要素有固定相、流动相以及被分离成分的溶液。及被分离成分的溶液。凝胶色谱一般按选用的流动相不同分为两类。凝胶色谱一般按选用的流动相不同分为两类。以水溶液为流动相的叫凝胶过滤色谱以水溶液为流动相的叫凝胶过滤色谱(GFC)(GFC)；以有；以有机溶剂为流动相的叫凝胶渗透色谱机溶剂为流动相的叫凝胶渗透色谱(GPC)(GPC)。（四）操作（四）操作技术技术1 1凝胶的预处理凝胶的预处理2 2装柱装柱3 3上样上样4 4洗脱洗脱5 5收集收集凝凝胶胶色色谱谱基基本本构构成成要要素素固定相固定相（

12、1 1）种类）种类 固定相是多孔凝胶（固定相是多孔凝胶（G G）。主要有葡聚糖凝胶（）。主要有葡聚糖凝胶（sephadex Gsephadex G）和羟丙基）和羟丙基葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶(sephadex LH-20)(sephadex LH-20)。后者为。后者为G-25G-25经羟基化处理得到的产物。最经羟基化处理得到的产物。最常用的是葡聚糖凝胶。常用的是葡聚糖凝胶。（2 2）葡聚糖凝胶的结构）葡聚糖凝胶的结构 葡聚糖凝胶也称交联葡聚糖凝胶，是由葡聚糖和甘油基通过醚桥相互葡聚糖凝胶也称交联葡聚糖凝胶，是由葡聚糖和甘油基通过醚桥相互交联而成的多孔性网状结构，其结构式如下：交联而成的多孔性网状

13、结构，其结构式如下：凝凝胶胶色色谱谱基基本本构构成成要要素素固定相固定相（3 3）葡聚糖凝胶的性质）葡聚糖凝胶的性质 葡聚糖分子内含有大量羟基而具有极性，在水中即膨胀成凝胶粒子，葡聚糖分子内含有大量羟基而具有极性，在水中即膨胀成凝胶粒子，是一种水不溶性的白色球状颗粒，由于醚键的不活泼性，因而具有较高是一种水不溶性的白色球状颗粒，由于醚键的不活泼性，因而具有较高的稳定性。不溶于水和盐溶液，在碱性和弱酸性溶液中性质稳定，但在的稳定性。不溶于水和盐溶液，在碱性和弱酸性溶液中性质稳定，但在酸性溶液中高温加热能促使糖甙键水解。和氧化剂接触会分解，长期不酸性溶液中高温加热能促使糖甙键水解。和氧化剂接触会分

14、解，长期不用宜加防腐剂。用宜加防腐剂。（4 4）葡聚糖凝胶的型号）葡聚糖凝胶的型号 1 1）型号：凝胶的商品型号用吸水量来表示。如）型号：凝胶的商品型号用吸水量来表示。如G-25G-25型号中型号中G G代表葡代表葡聚糖凝胶，后面的阿拉伯数值表示该型号的干凝胶聚糖凝胶，后面的阿拉伯数值表示该型号的干凝胶1g1g所吸收水量的所吸收水量的1010倍倍值。即值。即G-25G-25型号每克干凝胶的吸水量为型号每克干凝胶的吸水量为2.5g2.5g。商品型号有商品型号有G-10G-10、G-15G-15、G-25G-25、G-50G-50、G-75G-75、G-100G-100、G-200G-200等。等

15、。2 2）不同型号的性能及应用：型号数字越大，吸水量越大，凝胶体积）不同型号的性能及应用：型号数字越大，吸水量越大，凝胶体积膨胀越大，孔隙也越大，可用于大分子物质的分离；反之，用于小分子膨胀越大，孔隙也越大，可用于大分子物质的分离；反之，用于小分子物质的分离。物质的分离。G G型凝胶用于流动相为水的色谱分离；另外，型凝胶用于流动相为水的色谱分离；另外，LHLH型凝胶应用范围更广，型凝胶应用范围更广，极性、亲水性和亲脂性流动相中均可应用。极性、亲水性和亲脂性流动相中均可应用。凝凝胶胶色色谱谱基基本本构构成成要要素素流动相流动相（1 1）基本要求）基本要求 流动相必须是能够溶解试剂的溶剂；不能破坏

