器官培养(精).ppt

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1、第第3章章 器官培养器官培养 大大 家家 好好！植物组织培养学植物组织培养学第第3章章 器官培养器官培养本章主要内容本章主要内容根的培养根的培养茎尖的培养茎尖的培养叶的培养叶的培养第第3章章 器官培养器官培养l(1)一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择；择；l(2)掌握茎尖培养的种类和操作步骤；掌握茎尖培养的种类和操作步骤；l(3)掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整；调整；l(4)掌握离体叶片的培养步骤；掌握离体叶片的培养步骤；l(5)一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。一般掌握胚胎培养的类型与

2、各自的注意事项。第第3章章 器官培养器官培养本章教学目的与要求本章教学目的与要求器官培养的定义：器官培养的定义：第第3章章 器官培养器官培养研究器官的功能、分化、形研究器官的功能、分化、形态建成；态建成；快速繁殖；快速繁殖；获得脱毒苗获得脱毒苗种质保藏等种质保藏等 指植物某一器官的全部或部分或器官指植物某一器官的全部或部分或器官原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、果实、种子等果实、种子等培养目的：培养目的：第一节第一节 根的培养根的培养 根培养的意义根培养的意义:1)是进行根系生理研究的最优良实验体系是进行根系生理研究的最优良实验体系;2)是研究器官分化、形

3、态建成的良好体系；是研究器官分化、形态建成的良好体系；3）可建立快速生长的根无性系。）可建立快速生长的根无性系。第第3章章 器官培养器官培养一、离体根的培养方法：一、离体根的培养方法：1 1、培养无菌苗、培养无菌苗2 2、切取、切取1.01.0cmcm的根尖的根尖3 3、接种在、接种在WhiteWhite培养基或培养基或1/21/2MSMS培养基中暗培养培养基中暗培养4 4、一周后，取侧根扩大培养，可得到、一周后，取侧根扩大培养，可得到离体根的离体根的无性系无性系第一节第一节 根的培养根的培养二、培养基：二、培养基：l无机离子较低的无机离子较低的White培养基培养基l或者或者2/3或或1/2

4、的的MS、B5培养基培养基三、影响离体根生长的因素三、影响离体根生长的因素第一节第一节 根的培养根的培养5 5、环境条件环境条件4 4、pHpH3 3、生长物质、生长物质2 2、培养基、培养基1 1、基因型、基因型影响因素影响因素第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养l一、含义及意义一、含义及意义1 1、类型、类型 茎茎尖尖分分生生组组织织培培养养：对对长长度度0 0.1mm.1mm左左右右，含含1-21-2个个叶叶原原基基的的茎茎尖尖进进行行培培养养，目目的的是是获获得得无无病病毒毒植株植株 普普通通茎茎尖尖培培养养：对对几几毫毫米米至至几几十十毫毫米米长长的的茎茎尖尖、芽尖及侧芽的芽尖及侧芽的

5、培养，目的是培养，目的是快速繁殖快速繁殖。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养2、茎尖培养的意义、茎尖培养的意义l无性系快速繁殖；无性系快速繁殖；l培养无病毒苗，品种改良；培养无病毒苗，品种改良；l理论基础研究。理论基础研究。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养蝴蝶兰腋芽萌发蝴蝶兰腋芽萌发二、茎尖培养的一般方法二、茎尖培养的一般方法l(一一)制备外植体制备外植体取取1-21-2cmcm的枝条顶梢，去小叶的枝条顶梢，去小叶-消毒消毒-解剖镜下用解解剖镜下用解剖刀除去幼叶和叶原基，露出生长点，切下剖刀除去幼叶和叶原基，露出生长点，切下0.1-0.20.1-0.2mmmm长的茎尖长的茎尖(含含1-21-

