定量分析方法概述.ppt

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1、第第四章四章 药典中常见定量分析方法药典中常见定量分析方法概述概述 药物的定量分析是指准确测定药品药物的定量分析是指准确测定药品有效成分有效成分或指标性成分或指标性成分的含量的含量。它是评价药品质量、判它是评价药品质量、判断药物优劣的重要手段。断药物优劣的重要手段。对药物进行定量分析时，应按对药物进行定量分析时，应按药品质量标准药品质量标准进行测定。进行测定。药物定量分析可选用化学分析法和仪器分析药物定量分析可选用化学分析法和仪器分析法。法。化学测定法化学测定法仪器测定法仪器测定法重量分析法重量分析法滴定分析法滴定分析法分光光度法：紫外分光光度法：紫外-可见分光光度法最常用可见分光光度法最常用

2、色谱分析法：高效液相色谱法（色谱分析法：高效液相色谱法（HPLC）气相色谱法（气相色谱法（GC）电化学分析法电化学分析法第一节第一节 滴定分析法滴定分析法一、基本原理及特点一、基本原理及特点 滴定分析法是将一种已知准确浓度的溶液滴定分析法是将一种已知准确浓度的溶液（滴定液滴定液）滴加到待测物质的溶液中，直到化）滴加到待测物质的溶液中，直到化学反应按学反应按计量关系计量关系完全作用为止，然后根据所完全作用为止，然后根据所用滴定液的浓度和体积计算出待测物质含量的用滴定液的浓度和体积计算出待测物质含量的一种分析方法，又称一种分析方法，又称“容量分析法容量分析法”。一、基本原理及特点一、基本原理及特点

3、沉淀、配位滴定沉淀、配位滴定非水滴定非水滴定氧化还原氧化还原酸碱滴定酸碱滴定原料药纯度达到原料药纯度达到98.5%以上时首选容量分析法以上时首选容量分析法二、应用与实例二、应用与实例（一）酸碱滴定法（一）酸碱滴定法 1.直接滴定法直接滴定法 适用范围：适用范围：CKa10-8的弱酸的弱酸、CKb10-8的弱碱的弱碱 终点：指示剂变色终点：指示剂变色 2.剩余滴定法剩余滴定法 适用范围：适用范围：药物难溶于水或有其他原因不宜采用药物难溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法直接滴定法二、应用与实例二、应用与实例（一）酸碱滴定法（一）酸碱滴定法实例一实例一 布洛芬含量测定布洛芬含量测定溶剂：中性乙醇（

4、对酚酞显中性）溶剂：中性乙醇（对酚酞显中性）指示剂：酚酞指示剂：酚酞滴定液：氢氧化钠（滴定液：氢氧化钠（0.1mol/L）滴定度（滴定度（T）：）：每每1ml氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于相当于20.63mg的的C13H18O2羧基酸性二、应用与实例二、应用与实例（一）酸碱滴定法（一）酸碱滴定法实例二实例二 氯贝丁酯氯贝丁酯含量测定含量测定溶剂：中性乙醇溶剂：中性乙醇水解溶液：定量过量氢氧化钠滴定液（水解溶液：定量过量氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）指示剂：酚酞指示剂：酚酞滴定液：盐酸滴定液（滴定液：盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定度：滴定度：每每1ml氢氧化钠滴

5、定液（氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于）相当于121.4mg的的C12H15ClO3先水解再回滴二、应用与实例二、应用与实例（二）非水溶液滴定法（二）非水溶液滴定法（主要介绍主要介绍非水碱量法非水碱量法）溶剂溶剂滴定液滴定液指示剂指示剂应用应用非水碱非水碱量法量法冰醋酸冰醋酸高氯酸高氯酸结晶紫结晶紫弱碱性药物弱碱性药物及其盐类及其盐类二、应用与实例二、应用与实例实例实例 盐酸可乐定含量测定盐酸可乐定含量测定溶剂：冰醋酸溶剂：冰醋酸+醋酸汞醋酸汞滴定液：高氯酸滴定液（滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示剂：结晶紫指示剂：结晶紫滴定终点：蓝绿色滴定终点：蓝绿色滴定度：每滴定度：每1