16、凝胶的稳定性；流动相必须是能够溶解试剂的溶剂；不能破坏凝胶的稳定性；能润湿凝胶使其膨胀；粘度要低，能保持一定的流动性。能润湿凝胶使其膨胀；粘度要低，能保持一定的流动性。（2 2）种类）种类 1 1）极性溶剂和亲水性溶剂：水和各种水溶液。）极性溶剂和亲水性溶剂：水和各种水溶液。2 2）亲脂性溶剂：各种亲脂性有机溶剂。如氯仿、四氢呋喃、）亲脂性溶剂：各种亲脂性有机溶剂。如氯仿、四氢呋喃、甲苯等。甲苯等。（3 3）选择原则）选择原则 分离水溶性样品选择极性溶剂和亲水性溶剂；分离脂溶性成分离水溶性样品选择极性溶剂和亲水性溶剂；分离脂溶性成分选择亲脂性溶剂。分选择亲脂性溶剂。凝凝胶胶色色谱谱的的操操作作

17、技技术术 凝胶的预处理凝胶的预处理 将干凝胶用选好的流动相（溶剂）充分浸泡膨胀后备用。将干凝胶用选好的流动相（溶剂）充分浸泡膨胀后备用。一般选择直径为一般选择直径为2.5cm2.5cm的柱子。凝胶装入柱中后，放出溶剂，的柱子。凝胶装入柱中后，放出溶剂，在用溶剂不断流洗柱子，使凝胶沉集、柱床稳定。并始终保持一在用溶剂不断流洗柱子，使凝胶沉集、柱床稳定。并始终保持一定的液面。定的液面。把需要分离的成分溶于选好的溶剂中，上样前为防止破坏柱床把需要分离的成分溶于选好的溶剂中，上样前为防止破坏柱床表面，要在柱床表面放一张滤纸。上样方法同一般柱色谱。表面，要在柱床表面放一张滤纸。上样方法同一般柱色谱。洗脱

18、剂和浸泡凝胶所用的溶剂相同。洗脱剂和浸泡凝胶所用的溶剂相同。分段收集，定性检查，合并同一组分，再行精制。分段收集，定性检查，合并同一组分，再行精制。装柱装柱上样上样 洗脱洗脱 收集收集 鞣鞣质质类类的的检检识识生物碱及重金生物碱及重金属盐反应属盐反应 三三氯氯化化铁铁反反应应和和铁铁氰氰化化钾反应钾反应 由于鞣质结构中含有大量酚羟基，由于鞣质结构中含有大量酚羟基，因此在鞣质的水溶液中加入三氯因此在鞣质的水溶液中加入三氯化铁能产生绿色、蓝色或沉淀；化铁能产生绿色、蓝色或沉淀；鞣质与铁氰化钾的氨溶液反应产鞣质与铁氰化钾的氨溶液反应产生深红色并很快变成棕色。生深红色并很快变成棕色。鞣质可与生物碱及重

19、金属盐作用鞣质可与生物碱及重金属盐作用生成不溶于水的沉淀。如与醋酸生成不溶于水的沉淀。如与醋酸铅、醋酸铜、浓重铬酸钾。还可铅、醋酸铜、浓重铬酸钾。还可与碱土金属的氢氧化物如氢氧化与碱土金属的氢氧化物如氢氧化钙溶液生成沉淀。钙溶液生成沉淀。任务一任务一 儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术 学习目标学习目标一一二三三儿茶中儿茶素的提取分离技术儿茶中儿茶素的提取分离技术必备知识必备知识四课堂互动课堂互动学习目标学习目标1掌握儿茶中鞣质类化学成分的提取分离原理及操作技术。知识要求知识要求2掌握儿茶中鞣质类化合物的提取、分离及鉴定技术。熟悉儿茶中鞣质类化合物的结构及性质

20、。了解儿茶中鞣质类化合物的存在及生物活性。能力要求能力要求3熟练进行儿茶中鞣质类化合物的提取、分离及鉴定操作。学会儿茶中鞣质类化合物的色谱鉴定技术。一一 学习目标学习目标二二 儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术儿茶中鞣质类化学成分的提取分离技术 本品为豆科植物儿茶本品为豆科植物儿茶(Acacia catechu(L.F.)(Acacia catechu(L.F.)Willd)Willd)的去皮枝、干的干燥煎膏。冬季采收枝、干，的去皮枝、干的干燥煎膏。冬季采收枝、干，除去外皮，砍成大块，加水煎煮，浓缩，干燥。在我除去外皮，砍成大块，加水煎煮，浓缩，干燥。在我国主要分布在云南、广西等地。具有收湿生