6、2个叶原基个叶原基)l(二二)培养基：一般为培养基：一般为MSMSl(三三)培养方法：培养方法：l1 1、固体培养法、固体培养法：试管培养：试管培养第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养2 2、纸桥培养法、纸桥培养法含含义义：用用酒酒杯杯状状的的滤滤纸纸代代替替琼琼脂脂，使使杯杯底底朝朝上上塞塞入入试试管管中中，与与液液体体培培养养基基接接触触，将将离离体体茎茎尖尖置置于滤纸上方进行培养。于滤纸上方进行培养。优点优点：培养基是液体培养基，营养物质培养基是液体培养基，营养物质能通过滤纸均衡而持久地供给外植体，能通过滤纸均衡而持久地供给外植体，有利于外植体的健康成长有利于外植体的健康成长 ；缺点缺点：

7、操作工艺复杂操作工艺复杂 。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养三、茎尖分生组织培养与脱毒三、茎尖分生组织培养与脱毒l见第八章见第八章 植物脱毒技术植物脱毒技术四、普通茎尖培养与繁殖技术四、普通茎尖培养与繁殖技术l概概念念：快快速速繁繁殖殖(微微繁繁殖殖):):用用组组织织培培养养的的方方法法，使使植植物物的的部部分分器器官官、组组织织迅迅速速扩扩大大培培养养，繁繁殖殖出出大量幼苗的繁殖方法。大量幼苗的繁殖方法。l特特点点：繁繁殖殖速速度度快快；使使用用材材料料少少，生生产产效效率率高高，省省时时省省工工；节节约约空空间间有有利利于于工工厂厂化化生生产产；不不受受病病虫害侵害。虫害侵害。第二节第

8、二节 茎尖的培养茎尖的培养（一）茎尖微繁技术的过程：分（一）茎尖微繁技术的过程：分5个阶段个阶段l1、无菌培养体系的建立、无菌培养体系的建立、l2、芽的增殖、芽的增殖l3、中间繁殖体的增殖、中间繁殖体的增殖l4、诱导生根、诱导生根l5、试管苗的移植、试管苗的移植第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养1、无菌培养体系的建立、无菌培养体系的建立初代培养建立的无性繁殖系包括：初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。等。外植体的制备外植体的制备培养基培养基培养条件培养条件第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养2、芽的增殖芽的增殖（1）顶芽和腋芽的发育）顶芽和腋芽的

9、发育l顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的丛生苗结构。丛生苗结构。l丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的嫩茎。这种繁殖方式称作嫩茎。这种繁殖方式称作微型扦插或无菌短枝扦微型扦插或无菌短枝扦插插l优点优点：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保持原品种的特性。持原品种的特性。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养图示茎段培养过程图示茎段培养过程健康植株上选健壮的枝梢健康植株上选健壮的枝梢植株再生植株再生培养培养75%酒精酒精1分钟分钟1%次氯酸钠次氯酸钠0.1%升汞升汞

10、去叶片用水冲洗茎段去叶片用水冲洗茎段（2）不定芽的发育）不定芽的发育 不定芽产生的途径：不定芽产生的途径：l外植体上直接产生外植体上直接产生l由外植体诱导的愈伤组织上产生。由外植体诱导的愈伤组织上产生。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养外植体外植体脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织再分化再分化器官原基器官原基第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养l由第二阶段芽的增殖产生的数量有限的芽、苗、由第二阶段芽的增殖产生的数量有限的芽、苗、原球茎称为中间繁殖体。原球茎称为中间繁殖体。l将之转接到新鲜的相同培养基上进行继代培养，将之转接到新鲜的相同培养基上进行继代培养，3-43-4周转接一次，扩大培养。周转接一次，

11、扩大培养。3、中间繁殖体的增殖、中间繁殖体的增殖茎的培养发育方向茎的培养发育方向v腋芽萌发腋芽萌发v脱分化后产生胚状体（原球茎）脱分化后产生胚状体（原球茎）v脱分化后直接产生不定器官脱分化后直接产生不定器官v脱分化后形成愈伤组织脱分化后形成愈伤组织第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养4、壮苗和生根、壮苗和生根壮苗目的壮苗目的：使增殖的嫩枝生根产生小植：使增殖的嫩枝生根产生小植 株，以便移栽。株，以便移栽。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养l用用WhiteWhite、1 1/2/2或或1 1/3MS/3MS、B B5 5等生根等生根培养基培养基。l降低降低N N，P P，K K盐的量。盐的量。l适

