油镜及荧光显微镜的原理及使用方法.pptx

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1、光学显微镜的使用方法光学显微镜注意事项荧光显微镜的使用原理123第1页/共22页光学显微镜光学显微镜（Optical Microscope，简写OM）是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。第2页/共22页光学显微镜的使用方法低、高倍镜观察进一步放大的部分移到视野的中心第3页/共22页光学显微镜的使用方法集光器上升到最高位置光圈开到最大第4页/共22页光学显微镜的使用方法转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油第5页/共22页光学显微镜的使用方法用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为

2、止。不出现物象 目标不理想加油区外加油区内低倍高倍油镜低倍油镜油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。第6页/共22页光学显微镜注意事项1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势；2.水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净；3.放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜；4.不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏；5.使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。第7页/共22页荧光显微镜的使用原理第8页/共22页什么是荧光？概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状

3、态，再回到低能状态时释放出的光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。自发性荧光分类诱发性荧光细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光一般很微弱，如叶绿素。如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。第9页/共22页荧光显微镜荧光显微镜(Fluorescence microscope)是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。第10页/共22

4、页第11页/共22页多采用200W的超高压汞灯作光源。原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。汞灯光源第12页/共22页激发滤板 紫外光紫外光激发滤板激发滤板紫紫 外蓝光激发滤板外蓝光激发滤板400nm紫外光紫蓝光激发滤板紫蓝光激发滤板400nm可见光300-450nm光350-490nm光根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围

5、的激发光。提供一定波长范围的激发光。第13页/共22页分光镜分光镜反射短波，透射长波。短波激发光在分光镜处反射，由物镜到荧光物质，产生的长波长发射光经物镜返回，并透过分光镜。第14页/共22页压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。紫外光紫外光压制滤板压制滤板紫紫 外蓝光压制滤板外蓝光压制滤板紫蓝光压制滤板紫蓝光压制滤板可见光紫外光510nm460nm第15页/共22页 荧光显微镜的种类荧光显微镜的种类 落射式落射式 透射式透射式 第16页/共22页荧光显微镜的主要部件荧光显微镜的主要部件 透射式汞灯光源激发滤版暗场聚光镜压制滤版 落射式汞灯光源激发滤版分光镜压制滤

6、版第17页/共22页300-490nm510nm520-560nm第18页/共22页荧光显微镜的使用方法1打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤版分光镜压制滤板。透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤版，在物镜的后面装上相应的压制滤板。3用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。4放置标本片，调焦后即可观察。第19页/共22页荧光显微镜的使用方法注意事项：1.末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；2.用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；3.高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。第20页/共22页Thank You第21页/共22页感谢您的观看！第22页/共22页