21、肌敛疮等国主要分布在云南、广西等地。具有收湿生肌敛疮等作用。作用。（一）设备、仪器及药品（一）设备、仪器及药品 渗漉筒、普通漏斗、锥形瓶、减压浓缩装置、渗漉筒、普通漏斗、锥形瓶、减压浓缩装置、玻璃棒、纱布、新鲜儿茶心材粉末、丙酮、醋酸玻璃棒、纱布、新鲜儿茶心材粉末、丙酮、醋酸乙酯乙酯（二）儿茶中（二）儿茶中（-）表儿茶素与儿茶素的提取与分离流程）表儿茶素与儿茶素的提取与分离流程 1.1.儿茶中（儿茶中（-）表儿茶素的提取与分离）表儿茶素的提取与分离2.2.儿茶素的提取与分离儿茶素的提取与分离（二）儿茶中主要有效成分的提取分离（二）儿茶中主要有效成分的提取分离（一）儿茶中主要化学成分的结构、理化

22、性质（一）儿茶中主要化学成分的结构、理化性质三三 必备知识必备知识（一）儿茶中主要化学成分的结构、理化性质（一）儿茶中主要化学成分的结构、理化性质儿茶中主要含有酚酸性成分。包括儿茶素、（儿茶中主要含有酚酸性成分。包括儿茶素、（-）表儿）表儿茶素、儿茶鞣酸、对苯二甲酸甲酯等。此外，还含有较多的茶素、儿茶鞣酸、对苯二甲酸甲酯等。此外，还含有较多的多聚糖，如由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖及葡萄糖醛酸组成多聚糖，如由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖及葡萄糖醛酸组成的二聚糖、三聚糖、六聚糖等。的二聚糖、三聚糖、六聚糖等。（-）表儿）表儿 茶素茶素类白色粉末，熔点类白色粉末，熔点242242，溶于水（易溶于热水），溶

23、于水（易溶于热水）、甲醇、乙醇、冰醋酸等，不溶于苯、氯仿、石、甲醇、乙醇、冰醋酸等，不溶于苯、氯仿、石油醚。油醚。（+）儿）儿茶素茶素 （-）儿）儿茶素茶素 类白色粉末，溶于热水、甲醇、乙醇、冰醋酸等，类白色粉末，溶于热水、甲醇、乙醇、冰醋酸等，不溶于苯、氯仿、石油醚。不溶于苯、氯仿、石油醚。白色针状结晶，熔点白色针状结晶，熔点212216212216，溶于热水、甲，溶于热水、甲醇、乙醇、冰醋酸等，微溶于冷水，几乎不溶于醇、乙醇、冰醋酸等，微溶于冷水，几乎不溶于苯、氯仿、石油醚。苯、氯仿、石油醚。（-）表）表儿茶素儿茶素（+）儿）儿茶素茶素（-）儿）儿茶素茶素（二）儿茶中主要有效成分的提取分离

24、（二）儿茶中主要有效成分的提取分离从儿茶中提取分离鞣质类成分是根据儿从儿茶中提取分离鞣质类成分是根据儿茶中的各种鞣质类成分的溶解性特点选择合茶中的各种鞣质类成分的溶解性特点选择合适的提取溶剂，去油溶剂，结晶溶剂，逐步适的提取溶剂，去油溶剂，结晶溶剂，逐步达到分离目的的。达到分离目的的。四四 课课 堂堂 互互 动动用前述知识说明儿茶中各种化学成分的特点和性质，用前述知识说明儿茶中各种化学成分的特点和性质，并分析生产工艺中用如何提取各种不同的鞣质类成分。并分析生产工艺中用如何提取各种不同的鞣质类成分。有机酸类有机酸类化学成分的提取分离技术化学成分的提取分离技术学习学习提示提示有机酸类化学成分的结构

25、、性有机酸类化学成分的结构、性质及提取分离知识质及提取分离知识任务二任务二青木香中有机酸类化学成分的青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术提取分离技术学习提示学习提示有机酸类有机酸类成分成分的理化性质的理化性质有机酸类有机酸类成分的结构类型成分的结构类型一一二三三 有机酸类化学成分的提取分离有机酸类化学成分的提取分离有机酸定定 义义有机酸是分子中含有羧基（-COOH）的一类酸性有机化合物分分 布布分布广泛，普遍存在于植物的花、叶、茎、果实、种子、根等部分。在植物体内除有少数以游离状态存在外，一般都与钙、钾、镁等金属离子或生物碱结合成盐。生物活性生物活性近年来发现很多药材中含有的有机酸类成分都具

