Exp024果蝇杂交.ppt

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1、实验二实验二四四 果蝇遗传系列杂交实验果蝇遗传系列杂交实验1.通通过过对对果果蝇蝇的的杂杂交交实实验验，正正确确理理解解分分离离定定律律的实质，并验证与加深理解三个遗传规律的实质，并验证与加深理解三个遗传规律.2.认认识识伴伴性性遗遗传传的的正正、反反交交差差别别,掌掌握握伴伴性性遗遗传的特点传的特点.3.掌握果蝇的饲养、杂交技术及统计处理方法掌握果蝇的饲养、杂交技术及统计处理方法.4.掌掌握握绘绘制制遗遗传传学学图图的的原原理理和和方方法法，加加深深对对重重组组值值、遗遗传传学学图图、双双交交换换值值、并并发发率率和和干干涉涉等等概念理解概念理解.一、实验目的一、实验目的果蝇单因子遗传果蝇单

2、因子遗传双因子遗传双因子遗传伴性遗传伴性遗传连锁与互换连锁与互换二、实验原理二、实验原理果果蝇蝇的的单单因因子子遗遗传传是是指指常常CS上上一一对对等等位位基基因因的的传传递递规规律律.由由于于显显隐隐关关系系,在在子子一一代代只只表表现现显显性性性性状状,但但基基因因型型是是杂杂合合状状态态.在在形形成成配配子子时时,基基因因保保持持相相对对独独立立,又又按按原原样样分分配配到到不不同同的的配配子子中中去去,理理论论上上的的比比例例是是1:1.雌雌雄雄配配子子各各1:1,结结合合的的概概率率又又相相等等,子子二代的基因型就有三种二代的基因型就有三种,比例是比例是1:2:1,而表型就是而表型就

3、是3:1;分分离离规规律律和和自自由由组组合合规规律律,不不仅仅适适合合于于植植物物,也也可可用用于于动动物物;1910年年,摩摩尔尔根根发发现现白白眼眼果果蝇蝇突突变变体体,观观察察到到交交叉叉遗遗传传现现象象.因因为为白白眼眼w在在X染染色色体体上上,为为性性连连锁锁遗遗传传,即即W基基因因由由外外公公经经由由女女儿儿传传给给了了外外孙孙,称称为为交交叉叉遗遗传传.1916年年,Bridge发发现现X染染色色体体不不分分开实验开实验,证明白眼基因在证明白眼基因在X染色体上。染色体上。自由组合定律自由组合定律位位于于非非同同源源染染色色体体上上的的两两对对基基因因，在在减减数数分分裂裂形形成

4、成配配子子时时可可以以自自由由组组合合；由由于于配配子子的的随随机机结结合合，两两对对相相对对性性状状在在杂杂种种第第二二代代是是自自由由组组合合的的，呈呈现现9:3:3:1的表型分离比。的表型分离比。伴性遗传伴性遗传位位于于性性染染色色体体上上的的基基因因叫叫伴伴性性基基因因，其其遗遗传传方方式式与与位位于于常常染染色色体体上上的的基基因因有有一一定定的的差差别别，它它在在亲亲代代与与子子代代之之间间的的传传递递方方式式与与性性别别有有关关，该该遗遗传传方方式式称称为为伴性遗传。伴性遗传。伴伴性性遗遗传传有有特特殊殊的的遗遗传传规规律律，如如正正反反交交结结果果不不同同，有交叉遗传现象等。有

5、交叉遗传现象等。连锁与互换连锁与互换位位于于同同一一条条染染色色体体上上的的基基因因称称为为连连锁锁基基因因。同同源源染染色色体体上上的的连连锁锁基基因因之之间间会会发发生生一一定定频频率率的的交交换换，在在子代中出现一定数量的重组型。子代中出现一定数量的重组型。重重组组型型子子代代的的多多少少反反映映出出基基因因间间发发生生交交换换的的频频率率的的高高低低。基基因因在在染染色色体体上上是是呈呈直直线线排排列列的的，基基因因间间距距离越远，发生交换的可能性就越大，反之亦然。离越远，发生交换的可能性就越大，反之亦然。基因间的图距就是通过重组值的测定而得到的。基因间的图距就是通过重组值的测定而得到

6、的。本本实实验验通通过过对对同同一一染染色色体体上上的的三三个个非非等等位位基基因因的的交交换行为来验证基因是在染色体上呈直线排列的。换行为来验证基因是在染色体上呈直线排列的。先先将将野野生生型型果果蝇蝇与与三三隐隐性性果果蝇蝇杂杂交交，作作为为三三因因子子杂杂合合品品种种(abc+)，再再用用三三隐隐性性个个体体进进行行测测交交。在在测测交交后后代代中中，因因交交换换可可得得到到各各种种类类型型的的组组合合。与与两个亲本表型不同的称为重组合类型。两个亲本表型不同的称为重组合类型。用用两两个个基基因因座座位位间间重重组组值值的的大大小小表表示示基基因因间间的的相相对对距离。距离。三三 点点 测

7、测 交交 试试 验验 中中 得得 到到 测测 交交 后后 代代 的的 交交 配配 程程 序序 杂交组合杂交组合ee()vg vg();vg vg()ee()+()ww();ww()+()vgvg ee()+();+()vgvg ee()wsn3m()+()三、材料与试剂器材三、材料与试剂器材1.材材料料:WT黑黑腹腹果果蝇蝇及及4种种突突变变型型:2(vg),6(w sn3 m),10(e),22(w)品系品系2.试试剂剂:乙乙醚醚、乙乙醇醇、琼琼脂脂、白白糖糖、酵酵母母粉粉、丙丙酸酸、玉米粉玉米粉3.器器材材:恒恒温温培培养养箱箱、高高压压灭灭菌菌器器、烧烧杯杯、量量筒筒、天天平平、培培养养

