2023年PCR检验_pcr检验.docx

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1、2023年PCR检验_pcr检验 PCR检验由我整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“pcr检验”。 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2023年，PCR

2、已发展到第三代技术。1973年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。 PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链，低温（经常是60C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 荧光定量PCR技术检测的报告形式 一，拷贝数的意义： 表示原始标本内可供探针结合的核酸片段数量 二，拷贝数与病原体的关系： 拷贝数与病原体

3、的数量成正相关 三，报告形式：1如果标本量是可以定量的，如血液等，则检测结果报告为：IU/ml(可溯源到国际标准物质的标准品)如HBV-DNA：检测下限：100IU/毫升 即： Ct值得意义 扩增越靠后定量的重复性就越差 -扩增末期，扩增效率可能因为大量的靶序列而产生不可控的影响，偏离线性-在Ct值处重复性非常好-荧光定量技术要求在低浓度进行 荧光定量PCR在临床中的应用 一,感染性疾病 1，肝炎病毒定量检测 2，结核杆菌及呼吸道病原体检测 3，优生优育（TORCH）相关项目检测 4，性病病原体检测 5，手足口病相关病毒EV71，柯萨奇病毒的检测 二，肿瘤个体化诊断与治疗 三，遗传性疾病 四，

4、疾病风险评估 乙型肝炎病毒（Hepatitis B） HBV基因分型与CHB（临床遗传性疾病）的关系 全基因组测序HBV可分为A.B.C.D.E.F.G.H 8个基因型 HBV基因型-HBV基因型与病毒复制及病毒标志物表达的关系-HBV基因型临床疾病谱及疾病预后的关系-HBV基因型与抗病毒疗效之间有关系 血清学指标（-）不能排除HBV感染 HBeAg(-)/HBV-DNA(+)编码e抗原的pre C区基因极易出现变异，在pre C区出现终止密码子，在pre C区基因与C区基因不能转译出完整的e抗原。导致HBeAg表达缺失，机体感染HBV不表达HBeAg，当然血清学方法也不能检测出HBeAg的存

5、在。 HBV基因型-HBV基因型临床疾病谱及疾病预后的关系-HBV基因型是影响慢性乙型肝炎的临床转归的主要决定因素之一。 -HBV感染的临床转归一方面决定于患者的年龄和免疫能力，另一方面与基因型种类密切相关。在B,C为优势地区，C型具有较强的疾病能力，预后差；在以A,D为优势的地区，D型具有较强的致病性，肝病严重，预后不良；基因型C在乙肝后肝硬化的发病中起一定的作用，然而基因型B与年轻无肝硬化患者肝癌的发生有关。 HBV基因型与抗病毒疗效之间有关系 -干扰素抗病毒疗效与HBV基因型有一定的相关性，基因C和D对干扰素的治疗反应比基因型A和B要差 （HBV基因型与病毒复制与清除。病毒变异.临床表现

6、.治疗应答和预后均有关系，提示不同基因型具有不的致病性） HBV DNA与疾病的诊断 HBV DNA与乙肝”两对半“ -”两对半”：机体的免疫反应状态，为间接指标-HBV DNA是乙肝病毒的遗传物质，是病毒存在和复制的最可靠，最直接的指标。 -“携带者”，“大三阳”，“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。 “大三阳”与HBV-DNA： “ HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+）”提示患者体内HBV-DNA呈活动性复制，传染性强，荧光定量PCR方法检测HBV-DNA阳性检出率大于80-90%，且病毒载量10的六次方IU/ml “小三阳”与HBV-DNA： “ HBs