26、有一定的生物活性。如茵陈蒿中绿原酸有利胆、抗菌作用；金银花中的异绿原酸有抗菌的作用等等。大量研究结果显示，有机酸有多种生物活性。脂肪族有机酸脂肪族有机酸芳香族有机酸芳香族有机酸一一 有机酸类有机酸类成分的结构类型成分的结构类型柠檬酸柠檬酸大风子油酸 绿原酸 柠檬酸柠檬酸大风子油酸大风子油酸绿原酸绿原酸 主要来源于柠檬主要来源于柠檬（CitruslimonCitruslimon(L.)Burm.f(L.)Burm.f）是芸香科小乔木或枝条）是芸香科小乔木或枝条开展的灌木开展的灌木 有预防感冒、刺激造血有预防感冒、刺激造血和抗癌等作用和抗癌等作用 主要来源于大风子科主要来源于大风子科(Flacou

27、rtiaceae)(Flacourtiaceae)大风子大风子属属(Hydnocarpus)(Hydnocarpus)的几种的几种乔木籽中获得的黄色或褐乔木籽中获得的黄色或褐黄色液体黄色液体 有攻毒，杀虫等作用有攻毒，杀虫等作用 主要来源于菊科植物主要来源于菊科植物茵陈茵陈（AremisiacapillalisThAremisiacapillalisThunb.unb.）早春采集的嫩茎叶）早春采集的嫩茎叶 有清热利湿等作用有清热利湿等作用有机酸类化学成分的检识溴酚溴酚蓝试蓝试验验 色谱检识色谱检识pHpH试试纸试纸试验验 有机酸溶液可使pH试纸呈酸性反应。薄层色谱展开剂：正丁醇冰醋酸水（415

28、）正丁醇乙醇水（415）异戊醇三甲基吡啶水（1021）正丁醇吡啶二氧六环水（14411）显色剂0.05%溴酚蓝的乙醇溶液喷雾，于蓝色背景上呈黄色斑点。将含有机酸的提取液滴在滤纸上，再滴加0.1%溴酚蓝试剂，立即在蓝色的背景上显黄色斑点。纸色谱吸附剂：聚酰胺（100目）淀粉水（515）铺板展开剂95%乙醇氯仿甲醇（11）显色剂0.05%溴酚蓝水溶液吸附剂硅胶石膏水（10230）湿法铺板，晾干后于105干燥半小时。展开剂95%乙醇浓氨水水（101612）醋酸乙酯甲醇浓氨水（9053）苯甲醇醋酸（9584）显色剂0.05%溴酚蓝水溶液三三 有机酸类化学成分的的提取分离有机酸类化学成分的的提取分离有有

29、机机酸酸类类化化学学成成分分的的的的提提取取分分离离水或碱水水或碱水提取提取-酸沉酸沉淀法淀法铅盐或钙盐铅盐或钙盐沉淀法沉淀法有机溶剂提有机溶剂提取法取法有机酸在中药中一般以盐的形式存在，故可用水或稀碱水提取（10%氢氧化钠），提取液经酸化后，如所生成的游离有机酸在水中溶解度较低，即有沉淀析出。也可用适当的有机溶剂萃取，有机酸溶于有机溶剂中。利用有机酸的二价或三价金属盐较难溶于水的性质，在含有有机酸的水溶液中加入醋酸铅、碱式醋酸铅或氢氧化钙，可产生有机酸的铅盐或钙盐的沉淀。再将所得的铅盐或钙盐的沉淀悬浮于乙醇中，分别按常法脱铅、脱钙（用硫酸），即可得粗品有机酸。根据游离有机酸易溶于有机溶剂，难

30、溶于水，而有机酸盐则易溶于有机溶剂的性质，可先用适宜的有机溶剂提取，提取液再用碱水萃取，有机酸成盐而转入碱水中，分出碱层、酸化，再用有机溶剂萃取，可得到较纯的总有机酸。任务二任务二 青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术 学习目标学习目标一一二青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术 必备知识必备知识三三学习目标学习目标1掌握青木香中马兜铃酸的提取分离原理及操作技术。知识要求知识要求2掌握青木香中马兜铃酸的提取、分离及鉴定技术。熟悉青木香中马兜铃酸的结构及性质。了解青木香中马兜铃酸的存在及生物活性。能力要求能力要求3熟练