8、瓶瓶、棉棉塞塞、滤滤纸纸、毛毛笔笔、镊镊子子、牛牛皮皮纸纸、记号笔、玻璃棒记号笔、玻璃棒四、实验步骤四、实验步骤1.四四人人一一组组,确确定定杂杂交交组组合合(单单、双双因因子子、伴伴性性遗遗传、三因子及互补传、三因子及互补),选定所需亲本选定所需亲本2.实验设计实验设计:包括时间安排包括时间安排3.繁殖亲本繁殖亲本,收集处女蝇收集处女蝇4.杂交及互交杂交及互交,统计实验数据统计实验数据5.完成实验报告完成实验报告实验操作实验操作1.选处女蝇选处女蝇:提前提前3-5d收集收集8h内羽化的成蝇内羽化的成蝇,分辨分辨2.果蝇杂交果蝇杂交:转移转移4-5对亲本对亲本,写明标签写明标签(杂交组合、日杂

9、交组合、日期及实验人期及实验人)3.去亲本去亲本:杂交后一周杂交后一周4.F1观察及互交观察及互交:去亲本后连续观察去亲本后连续观察2-3d;转移转移5-6对对至新培养瓶互交至新培养瓶互交(是否需要选处女蝇是否需要选处女蝇?)5.再去亲本再去亲本:互交后一周互交后一周6.记录结果记录结果:连续统计连续统计3-4d7.野生果蝇的采集与培养野生果蝇的采集与培养 有幼虫有幼虫、蛹蛹 去亲本去亲本处女蝇的选取处女蝇的选取8-10h内羽化的果蝇分离内羽化的果蝇分离pm10:00去成蝇去成蝇am6:00,pm2:00,pm9:30分别收集分别收集分离分离成蝇成蝇每瓶培养基放置每瓶培养基放置3-5对亲本果蝇

10、对亲本果蝇实验结果的观察和统计1.把把各各杂杂交交组组合合的的果果蝇蝇成成虫虫分分别别倒倒出出试试管管，并并逐逐个个组组合合麻麻醉醉，观察性状，做好记录。观察性状，做好记录。2.样本自由度为样本自由度为n-13.根据实际观察数计算理论值。根据实际观察数计算理论值。4.计算计算 2 2 值，结果必须与显著平准作比较值，结果必须与显著平准作比较 如：如：p0.05 无显著差异无显著差异 p0.05 差异显著差异显著 p0.01 差异极显著差异极显著5.计计算算过过程程各各数数值值要要求求比比 2 2表表所所给给数数值值的的小小数数点点后后多多取取1位位，以方便比较。以方便比较。单因子杂交实验结果单

11、因子杂交实验结果单因子杂交实验卡方测验单因子杂交实验卡方测验双因子实验结果双因子实验结果类型类型长灰长灰长黑檀长黑檀残灰残灰残黑檀残黑檀合计合计F2(正正、反反交交合合瓶统计瓶统计)数目数目双因子实验双因子实验 2测验测验F2结果统计结果统计长灰长灰长黑檀长黑檀残灰残灰残黑檀残黑檀合计合计观察数观察数(O)预期数预期数(E)偏差偏差(O E)(O E)2/E伴性遗传实验伴性遗传实验结果结果正交正交X+X+XwY类型类型红眼红眼红眼红眼伴性遗传实验伴性遗传实验结果结果反交反交XwXw X+Y类型类型红眼红眼白眼白眼伴性遗传实验伴性遗传实验结果结果正交正交F2类型类型红眼红眼红眼红眼红眼红眼白眼白

12、眼合计合计百分比百分比伴性遗传实验伴性遗传实验结果结果反交反交F2类型类型红眼红眼白眼白眼红眼红眼白眼白眼合计合计百分比百分比三点测交实验三点测交实验结果结果Ft表型表型观察数观察数w-sn重组重组 sn-m重组重组w-m重组重组w sn m+w+sn mw sn+mw+m+sn+观察的结果填入表格中观察的结果填入表格中果蝇杂交注意事项果蝇杂交注意事项1.母本必须是处女蝇母本必须是处女蝇2.F1羽化之前必须去掉亲本羽化之前必须去掉亲本3.F1必须转入新的培养基中进行互交必须转入新的培养基中进行互交4.亲本果蝇麻醉时间不宜过长亲本果蝇麻醉时间不宜过长5.必须倒入空瓶麻醉果蝇必须倒入空瓶麻醉果蝇,严禁在培养瓶中麻醉严禁在培养瓶中麻醉五、作业五、作业1.P3,2;P5,2 2.画画出出三三因因子子实实验验的的遗遗传传学学图图,把把3个个基基因因定定位位在在CS上上,计算并发率和干涉计算并发率和干涉.3.m/m+、vg/vg+分分别别是是等等位位关关系系,但但是是m与与vg是是非非等等位位的的.怎样理解等位及非等位基因对某一性状的影响怎样理解等位及非等位基因对某一性状的影响?4.列列时时间间表表:采采集集果果蝇蝇放放入入培培养养瓶瓶后后,以以天天为为单单位位,每每个个时期最早何时可见时期最早何时可见？生活史生活史卵卵幼虫幼虫蛹蛹成虫成虫天数天数温度温度