花粉生活力萌发试验.pdf

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1、.实验二花粉生活力的测定悬滴培养法一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。二、实验材料：二月兰花粉三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温 02、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已

2、经丧失生活力，必须经过测定才能确定。鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如 H

3、2O2）放氧分解。这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。此法优点是比较快捷，但是比较间接。本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。五、实验步骤：1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成 5、10%、15的蔗糖溶液，并在各培养液中加少量硼酸。2.取盛开的正在散粉的二月兰花朵。3.播花粉：在凹玻片的凹点滴一滴清水。在盖玻片中央滴一滴培养液，用镊子轻轻夹取二月兰的花药，在培养液中央轻轻蘸一下，使花粉均匀的分散在培养液的球面上。在盖

4、玻片的四角涂抹少量的凡士林，用镊子夹住盖玻片在上提的过程中迅速把它翻转过来，小心放在凹玻片上，使培养液处在盖玻片和凹点形成的小密室中。每个凹玻片分别做蔗糖溶液的三个浓度，并用蒸馏水做对照。4.培养：做好的凹玻片上贴好标签，注明花粉种类、培养液的浓度以及时间，然后小心放到铺有湿润滤纸的培养皿中，放到2224的恒温箱中培养 5h。5.观察：从恒温箱中取出凹玻片，在低倍镜下随机观察三个视野，计算花粉的萌发率。以花粉管长度达到花粉粒径的2 倍及以上视为萌发。六、结果分析1.分析花粉萌发率高或低的原因。2.本实验关键性步骤总结及实验中所存在问题的讨论。七、作业1.绘制一幅花粉粒萌发形态图。2.花粉生活力

5、测定在杂交育种中的重要意义？测定花粉生活力的方法有哪些？.一般 2 核花粉粒较 3 核花粉粒高，对不适宜环境（温度、湿度、辐射化学处理）抵抗力强。原原因因：1 1、营营养养消消耗耗2 2、代代谢谢旺旺盛盛3 3、外外壁壁薄薄等等花粉生活力的研究对于农业、林业来说，具有很重要的理论及生产实践意义。它为植物的育种、培育、栽培，为进行人工授粉和杂交授粉，提供理论依据。一般来讲，花粉生活力的长短，即决定于植物的遗传性，又受环境因素的影响。一般情况下，花粉生活力的长短依种而异，大多数植物的花粉只能活几个小时、几天或几个星期。一般来看：木本植物草本植物2 胞花粉3 胞花粉影响花粉生活力的主要环境因素有：温

6、度、湿度及空气。现在延长花粉生活力的措施主要有：超低温（-192的液态空气，-196的液态氮）、真空、降低氧分压、快速冷冻干燥等方法贮存。影影响响花花粉粉粒粒生生活活的的因因素素主主要要一一般般低低温温（1 15 50 0c c），低低湿湿（相相对对湿湿度度 2 20 0/1 10 00 0-5 50 0/1 10 00 0）低低氧氧。正正常常情情况况，液液态态氮氮进进行行超超低低温温保保存存，如如：水水稻稻 1 10 0 0 0C C，8 85 5/1 10 00 0 的的湿湿度度 2 24 4 小小时时；玉玉米米 5 50 0C C 9 90 0/1 10 00 0 的的湿湿度度 8 89

7、 9 天天。但但禾禾本本科科要要求求高高湿湿。研研究究花花粉粉储储藏藏对对解解决决花花期期不不遇遇问问题题相相当当重重要要。.：()植物盛花期采集发育良好的花粉；()将花粉干燥至适宜贮藏的含水量，封装在耐低温容器内；()经预冷处理或直接置于低温、超低温条件下贮藏；()根据需要，随时取出封存花粉的容器进行缓慢或快速升温解冻，使花粉复苏；()采用花粉染色法、萌发法、授粉结实法鉴定花粉生活力；()具有生活力的花粉用于育种。实验十七 花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花

8、粉育性和结实率影响的基础。一、花粉萌发测定法【原理】正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。【器材与用具】载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。【试剂】培养基(10蔗糖，10MgL 硼酸，05的琼脂)：称 10g 蔗糖、1Mg 硼酸、0琼脂与 90Ml 水放入烧杯中，在 100水浴中溶化，冷却后加水至100Ml 备用。【方法】1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻

9、片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25左右的恒温箱(或室温 20条件下)中孵育，510Min 后在显微镜下检查 5 个视野，统计其萌发率。【注意事项】1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。5g.2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度、离体时间、环境条件等因素对花粉活力的影响。3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。二、碘碘化钾染色测定法【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI 溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I

10、2-KI 溶液染色呈黄褐色。因此，可用 I2-KI 溶液染色来测定花粉活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】I2-KI 溶液：取 2gKI 溶于 510Ml 蒸馏水中，加入 1g I2，待完全溶解后，再加蒸馏水300Ml。贮于棕色瓶中备用。【方法】采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加1 滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加12 滴 I2-KI 溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察 23 张片子，每片取 5 个视野，统计花粉的染

11、色率，以染色率表示花粉的育性。【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。三、氯化三苯基四氮唑(TTC)法【原理】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2 或 NADPH2 可将无色的 TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)还原成红色的 TT（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC 后的颜色变化判断花粉的生活力。.【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】05TTC 溶液：称 05g TTC 放入烧杯中，加入少许 95酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100Ml。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。【方法】采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加 12 滴 05TTC 溶液，搅匀后盖上盖玻片，置 35恒温箱中，1015Min 后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察23 张片子，每片取 5 个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。【思考题】1.上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力.