31、进行青木香中马兜铃酸的提取、分离及鉴定操作。学会青木香中马兜铃酸的色谱鉴定技术。一一 学习目标学习目标二二 青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术青木香中有机酸类化学成分的提取分离技术 青青 木木 香香 为为 马马 兜兜 铃铃 科科 马马 兜兜 铃铃 属属 植植 物物 马马 兜兜 铃铃（Aristolochia Aristolochia debilisdebilis）的的干干燥燥根根。青青木木香香中中含含有有多多种种硝硝基基菲菲酸酸类类成成分分，统统称称为为马马兜兜铃铃酸酸。经经药药理理与与临临床床试试验验证证明明有有兴兴奋奋吞吞噬噬细细胞胞的的作作用用，可可提提高高抗抗生生素素及及化化疗疗药

32、药物物的的治治疗效果，并且毒性很低，治疗剂量仅为毒性剂量的疗效果，并且毒性很低，治疗剂量仅为毒性剂量的11。（一）设备、仪器及药品（一）设备、仪器及药品 索索氏氏提提取取器器、冷冷凝凝器器、圆圆底底烧烧瓶瓶、橡橡皮皮管管、水水浴浴、减减压压浓浓缩缩装装置置、普普通通漏漏斗斗、纱纱布布、pHpH试试纸纸、比比色色卡卡、玻玻璃璃棒棒、分分液液漏漏斗斗、青青木木香香粗粗粉粉、乙乙醇醇、碳碳酸酸氢氢钠钠、盐盐酸酸、丙丙酮酮、青青木木香粗粉香粗粉（二）青木香中马兜铃酸的提取（二）青木香中马兜铃酸的提取 1。马兜铃酸的结构、理化性质。马兜铃酸的结构、理化性质 马兜铃酸为黄白色针状结晶，能与硫酸作用产生绿马

33、兜铃酸为黄白色针状结晶，能与硫酸作用产生绿色。熔点色。熔点287287292292（分解）（分解）.微溶于水微溶于水,可溶于乙醇、可溶于乙醇、氯仿、乙醚、丙酮、碱水，不溶于苯、二硫化碳，遇碳氯仿、乙醚、丙酮、碱水，不溶于苯、二硫化碳，遇碳酸钡、醋酸铅等重金属溶液则产生沉淀。酸钡、醋酸铅等重金属溶液则产生沉淀。马兜铃酸马兜铃酸2.2.青木香中马兜铃酸的提取与分离流程如下：青木香中马兜铃酸的提取与分离流程如下：（1 1）青木香中马兜铃酸）青木香中马兜铃酸A A与尿囊素的提取。与尿囊素的提取。马兜铃酸马兜铃酸马兜铃总马兜铃总酸常用硅酸常用硅胶拄色谱胶拄色谱进行分离，进行分离，以氯仿、以氯仿、氯仿氯仿

34、-丙酮丙酮混合液洗混合液洗脱，再配脱，再配合薄层色合薄层色谱检识可谱检识可分得三种分得三种马兜铃酸：马兜铃酸：马兜铃酸马兜铃酸A A、马兜铃酸马兜铃酸及及7-7-羟基羟基马兜铃酸。马兜铃酸。（2 2）青木香中马兜铃总酸的提取）青木香中马兜铃总酸的提取北马兜铃果实中马兜铃酸北马兜铃果实中马兜铃酸A 的提取的提取北马兜铃种子中马兜铃北马兜铃种子中马兜铃酸酸D的提取的提取知识拓展知识拓展必备知识必备知识马兜铃总酸（马兜铃总酸（aristolochic acidaristolochic acid）橙黄色结晶，橙黄色结晶，味苦，味苦，熔点熔点262262266266（分解）。不溶于水，难溶于乙醇、乙醚、

35、（分解）。不溶于水，难溶于乙醇、乙醚、氯仿、醋酸乙酯，易溶于丙酮及碱性水溶液。氯仿、醋酸乙酯，易溶于丙酮及碱性水溶液。马兜马兜铃酸铃酸（1 1）马兜铃酸）马兜铃酸A A（aristolochic acid Aaristolochic acid A）分子式分子式C17H11NO7C17H11NO7，相对分子质量，相对分子质量341.29341.29，带光泽的棕色叶状结晶，带光泽的棕色叶状结晶（二甲基甲酰胺（二甲基甲酰胺-水），熔点水），熔点281281286286（分解）。溶于乙醇、（分解）。溶于乙醇、氯仿、丙酮、苯胺及碱中，微溶于水氯仿、丙酮、苯胺及碱中，微溶于水,几乎不溶于苯及二硫化碳几乎不