7、Ag（+）HBeAb（+）HBcAb（+）”，HBV-DNA阳性率为40-80%左右，且病毒载量 HBeAb（+）表明HBV复制处于较低水平并可能和宿主DNA发生整合，导致含量较低，应进行HBV-DNA定量检测。 常规结核病实验室诊断方法及不足-细胞培养“金标准”,周期长 -痰涂片作抗酸染色：灵敏度差，检出率30%。特异性差，无法将结核杆菌和其他分枝杆菌区分开-血清学诊断：交叉反应，假阳性 FQ-PCR诊断结核的关键点 -痰液，肺及支气管灌洗液-肺结核-血液-播散性结核和各脏器的结核病-脑脊液-中枢神经系统结核病 -宫颈拭子，尿道拭子-泌尿生殖系统结核病-胸水-结核性胸膜炎-腹水-结核性腹膜炎

8、 HCV的基因型/亚型 6个型，68个亚型-1a,b,c,d,e,f,g,h,i,j,k,l,m-2a,b,c,d,e,f,g,h,i,k,l,m-3a,b,c,d,e,f,g,h,i,k,-4a,c,d,e,f,g,h,k,l,m,n,o,p,q,r,s,t-5a-6a,b,d,f,g,h,i,j,k,l,m,n 中国亚型1b（66%），2a（14%），对抗病毒治疗应答不同，因此治疗方案不同。HCV的基因耐药突变 特异基因靶向治疗（小分子抑制物）中靶点编码区的耐药-HCV蛋白酶（NS3-4A）-RNV酶（NS5b）HCV的基因型与药物治疗-现知欧美国家多数HCV-1型感染，而亚洲国家以2型为

9、主，三型次之 -三型感染临床症状较重，有引起严重肝病的倾向-1b型感染对干扰素治疗不敏感，效果差，2a型感染用干扰素治疗效果好。 HCV RNA 定量的临床意义？ TORCH感染特点 -母婴传播的主要病原体 -引起胎儿畸形新生儿缺陷的重要原因-自然状态下呈隐性感染 -怀孕，多次输血，AIDS等易发生显性感染-可致多发性，全身性感染 -只有风疹可获得长久的免疫力，可用疫苗预防 TORCH相关病原体检测-弓形虫（TOX）-风疹病毒（RV）-人巨细胞病毒（HCMV）-单纯疱疹病毒（HSV-2） 基因检测与预测医学 基因检测使预测医学称为可能。疾病分险基因，易感基因的检测，不同人群差异基因的检测，可以

10、全面评估个体对相关疾病的患病风险，从而预测疾病的发生，早期干预，预防。 结核杆菌与呼吸道病原体检测-结核杆菌（TB）-EB病毒（EBV）-肺炎衣原体（CP）-肺炎支原体（MP）常见性传播病原体检测-淋球菌（NGH）-沙眼衣原体（CT）-解脲支原体（UU）-梅毒螺旋体（TP）-单纯疱疹病毒（HSV）-乳头瘤病毒（HPV）-人类免疫缺陷病毒（HIV） 检验PCR 复旦大学附属华山医院 检验医学中心 上海市乌鲁木齐中路12号 200040 耗材质检的标准操作程序 版 本 号：1.0文件编号：HS-JY-CZ- PCR-006生效日期：2023年03月01日页码： 第 1页，共 4. PCR检验实验室

11、检查要点指南 PCR检验实验室检查要点指南概述北京市医疗器械技术审评中心（100061）郑婕 冯路 赵阳 王辉摘要：目的目的 明确体外诊断试剂生产企业PCR检验实验室设置和管理相关要求，指导并规. PCR检验实验室检查要点指南 PCR检验实验室检查要点指南2023年8月31日，北京市食品药品监督管理局发布了PCR检验实验室检查要点指南（2023版），具体内容如下：聚合酶链反应（PCR）检验实验室检查要点指南（2023版）聚. 临床检验中PCR技术的应用（推荐） 临床检验中PCR技术的应用青海红十字医院检验科 杨军 检验士 关键词：pcr ：pcr的应用医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊. PCR检验实验室检查要点指南(征求意见稿) PCR检验实验室检查要点指南（征求意见稿）PCR检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的DNA或RNA的检验实验室。聚合酶链反应（PCR）是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的技术，其基本.