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1、食品中菌落总数的测定方法食品中菌落总数的测定一、实验目的(1)学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法(2)学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪 刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、00、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样T做成几个适当倍数的稀释液T选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿
2、内T每皿内加入46C 15-20ml营养琼脂T置361 C恒温箱内培养(482)h取出T菌落数T报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三 角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不 要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸 管。(4)根
3、据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10、10,分别在作1012倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。15ml20mL,并转动平皿使与稀释检样混稀释液移入平皿后,应及时将凉至46 C营养琼脂培养基注入平皿合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置361C恒温箱内培养(482)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数1mL样品所含菌落总数。四、检样中细菌菌落总数的计算与报告,即得1、菌落计算方法(1)菌落计数方法做平板菌落计数时,可用肉眼观查,
4、必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度 的各平板平均菌落总数。(2)菌落计数的报告 平板菌落数的选择选取菌落数在30300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板平板平均数,稀释度的选择应选择平均菌落数在30300 CFU之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30300之间,按以下公式计算:食品中菌落总数的测定方法,应采用两个N=样品中菌落数工C=含适宜范围CFU的平板菌落数之与ni=第一稀释度(低稀释度)平板个数n2=第二稀释度(高稀释度)平板个数d=稀释因子(第一稀释度)_若所有稀释度的平均菌落数均大于若所有稀
5、释度的平均菌落数均小于300 CFU,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之30 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告,若所有稀释度及样品原液均无菌落生长以稀释倍数报告之。菌落数的报告,则以小于I乘以最低稀释倍数报告之,若所有稀释度的平均菌落数均不在30300 CFU之间,其中一部分大于300 CFU或小于30 CFU时,则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌 落数乘菌落数小于100 CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。菌落数大于或等于100 CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。若空白对照上有
6、菌落生长,则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。3、实验结果与记录落匚1010=10_2报告数12稀释液对照皿空白皿判定所检测样品菌落总数就是否符合国家标准Phibro is required to respond to the FDA that Jianmin:Is Prepared to add the following tests;light absorbing impurities,related substances andpar
7、ticle size to their OTC COA;Will provide a COA as evide nee that these tests have bee n con ducted and added to the COA;Will update VMF 6023 to in elude the data and report to support validati on or verificati onof the methods used to an alyze the tests cited above;andWill provide us with a report or a statement to confirm that they have performed appropriatevalidation or食品中菌落总数的测定方法verification of the methods、如有问题,请随时沟通。