36、溶于苯及二硫化碳。（2 2）马兜铃酸）马兜铃酸B B（aristolochic acid Baristolochic acid B）分子式分子式C16H9NO6C16H9NO6，相对分子质量，相对分子质量311.26311.26。黄色粒鲸（氯仿），熔点。黄色粒鲸（氯仿），熔点267267271271（分解）。（分解）。（3 3）马兜铃酸）马兜铃酸C C（aristolochic acid Caristolochic acid C）分子式分子式C16H9NO7C16H9NO7，相对分子质量，相对分子质量327.27327.27。橘红色针晶（氯仿），熔。橘红色针晶（氯仿），熔点点284284（分解

37、）。（分解）。（4 4）马兜铃酸）马兜铃酸D D（aristolochic acid Daristolochic acid D）分子式）分子式C17H11NO8C17H11NO8，相对，相对分子质量分子质量357.29357.29。橙红色针晶（氯仿），熔点。橙红色针晶（氯仿），熔点271271（分解）。（分解）。北马兜铃果实中马兜铃酸北马兜铃果实中马兜铃酸A 的提取的提取北马兜铃种子中马兜铃北马兜铃种子中马兜铃酸酸D的提取的提取马兜铃酸马兜铃酸A、B、C、D结构结构R1R2R3R4马兜铃酸A马兜铃酸B马兜铃酸C马兜铃酸D必备知识必备知识 分子式分子式C C4 4H H6 6N N4 4O O3

38、 3，相对分子质量，相对分子质量158.12158.12。单斜片状结晶或棱柱结。单斜片状结晶或棱柱结晶（水），熔点晶（水），熔点238238，1g1g尿囊素溶于尿囊素溶于190ml190ml水、水、500ml500ml乙醇，热水及乙醇，热水及热乙醇中溶解度更大。几乎不溶于乙醚。热乙醇中溶解度更大。几乎不溶于乙醚。尿囊素尿囊素（allantoin）尿囊素尿囊素氨基酸类化学成分的提取分离技术氨基酸类化学成分的提取分离技术学习学习提示提示氨基酸类化学成分的结构、性氨基酸类化学成分的结构、性质及提取分离知识质及提取分离知识任务三任务三南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术技术学习

39、提示学习提示氨基酸类成分氨基酸类成分的结构类型的结构类型一一二三三氨基酸类化学成分的理化性质氨基酸类化学成分的理化性质氨基酸类化学成分的提取分离氨基酸类化学成分的提取分离 氨基酸氨基酸氨基酸广泛存氨基酸广泛存在于动植物体内，在于动植物体内，由于它的分子中由于它的分子中同时含有氨基和同时含有氨基和羧基，所以称为羧基，所以称为氨基酸。氨基酸氨基酸。氨基酸的活性作用也是的活性作用也是多方面的，如南多方面的，如南瓜子中南瓜子氨瓜子中南瓜子氨酸、使君子中使酸、使君子中使君子氨酸都有驱君子氨酸都有驱虫作用；天冬、虫作用；天冬、玄参和棉根中天玄参和棉根中天门冬素有镇咳和门冬素有镇咳和平喘的作用平喘的作用。南

40、瓜子氨酸南瓜子氨酸 使君子氨酸使君子氨酸天门冬素天门冬素 一一 氨基酸类成分氨基酸类成分的结构类型的结构类型 常见氨基酸以组成蛋白质的常见氨基酸以组成蛋白质的3030余种氨基酸为主，都属余种氨基酸为主，都属-氨基羧酸，具有氨基羧酸，具有R-CHR-CH（NHNH2 2）-COOH-COOH通式，多数是一元氨基一羧通式，多数是一元氨基一羧酸，也有一元氨基二羧酸、二元氨基一羧酸和含有杂环的氨基酸，也有一元氨基二羧酸、二元氨基一羧酸和含有杂环的氨基酸等。酸等。R-CH R-CH（NHNH2 2）-COOH-COOH 组成蛋白质常见氨基酸的结构组成蛋白质常见氨基酸的结构组组成成蛋蛋白白质质常常见见氨氨