6、ml高氯酸滴定液（高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于26.66mg的的C9H9Cl2N3HCl。有机碱氢卤酸盐二、应用与实例二、应用与实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法1.碘量法碘量法（1）基本原理）基本原理滴定液：碘滴定液滴定液：碘滴定液直接碘量法直接碘量法剩余碘量法剩余碘量法置换碘量法置换碘量法指示剂：淀粉指示剂：淀粉定量过量碘滴定液定量过量碘滴定液滴定液：硫代硫酸钠滴定液：硫代硫酸钠用于强氧化剂测定用于强氧化剂测定KI+硫代硫酸钠硫代硫酸钠二、应用与实例二、应用与实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法1.碘量法碘量法（2）应用）应用 实例一实例一 安乃近片含量

7、测定安乃近片含量测定 溶剂：溶剂：乙醇与乙醇与0.01mol/L盐酸溶液盐酸溶液 滴定液：滴定液：碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）终点：终点：浅黄色（或带紫色）在浅黄色（或带紫色）在30秒钟内不褪秒钟内不褪 滴定度：滴定度：每每1ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于17.57mg的的C13H16N3NaO4SH2O二、应用与实例二、应用与实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法 1.碘量法碘量法（2）应用）应用 实例二实例二 右旋糖酐右旋糖酐20葡萄糖注射液中葡萄糖葡萄糖注射液中葡萄糖的含量测定的含量测定 溶剂：溶剂：定定量过量（量过量（0.05mol/L）碘

8、滴定液）碘滴定液 滴定液：滴定液：硫代硫酸钠滴定液（硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）指示剂：淀粉，近终点加入，滴定至蓝色消失指示剂：淀粉，近终点加入，滴定至蓝色消失 滴定度：每滴定度：每1ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于 9.909mg的的C6H12O6H2O二、应用与实例二、应用与实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法（1）基本原理）基本原理二、应用与实例二、应用与实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法（2）应用）应用:含有含有芳香第一胺或水解后能生成芳香第一胺芳香第一胺或水解后能生

9、成芳香第一胺的化合物的化合物 滴定条件：滴定条件：1.加入过量的盐酸加入过量的盐酸 2.在室温条件（在室温条件（1030）下滴定）下滴定 3.滴定时加入溴化钾作为催化剂滴定时加入溴化钾作为催化剂 4.滴定管尖插入液面下滴定管尖插入液面下2/3处处,一次一次性将入大部分亚硝酸滴定液性将入大部分亚硝酸滴定液在搅拌下迅在搅拌下迅速加入，近终点时滴定管提出液面，淋速加入，近终点时滴定管提出液面，淋洗、缓慢滴定；洗、缓慢滴定；滴定终点:仪器装置:电极反应:阴极:HNO2He NOH2O阳极:NOH2OHNO2He终点NaNO2电流指示终点的方法指示终点的方法：永停滴定法永停滴定法二、应用与实例二、应用与

10、实例（三）氧化还原滴定法（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法（2）应用）应用 实例实例 盐酸克仑特罗含量测定盐酸克仑特罗含量测定 溶剂：溶剂：盐酸溶液（盐酸溶液（12）滴定液：滴定液：亚硝酸钠滴定液（亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）滴定度：滴定度：每每lml亚硝酸钠滴定液（亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于15.68mg的的C12H18Cl2N2OHCI芳香第一胺单选1.置换碘量法中所用的滴定液为（）A.碘滴定液 B.硫代硫酸钠滴定液 C.亚硝酸钠滴定液 D.盐酸滴定液 E.硝酸银滴定液2.可用亚硝酸钠滴定法测定的药物是（）A.Ar-NH2 B.Ar-NO

11、2 C.Ar-COOR D.Ar-NHR BA单选3.亚硝酸钠滴定法测定药物含量时，一般需加入溴化钾，其目的是（）A.使终点变色明显 B.抑制生成的重氮盐分解C.避免亚硝酸逸失 D.作为催化剂，加快重氮化反应速度E.防止偶氮化合物形成D单选4.关于亚硝酸钠滴定法的叙述，错误的是（）A.对有酚羟基的药物，均可用此方法测定含量 B.水解后呈芳伯氨基的药物，可用此方法测定含量 C.芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐 D.在强酸性介质中，可加速反应的进行 E.反应终点多用永停法或外指示剂法 A5.以冰醋酸为溶剂的是（）A.酸碱滴定法 B.亚硝酸钠滴定法 C.非水碱量法 D.非水酸量法

