医学专题一未知肠道杆菌的分离鉴定程序.ppt

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1、标本中未知肠道感染细菌标本中未知肠道感染细菌的分离的分离(fnl)鉴定程序鉴定程序 第一页，共二十八页。标本标本(biobn(biobn)脓血脓血(nn xu)(nn xu)便、便、肛拭子肛拭子选择选择(xunz)(xunz)/鉴别鉴别培基培基生化反应生化反应血清学鉴定血清学鉴定克氏克氏双糖铁双糖铁培养基培养基,动力动力-靛基质靛基质-尿素半尿素半固体琼脂培养基固体琼脂培养基玻片凝玻片凝集试验集试验SSSS平板平板,中国兰中国兰,EMBEMB平板平板第二页，共二十八页。标本中未知病原标本中未知病原(bngyun)性球菌性球菌的分离鉴定程序的分离鉴定程序 第三页，共二十八页。直接涂片染色镜检：观

2、察细菌形态(xngti)、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 （凝固酶、耐热核酸酶）标本标本(biob(biobn)n)血液血液(xuy)(xuy)脑脊液脑脊液肉汤增菌肉汤增菌培养培养涂片染色镜检涂片染色镜检第四页，共二十八页。设计(shj)性实验临床标本中病原菌的分离(fnl)与鉴定第五页，共二十八页。设计(shj)性实验1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板(pngbn)其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、

3、玻片等第六页，共二十八页。3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面(ximin)培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等第七页，共二十八页。脓拭子脓拭子 分离(fnl)培养（血平板）革兰染色(rns)革兰染色(rns)触酶实验 血浆凝固酶实验第八页，共二十八页。咽拭子咽拭子革兰染色(rns)革兰染色(rns)胆汁(dnzh)溶菌试验奥普托辛试验 荚膜染色（石炭酸

4、复红单染）分离培养（血平板）第九页，共二十八页。尿液尿液尿液尿液 离心离心离心离心(lxn)(lxn)沉淀沉淀沉淀沉淀1500150015001500转，转，转，转，10101010分钟分钟分钟分钟 分离培养(piyng)（EMB平板）革兰染色(rns)革兰染色克氏双糖铁斜面克氏双糖铁斜面培养基培养基动力动力-靛基质靛基质-尿素半固体琼尿素半固体琼脂培养基脂培养基观察结果观察结果观察结果观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验完成靛基质试验第十页，共二十八页。肛门(gngmn)拭子1/2EMB平板(pngbn)克氏双糖克氏双糖(shun(shun tntn)铁斜面培养铁斜面培养基基动力动力-靛基

5、质靛基质-尿素半固尿素半固体琼脂培养基体琼脂培养基观察结果观察结果完成靛基质试验玻片凝集试验第十一页，共二十八页。1.EMB1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基乳糖伊红美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理：细菌 乳糖 产酸：伊红美蓝 紫黑/紫红 结果(ji gu)：分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色）分解(fnji)培养基原理培养基原理(yunl)第十二页，共二十八页。EMB agar第十三页，共二十八页。2.2.靛基质试验（吲哚试验）靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水色氨酸原理(yunl)：分解 某些细菌有色氨酸

6、酶 色氨酸 吲哚（无色）柯氏试剂 玫瑰吲哚（红色）结果：液面形成玫瑰红色 第十四页，共二十八页。吲哚吲哚(yn du)试验试验第十五页，共二十八页。3.3.克氏双糖铁斜面培养基反应克氏双糖铁斜面培养基反应(fnyng)(fnyng)试验试验组成：无糖培基1份葡萄糖10份乳糖铁盐酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂原理：只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）分解葡萄糖乳糖 产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色产生H2S铁盐 FeS 培养基成黑色上层氧化 呈红色下层(xicng)缺氧 不氧化 呈黄色 第十六页，共二十八页。Double suger iron slant第十七页，共二十八页。4.4

7、.尿素培养基尿素培养基 组成：基础培基尿素酚红 底物 指示剂 原理：有些细菌产生(chnshng)尿素酶 分解尿素 产氨 结果：分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色 第十八页，共二十八页。Urea slant第十九页，共二十八页。肥达试验肥达试验(shyn)(shyn)(4(4人人/组组)材料：病人未知血清：材料：病人未知血清：1#1#，2#2#，3#3#菌液：菌液：O O、H H、PAHPAH、PBHPBH（已知（已知AgAg）每组每组1 1块多孔板，标记块多孔板，标记(bioj)(bioj)每人每人2 2支吸管支吸管第二十页，共二十八页。123456O AgH AgPAH PBH第二

8、十一页，共二十八页。1 2 3 4 5 61 2 3 4 5 6 NS NS（mlml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5未知血清未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10)(1:10)1:20 1:40 1:80 1:160 1:320菌液菌液(摇匀摇匀)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4 (4种，种，1 1种种/人人)1:401:40 1:801:80 1:1601:160 1:320 1:320 1:640

9、 1:640 (阴性阴性(ynxng)(ynxng)对照对照)37 37水浴过夜水浴过夜方法方法(fngf)(fngf)弃弃弃弃0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml于消毒于消毒于消毒于消毒(xio(xio(xio(xio d)d)d)d)缸缸缸缸第二十二页，共二十八页。肥达试验肥达试验(shyn)H H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底凝集：絮状，以疏松大团沉于管底O O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集程度的判定以凝集程度的判定以“”、“”号表示号表示 上清完全透明，细菌全部形成凝集块上清完全透明，细菌全部形成凝集块 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊细菌绝大

10、多数凝集，液体有轻度混浊 50 50细菌形成凝集，液体半澄清细菌形成凝集，液体半澄清 仅少数仅少数(shosh)(shosh)细菌凝集，液体比较混浊细菌凝集，液体比较混浊 液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐）形沉淀，边缘整齐）第二十三页，共二十八页。以呈现以呈现(chngxin)(chngxin)凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价 1 2 3 4 5 6 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 O +-H +-PAH +-PBH +-肥达试验肥达试验(shyn)第二十

11、四页，共二十八页。肥达反应肥达反应(fnyng)1 2 3 4 5 O 1:160 1:320 1:160 1:40 1:40H 1:320 1:80 1:80 1:80 1:320PAH 1:40 -1:320 1:80 1:320PBH -1:80 1:80 1:40 1:320PCH -1:40 -伤寒 伤寒早期 副甲 阴性(ynxng)回忆反应疫苗接种第二十五页，共二十八页。肠道杆菌的血清学试验肠道杆菌的血清学试验(shyn)（玻片凝集试验（玻片凝集试验(shyn)）材料材料1.1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物2.2.伤寒杆菌的诊断血清，志贺

12、菌诊断血清、载玻片、生理盐水伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水(shnglynshu)(shnglynshu)方法方法血清(xuqng)生理盐水第二十六页，共二十八页。第二十七页，共二十八页。内容(nirng)总结标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序。克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基。SS平板,中国(zhn u)兰,EMB平板。直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性。动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基。组成：无糖培养基乳糖伊红美蓝。组成：无糖培基1份葡萄糖10份乳糖铁盐酚红。组成：基础培基尿素酚红。肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）。1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物。生理盐水第二十八页，共二十八页。