41、基基酸酸的的结结构构一元氨基一元氨基一羧酸类一羧酸类(R=)二元氨基一二元氨基一羧酸类羧酸类(R=(R=）一元氨基一元氨基二羧酸类二羧酸类(R=)如甘氨酸（GLY）R=H；丙氨酸（ALA）R=CH3；丝氨酸（SER）R=CH2OH；半胱氨酸（CYST）R=CH2SH；磺丙氨酸（CYA）R=CH2SO3H；苯丙氨酸（PHEN）；酪氨酸（TYR）；-氨基丁酸(ABA)R=CH2CH3；酥氨酸(THR)；蛋氨酸(MET)R=CH2CH2SCH3；正缬氨酸(NOV)R=CH2CH2CH3缬氨酸(VAL)；异亮氨酸(ISOL)；亮氨酸亮氨酸(LEU)脯氨酸（PRO）；羟基脯氨酸（APRO）天冬氨酸（AS

42、P）R=CH2COOH；谷氨酸(麸氨酸)（GLU）R=CH2CH2COOH；羟基谷氨酸（HGLU）吡咯衍生物吡咯衍生物类类(R=)色氨酸（TRY）；，二氨基丁酸（DABA）R=CH2CH2NH2；组氨酸（HIST）；鸟氨酸（ORNT）R=CH2CH2CH2NH2；精氨酸（ARG）；赖氨酸赖氨酸 CH2(CH2)3NH2三三 氨基酸氨基酸类化学成分的提取类化学成分的提取 氨基酸类成分常用离子交换法提取。根据氨基酸易溶于水，难氨基酸类成分常用离子交换法提取。根据氨基酸易溶于水，难溶于有机溶剂的性质，提取氨基酸时，可用适量水浸泡药材，滤过，溶于有机溶剂的性质，提取氨基酸时，可用适量水浸泡药材，滤过，

43、滤液减压浓缩至滤液减压浓缩至1ml1ml相当相当1g1g生药后，加生药后，加2 2倍量倍量95%95%乙醇，沉淀除去蛋乙醇，沉淀除去蛋白、多糖等杂质，滤液再浓缩至小体积，通过强酸型阳离子交换树白、多糖等杂质，滤液再浓缩至小体积，通过强酸型阳离子交换树脂，然后用适当浓度的氢氧化钠（脂，然后用适当浓度的氢氧化钠（1mol/L1mol/L）或氨水（）或氨水（2mol/L2mol/L）洗脱，）洗脱，收集与茚三酮呈阳性反应的洗脱液，浓缩处理后，可得总氨基酸，收集与茚三酮呈阳性反应的洗脱液，浓缩处理后，可得总氨基酸，或用或用70%70%乙醇为溶剂进行提取，再将乙醇回收至无醇味，通过强酸乙醇为溶剂进行提取，

44、再将乙醇回收至无醇味，通过强酸型阳离子交换树脂，再用上法得总氨基酸。型阳离子交换树脂，再用上法得总氨基酸。任务三任务三 南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术二南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术 学习目标学习目标一一学习目标学习目标1掌握南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离原理及操作技术。知识要求知识要求2掌握南瓜子中南瓜子氨酸的提取、分离及鉴定技术。熟悉南瓜子中南瓜子氨酸的结构及性质。了解南瓜子中南瓜子氨酸的存在及生物活性。能力要求能力要求3熟练进行南瓜子中南瓜子氨酸的提取、分离及鉴定操作。学会南瓜子中南瓜子氨酸的色谱鉴定技术。一一 学习目标学

45、习目标二 南瓜子中南瓜子氨酸的提取分离技术 南南瓜瓜子子氨氨酸酸是是从从葫葫芦芦科科南南瓜瓜（Cucurbita Cucurbita moschatamoschata）的的种种子子中中分分离离出出的的一一种种氨氨基基酸酸。南南瓜瓜子子氨氨酸酸是是一一种种碱碱性性氨氨基基酸酸，可可与与过过氯氯酸酸（HClO4HClO4）形形成成结结晶晶性性的的盐盐，从从稀稀乙乙醇醇溶溶液液中中析析出出。通通过过实实验验表表明明，南南瓜子氨酸对血吸虫童虫生长发育有抑制作用，并能驱绦虫。瓜子氨酸对血吸虫童虫生长发育有抑制作用，并能驱绦虫。南瓜子氨酸南瓜子氨酸（一）设备、仪器及药品（一）设备、仪器及药品 强强酸酸型型