12、当加大生长素（如适当加大生长素（如NAANAA），不用或少用细胞分），不用或少用细胞分裂素，或在无裂素，或在无激素激素的培养基上生根。的培养基上生根。l蔗糖蔗糖降低到降低到1.0-1.5%1.0-1.5%，以增强植株自养能力；，以增强植株自养能力；l加入加入1%1%左右的左右的活性炭活性炭；l增加增加光强度光强度，以提高小植株的光合能力。，以提高小植株的光合能力。第二节第二节 茎尖的培养茎尖的培养试管苗生根的措施试管苗生根的措施(二二)影响茎尖培养微繁殖的因素影响茎尖培养微繁殖的因素l基因型基因型l外植体的大小外植体的大小l供试植株的生理状态供试植株的生理状态l芽在植株上的部位芽在植株上的部位

13、l供试植株的年龄供试植株的年龄l培养基培养基l褐变褐变l玻璃化玻璃化一、定义一、定义：离体叶的培养是指包括叶原基、叶柄、离体叶的培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。第三节第三节 叶的培养叶的培养第第3章章 器官培养器官培养叶培养的意义：叶培养的意义：l1、是研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形、是研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形成的好方法成的好方法l2、通过叶组织的脱分化与再分化以证实叶细、通过叶组织的脱分化与再分化以证实叶细胞的全能性胞的全能性l3、通过叶组织培养，探索离体叶组织培养的、通过叶组织培养，探索离体叶组织培养的条件和影

14、响因素条件和影响因素l4、建立体细胞快速无性繁殖体系、建立体细胞快速无性繁殖体系l5、叶细胞培养物经诱变筛选突变体。、叶细胞培养物经诱变筛选突变体。第三节第三节 叶的培养叶的培养二、叶组织培养的方法二、叶组织培养的方法1、制备外植体：、制备外植体：幼嫩叶片幼嫩叶片-水洗水洗-消毒消毒-无菌水洗。无菌水洗。2、影响培养因素：、影响培养因素：1）6-BA和和KT利于利于芽芽的形成；的形成；2,4-D利于利于愈伤组织愈伤组织形成。形成。2）极性：叶片）极性：叶片腹面向上腹面向上放置利于芽的分化放置利于芽的分化3）损伤：常从叶柄、叶脉的）损伤：常从叶柄、叶脉的切口处切口处形成愈伤组织和芽。形成愈伤组织

15、和芽。第三节第三节 叶的培养叶的培养三、离体叶组织中再生植株发生途径三、离体叶组织中再生植株发生途径1 1、直接产生不定芽、直接产生不定芽2 2、离体叶、离体叶 愈伤组织愈伤组织 不定芽不定芽3 3、离体叶离体叶 愈伤组织愈伤组织 胚状体胚状体 不定芽不定芽4 4、离体叶离体叶 小鳞茎或球状体小鳞茎或球状体 愈伤组织愈伤组织 第三节第三节 叶的培养叶的培养番茄子叶培养番茄子叶培养百合鳞叶培养百合鳞叶培养第三节第三节 叶的培养叶的培养烟草叶片培养烟草叶片培养叶的培养：叶的培养：(1)植物器官培养的含义。植物器官培养的含义。(2)离体根培养的方法、培养基、影响离体根生长的因素。离体根培养的方法、培养基、影响离体根生长的因素。(3)茎尖培养的含义；茎尖培养包括普通茎尖培养和茎尖分茎尖培养的含义；茎尖培养包括普通茎尖培养和茎尖分生组织培养。生组织培养。(4)纸桥培养的含义纸桥培养的含义(5)茎尖微繁一般的过程茎尖微繁一般的过程(6)离体叶组织脱分化和再分化中，茎和芽分化主的离体叶组织脱分化和再分化中，茎和芽分化主的4个途径个途径(7)试管苗诱导生根方法。试管苗诱导生根方法。第第3章章 器官培养器官培养本章小结：本章小结：第第3章章 器官培养器官培养