12、E.配位滴定法法C第第二二节节 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 分光光度法是通过测定物质在特定波长处分光光度法是通过测定物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法该物质进行定性和定量分析的方法 定量依据：定量依据：朗伯朗伯-比尔定律比尔定律 单色光单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被浓度范围内被该物质吸收的量该物质吸收的量与该物质的与该物质的浓度浓度和和液层的厚度液层的厚度成正比成正比一、基本原理一、基本原理朗伯朗伯-比尔定律比尔定律吸收系数，溶液浓度为吸收系数

13、，溶液浓度为1%（g/m1），液层厚度为），液层厚度为lcm时的吸光度值；时的吸光度值；为为100ml溶液中所含被测物质溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物的重量（按干燥品或无水物计算）（计算）（g）；）；为液层厚度（为液层厚度（cm）含有含有共轭体系共轭体系、芳香环芳香环等发色基团，等发色基团，均可在紫外区（均可在紫外区（200400nm）或可见）或可见光区（光区（400760nm）产生吸收）产生吸收 药物在可见光区若无吸收，但在一药物在可见光区若无吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理显色定条件下加入显色试剂或经过处理显色后，能对可见光产生吸收后，能对可见光产生吸收。二、应用二、

14、应用(一)测定方法1.选选吸光度最大的波长吸光度最大的波长作为测定波长。作为测定波长。2.调节供试品溶液的浓度，使吸光度读数在调节供试品溶液的浓度，使吸光度读数在之间。之间。供试品溶液的吸光度供试品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度1）对照品比较法：）对照品比较法：条件：条件：A.A.待测物与对照品在相同条件下测定（同种物质，待测物与对照品在相同条件下测定（同种物质，同台仪器，同一波长测，故同台仪器，同一波长测，故 E E、L L相等）相等）B.B.待测物与对照品浓度相近待测物与对照品浓度相近2）吸收系数法（绝对法）

15、吸收系数法（绝对法）100g/ml g/100ml%11%11%11=LEACLEACCLEAcmcmcm）（）（3）比色法）比色法 加入显色剂后，按照加入显色剂后，按照对照品比较法对照品比较法测定。测定。影响显色因素很多，故需注意影响显色因素很多，故需注意平行平行操作。操作。空白对照：溶剂空白对照：溶剂+显色剂，同法处理显色剂，同法处理4.标准曲线法标准曲线法 用对照品的溶液，用对照品的溶液，以以吸光度吸光度与与相应的浓度相应的浓度绘绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量线上查得其相应的浓度，并求出其含量注：复杂，

16、当吸光度和浓度关系不呈良好线性时用。（二）仪器的校正和检定（二）仪器的校正和检定b.吸光度的准确性吸光度的准确性a.波长的校正波长的校正c.杂散光的检查杂散光的检查（二）仪器的校正和检定（二）仪器的校正和检定（二）仪器的校正和检定（二）仪器的校正和检定 1.波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液 2.吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定并计算规定波长处测定并计算 ，应符合下表规，应符合下表规定定3.杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸杂散光的

17、检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定钠溶液，规定波长处测定透光率透光率，应符合下表，应符合下表规定规定（三）对溶剂的要求（三）对溶剂的要求 含有含有杂原子杂原子的有机溶剂，使用范围不能小于的有机溶剂，使用范围不能小于截止使用波长截止使用波长三、实例三、实例（一）（一）奥沙西泮片含量测定奥沙西泮片含量测定20片，精密称定片，精密称定研细研细片粉，片粉，W200ml量瓶量瓶150ml甲醇甲醇奥沙西泮溶解奥沙西泮溶解定容，摇匀定容，摇匀过滤过滤5ml续滤液续滤液100ml量瓶量瓶乙醇乙醇稀释，定容稀释，定容UV检测波长：检测波长：229nm吸收系数：吸收系数：1252吸收系数法三、实

18、例三、实例（二）呋喃唑酮含量测定（二）呋喃唑酮含量测定约约20mg，精密称定，精密称定研细研细250ml量瓶量瓶+40ml二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺溶解溶解定容定容精密量取精密量取10ml100ml量瓶量瓶水水定容定容对照品：呋喃唑酮对照品：呋喃唑酮检测波长：检测波长：367nm对照品比较第第三三节节 色谱分析法色谱分析法一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法（一）基本原理（一）基本原理一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法（二）应用（二）应用1.对仪器的一般要求对仪器的一般要求(1)色谱柱色谱柱反相：反相：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶正相：正相：硅胶硅胶离子交换：离子交换：离子交换填充