46、阳阳离离子子交交换换柱柱色色谱谱、弱弱碱碱型型阴阴离离子子交交换换柱柱色色谱谱、减减压压浓浓缩缩装装置置、普普通通漏漏斗斗、纱纱布布、pHpH试试纸纸、比比色色卡卡、氨氨水水、氯氯酸酸、95%95%乙乙醇、南瓜子醇、南瓜子（二）南瓜子中南瓜子氨酸的（二）南瓜子中南瓜子氨酸的 提取工艺流程提取工艺流程南瓜子中南瓜子氨酸的提取工艺流程南瓜子中南瓜子氨酸的提取工艺流程蛋白质和酶类化学成分的提取分离技术蛋白质和酶类化学成分的提取分离技术学习学习提示提示蛋白质和酶类化学成分的结构、蛋白质和酶类化学成分的结构、性质及提取分离知识性质及提取分离知识任务四任务四天花粉中蛋白质类化学成分的天花粉中蛋白质类化学成

47、分的提取分离技术提取分离技术知识知识链接链接分级沉淀法分级沉淀法学习提示学习提示蛋白质和酶类化学成分的理化性质蛋白质和酶类化学成分的理化性质一一二蛋白质和酶类化学成分的提取分离蛋白质和酶类化学成分的提取分离蛋白质和酶类蛋白质和酶类 蛋白质和酶是普遍存在的一类化合物，但已经蛋白质和酶是普遍存在的一类化合物，但已经发现作为有效成分而存在的却为数不多。如来自番发现作为有效成分而存在的却为数不多。如来自番木瓜的蛋白质水解酶，可作为驱除肠内寄生虫药，木瓜的蛋白质水解酶，可作为驱除肠内寄生虫药，称为木瓜酶；来自凤梨的凤梨酶又称菠萝酶，可以称为木瓜酶；来自凤梨的凤梨酶又称菠萝酶，可以消化蛋白质，并作为除肠虫

48、药和抗水肿及抗炎症药。消化蛋白质，并作为除肠虫药和抗水肿及抗炎症药。一一 蛋白质和酶类化学成分的理化性质蛋白质和酶类化学成分的理化性质 蛋白质是由蛋白质是由氨基酸以肽键的形式（即氨基与另一氨基氨基酸以肽键的形式（即氨基与另一氨基酸分子中羧基脱水形成的化学键）相互结合而形成的链状大分酸分子中羧基脱水形成的化学键）相互结合而形成的链状大分子化合物。多数蛋白质可溶于水，生成胶体溶液。一般煮沸其子化合物。多数蛋白质可溶于水，生成胶体溶液。一般煮沸其水溶液蛋白质即被凝结而自溶液中沉淀析出，振摇蛋白质水溶水溶液蛋白质即被凝结而自溶液中沉淀析出，振摇蛋白质水溶液能产生似肥皂状的泡沫。液能产生似肥皂状的泡沫。

49、酶是有机体内具有催化作用的蛋白质，具有专一性，一种酶是有机体内具有催化作用的蛋白质，具有专一性，一种酶只能催化某一种特定的反应。植物中往往特定的酶和苷类共酶只能催化某一种特定的反应。植物中往往特定的酶和苷类共存与同一组织中，易使苷类发生水解。酶能溶于水，在加热或存与同一组织中，易使苷类发生水解。酶能溶于水，在加热或用强酸、强碱、乙醇处理时则失去活性。用强酸、强碱、乙醇处理时则失去活性。颜色反应Millon反反应应双缩双缩脲反脲反应应蛋白质中存在大量肽链，当其在碱性水溶液中遇少量硫酸铜溶液时，即显紫色或紫红色。如果蛋白质分子中含有半胱氨酸或蛋氨酸等含硫氨基酸时，与碱及醋酸铅共热会产生黑色硫化铅沉

50、淀。蛋白质遇Millon试剂或共热能呈红色，证明蛋白质中有酪氨酸的存在。由于吲哚衍生物与乙醛酸缩合产生紫色。蛋白质分子中包含有色氨酸时呈阳性反应。Hopkins-Cole反应反应硫的硫的反应反应Sakaguchi反应反应c蛋白质分子中含有精氨酸时，在中性或微碱性的水溶液中加-萘酚的稀氢氧化钠溶液，混匀后滴加1%次亚氯酸钠溶液数滴（避免过量），出现红色为阳性反应。DanasyDanasyl l反应反应 蛋白质或肽类分子中末端氨基酸部分中氨基在有碳酸氢钠溶液存在时，易与1-二甲氨基萘5-磺酰氯反应生成相应的磺酰胺衍生物，从而具有强烈的黄色荧光（在紫光灯下观察），在0.10.001mol/L时也能藉