实验六微生物大小及数量的测定精品文稿.ppt

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1、实验六微生物大小及数量的测定第1页，本讲稿共12页镜台测微尺镜台测微尺目镜测微尺目镜测微尺第2页，本讲稿共12页 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。第3页，本讲稿共12页目镜测微尺目镜测微尺的校正的校正第4页，本讲稿共12页三、操作步骤三、操作步骤三、操作步骤三、操作步骤 l l l l 目镜测微尺的标定目镜测微尺的标定目镜测微尺的标定目镜测微尺的标定 把目镜的上透镜旋开，将把目镜的上透镜旋开，将把目镜的上透镜旋开，将把目镜的上透镜旋开，将目镜目镜目镜目镜测微尺测微尺测微尺测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使轻

2、轻放在目镜的隔板上，使轻轻放在目镜的隔板上，使轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下有刻度的一面朝下有刻度的一面朝下有刻度的一面朝下。将。将。将。将镜镜镜镜台测微尺台测微尺台测微尺台测微尺放在显微镜的载物台上，使放在显微镜的载物台上，使放在显微镜的载物台上，使放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上有刻度的一面朝上有刻度的一面朝上有刻度的一面朝上。先。先。先。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的

3、刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。2 2 2 2标定公式：标定公式：标定公式：标定公式：计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜

4、台测微尺的格数。由计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长于镜台测微尺的刻度每格长于镜台测微尺的刻度每格长于镜台测微尺的刻度每格长10101010 m m m m，所以可得：，所以可得：，所以可得：，所以可得：目镜测微尺每格长（目镜测微尺每格长（目镜测微尺每格长（目镜测微尺每格长（mmmm）=两条重合线间镜台测微尺的格数两条重合线间镜台测微尺的格数两条重合线间镜台测微尺的格数两条重合线间镜台测微尺的格数1010两条重合线间目镜测微尺的格数两条重合线间目镜测微尺的格数两条重合线间目镜测微尺的格数两条重合线间目镜测微尺的格数 第5页，本讲稿共12页三、操作步骤三、

5、操作步骤三、操作步骤三、操作步骤 3 3 3 3菌体大小的测定菌体大小的测定菌体大小的测定菌体大小的测定 将镜台测微尺取下，换上酿酒酵将镜台测微尺取下，换上酿酒酵将镜台测微尺取下，换上酿酒酵将镜台测微尺取下，换上酿酒酵母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目的物，测母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目的物，测母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目的物，测母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目的物，测量量量量1010101020202020个菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目个菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目个菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目个菌体的长和宽占目镜测微尺的格

6、数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。记录结果镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。记录结果镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。记录结果镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。记录结果,求求求求出平均值。出平均值。出平均值。出平均值。镜台测微尺的玻片很薄，如需标定油镜头时，要镜台测微尺的玻片很薄，如需标定油镜头时，要镜台测微尺的玻片很薄，如需标定油镜头时，要镜台测微尺的玻片很薄，如需标定油镜头时，要格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。格外注意，以免压碎镜台测微尺或损坏镜头。思考题思考题思考题思考题 为

7、什么不同放大倍数的目镜和物镜必须分别进行标定？为什么不同放大倍数的目镜和物镜必须分别进行标定？为什么不同放大倍数的目镜和物镜必须分别进行标定？为什么不同放大倍数的目镜和物镜必须分别进行标定？第6页，本讲稿共12页酵母菌数量的测定酵母菌数量的测定 一一 、目的要求、目的要求 1 1明确血球计数板计数的原理。明确血球计数板计数的原理。2 2掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。二二 、基本原理基本原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三数

8、方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个方格网，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种方格网，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一是大方格分成规格，一是大方格分成2525个中格，而每个中格又分成个中格，而每个中格又分成1616个小格；个小格；另一种是大格分成另一种是大格分成1616个中格，而每个中格又分成个中格，而每个中格又分成2525个小格，每个小格，每个大格中的小格都是个大格中的小格都是400400个。每一个大格边长为个。每一个大格边长为lmml

9、mm，面积为，面积为lmmlmm2 2，盖玻片与载玻片之间的高度为，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm0.lmm，故计数室的容积为，故计数室的容积为0.lmm0.lmm3 3。第7页，本讲稿共12页第8页，本讲稿共12页血球计数板血球计数板计数计数第9页，本讲稿共12页 计数时，通常数五个中格的总菌数，然后求得每个中计数时，通常数五个中格的总菌数，然后求得每个中格的平均值，然后再换算成格的平均值，然后再换算成lmllml菌液中的总菌数。菌液中的总菌数。如果是如果是2525个中方格的计数板个中方格的计数板,1mL1mL菌液中的总菌数菌液中的总菌数=A/52510=A/525104 4B=500

10、00AB=50000AB B（个）（个）A A为五个中方格中的总菌数，为五个中方格中的总菌数，B B为菌液稀释倍数为菌液稀释倍数.如果是如果是1616个中方格的计数板，个中方格的计数板，1mL1mL菌液中的总菌数菌液中的总菌数=A/51610=A/516104 4B=32000AB=32000AB B（个）（个）第10页，本讲稿共12页（三）器材（三）器材 1 1菌种菌种 酿酒酵母酿酒酵母 2 2仪器或其他用具仪器或其他用具 血球计数板，显微镜，盖玻片，无血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。菌毛细滴管。（四）操作步骤（四）操作步骤 l l菌悬液制备菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成

11、浓度适当的菌悬液。以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。2 2镜检计数室镜检计数室 在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。吹干后才能进行计数。3 3加样品加样品 将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细 滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加,菌菌 液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均 能充满菌液。能充满菌液。取样时先要摇匀菌液；

12、加样时计数室不可有气泡产生。取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。第11页，本讲稿共12页4 4显微镜计数显微镜计数 加样后静止加样后静止5min5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。每个计数室选每个计数室选5 5个中格个中格(可选可选4 4个角和中央的一个中格个角和中央的一个中格)中的菌体中的菌体进行计数。压线的菌体一般记上不记下进行计数。压线的菌体一般记上不记下,记左不记右。如遇酵记左不记右。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一

13、半时，即作为两个菌体计数。母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。含菌量。5 5清洗血球计数板清洗血球计数板 使用完毕后，将血球计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬使用完毕后，将血球计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。至干净为止。思考题思考题 1.1.计数板法的特点和适用范围如何？计数板法的特点和适用范围如何？2.2.计数时如看不到格线如何解决？计数时如看不到格线如何解决？第12页，本讲稿共12页