19、剂离子交换填充剂分子排阻：分子排阻：凝胶或高分子多孔微球凝胶或高分子多孔微球C18硅胶表面硅胶表面一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法温度要求：温度要求：40流流动动相相pH：282.检测器检测器常用常用紫外检测器紫外检测器其次有二极管阵列检测器其次有二极管阵列检测器(DAD)荧光检测器荧光检测器示差折光检测器示差折光检测器蒸发光散射检侧器蒸发光散射检侧器电化学检测器和质谱检测器等电化学检测器和质谱检测器等(3)流动相流动相 1.甲醇甲醇-水水、乙腈乙腈-水水 2.尽可能少用含有缓冲液尽可能少用含有缓冲液的流动相的流动相 3.有机溶剂比例不能低于有机溶剂比例不能低于5%药品标准中规定的色谱条件

20、，药品标准中规定的色谱条件，固定相种类、固定相种类、流动相组成、检测器类型流动相组成、检测器类型不得任意改变，其他均不得任意改变，其他均可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例的百分比例X33%时，允许改变范围为时，允许改变范围为0.7 X1.3 X，当，当X33%时，允许改变时，允许改变范围为范围为X-10%X+10%1.高效液相色谱图：信号高效液相色谱图：信号-时间曲线时间曲线2.高效液相色高效液相色谱谱系系统统适用性适用性试验试验（1）色）色谱谱柱的理柱的理论论板数（板数

21、（n）（2）分离度（）分离度（R）除另有规定外，定量分析除另有规定外，定量分析时分离度应大于时分离度应大于1.5（3）重复性（）重复性（R）连续进样连续进样，峰面，峰面积积，RSD 2.0%（4）拖尾因子（拖尾因子（T）T：0.951.053.测测定方法定方法（1）外标法）外标法X：供试品：供试品R：对照品：对照品供试品供试品供试品溶液供试品溶液对照品对照品对照品溶液对照品溶液（2）内标法）内标法对照品对照品+内标内标 对照品峰对照品峰AR 内标物峰内标物峰As 6min 8min（2）内标法）内标法供试品供试品+内标内标 供试品峰供试品峰Ax 内标物峰内标物峰As 6min 8min3.测测

22、定方法定方法（3）加校正因子的主成分自身）加校正因子的主成分自身对对照法照法（4）不加校正因子的主成分自身）不加校正因子的主成分自身对对照法照法（5）面）面积积归一化法归一化法二、气相色谱法二、气相色谱法（一）基本原理（一）基本原理有机溶剂的气相分离图谱有机溶剂的气相分离图谱（二）（二）应应用用1.对仪对仪器的一般要求器的一般要求（1）载载气源气源：氦气、：氦气、氮气氮气、氢氢气，气，纯纯度度99.99%以上以上（2）进样进样部分：采用部分：采用溶液直接溶液直接进样进样或或顶顶空空进进样样（3）色）色谱谱柱：填充柱或毛柱：填充柱或毛细细管柱管柱毛细管柱和填充柱毛细管柱和填充柱色谱柱为填充柱或毛

23、细管柱 常用的固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。新填充柱和毛细管柱在使用前需老化以除去残留溶剂及低分子量的聚合物；色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。（4）柱温箱：控温精度）柱温箱：控温精度应应在在1，且温度波，且温度波动动小于每小小于每小时时0.1（5）检测检测器：器：火焰离子化火焰离子化检测检测器（器（FID）、热导检测热导检测器（器（TCD）、氮磷）、氮磷检测检测器（器（NPD）、）、电电子捕子捕获检测获检测器（器（ECD）、）、质谱检测质谱检测器器（MS）等）等（6）数据）数据处处理系理系统统：记录仪记录仪、积积分分仪仪以及以及计计算机工作站等算机工作站等 2.系统适用性试验（和液相相同）系统适用性试验（和液相相同）3.测定法测定法（1）内标法）内标法（2）外标法）外标法（3）面积归一化法）面积归一化法（4）标准溶液加入法）标准溶液加入法 测定供试品中某个杂质测定供试品中某个杂质或主成分含量或主成分含量