比TCA沉淀蛋白更好的方法.doc

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比TCA沉淀蛋白更好的方法比TCA沉淀蛋白更好的方法（MCH法）TCA沉淀法被许多人用做酵母表达上清中,但是本人通过实验发现TCA沉淀法可重复性不高，而且蛋白的沉淀效率低，操作复杂等,于是在此为做真核表达的朋友提供另一种蛋白沉淀的方法,效率很高.150ul上清沉淀的蛋白比1200ul上清用TCA沉淀的蛋白还多.具体操作如下：1体积的上清液加4倍体积的甲醇,再加1倍体积的氯仿，再加3倍体积的双蒸水，然后涡旋20s,或者剧烈上下摇动20s，然后四度放置30分钟。11000rpm、4、15min，去掉上层相和下层氯仿相，留中间的蛋白沉淀。然后瞬时离心，去除液体，加入1蛋白buffer，煮10min.11000rpm、4、10min，取上清进行SDS-PAGE蛋白电泳即可.