【教学课件】第八章杂环类药物的分析.ppt

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1、第八章第八章 杂环类药物的分析杂环类药物的分析 新疆医科大学药学院新疆医科大学药学院分析分析/药分教研室药分教研室The Analysis of Hetero drugs1/10/20231 第八章第八章 杂环类药物的分析杂环类药物的分析第一节第一节 吡啶类药物吡啶类药物第二节第二节 喹啉类药物喹啉类药物第三节第三节 托烷类药物托烷类药物第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物 第五节第五节 苯并二氮杂卓苯并二氮杂卓类药物类药物第六节第六节 含量测定含量测定返回主目录基本要求基本要求练习与思考练习与思考1/10/20232基本要求基本要求 一一、掌掌握握吡吡啶啶类类、喹喹啉啉类类、托托烷烷类类、

2、吩吩噻噻嗪嗪类类苯苯并并二二氮氮杂杂卓卓类类药药物物的的鉴鉴别别和和含含量量测测定的基本原理与方法。定的基本原理与方法。二二、熟熟悉悉本本类类药药物物中中典典型型药药物物国国外外药药典典收收载的鉴别和含量测定方法。载的鉴别和含量测定方法。三、了解本类药物的体内分析方法三、了解本类药物的体内分析方法。返 回1/10/20233第八章第八章 杂环类药物的分析杂环类药物的分析吡啶类药物吩噻嗪类药物苯骈二氮杂卓类药物喹啉类药物托烷类药物1/10/20234异烟肼尼可刹米硝苯地平第一节 吡啶类药物的分析吡啶环具碱性、可开环酰肼基：强还原性可被氧化和缩合 酰胺基：可被碱水解，释放出二乙胺气体 苯硝基：具还

3、原性；二氢吡啶环：受光易分解v结构与性质结构与性质1/10/202351.1.弱碱性弱碱性 吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的环的pKpKb b值为值为8.88.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环（水中）。尼可刹米除了吡啶环上氮外，上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。胺，故可以进行鉴别。主要化学性质主要化学性质1/10/20236 2 2还还原原性性 异异烟烟肼肼的的吡吡啶啶环环位位上上被被具具有有还还原原性性酰酰肼肼取取代代，可

4、可被被氧氧化化剂剂氧氧化化，可可与与含含羰羰基的化合物发生缩合反应。基的化合物发生缩合反应。3 3吡吡啶啶环环的的特特性性 异异烟烟肼肼和和尼尼可可刹刹米米的的吡吡啶啶环环、位位未未取取代代，而而或或位位被被羧羧基基衍衍生生物物所所取取代代；硝硝苯苯地地平平的的吡吡啶啶环环、位位被被甲甲酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应。1/10/20237v鉴别试验吡啶环反应戊烯二醛反应（适用于，未取代者）衍生物的颜色 随芳香伯胺的不同而不同二硝基氯苯反应 紫红色形成沉淀反应（与重金属离子）取代基反应1/10/20238尼可刹米溴化氰芳香伯胺戊烯二醛衍生物黄色1/10/

5、20239异烟肼，需先氧化成异烟酸1/10/202310尼可刹米尼可刹米 ChP（2005）【鉴鉴别别】（2）取取本本品品 1 滴滴，加加水水 50 ml，摇摇匀匀，分分取取 2 ml，加加溴溴化化氰氰试试液液 2 ml与与 2.5%苯苯胺胺溶溶液液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。，摇匀，溶液渐显黄色。1/10/202311v二硝基氯苯反应（二硝基氯苯反应（VongerichtenVongerichten反应）反应）吡啶及其衍生物吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫红色紫红色无水条无水条件件 采用本法鉴别采用本法鉴别异烟肼、尼可刹米异烟肼、尼可刹米时，需适时，需

6、适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。如异烟肼鉴别：羧基后进行鉴别。如异烟肼鉴别：1/10/202312紫红色二硝基氯苯反应 紫红色1/10/202313异烟肼不经处理的反应：异烟肼不经处理的反应：异烟肼异烟肼+2+2，4-4-二硝基氯苯二硝基氯苯乙醇乙醇OH-紫红色紫红色1/10/202314药物试剂现象尼可刹米CuSO4 NH4SCN草绿色异烟肼CuSO4淡绿色，红棕色异烟肼，尼可刹米HgCl2白色与重金属离子的沉淀反应1/10/202315尼可刹米尼可刹米 ChP（2005）【鉴鉴别别】（3）取取本本品品 2 滴滴，加加水水 1

7、 ml，摇摇匀匀，加加硫硫酸酸铜铜试试液液 2 滴滴与与硫硫氰氰酸酸胺胺试试液液 3 滴滴，即即生生成成草草绿绿色色沉沉淀。淀。尼可刹米尼可刹米+CuSO+CuSO4 4+硫氰酸铵硫氰酸铵草绿色草绿色尼可刹米尼可刹米异烟肼异烟肼+HgCl+HgCl2 2白色白色1/10/202316酰肼基的反应银镜反应异烟肼 +氨制AgNO3 Ag+N2缩合反应异烟肼 +香草醛 黄色mpmp为为228228231231 黄色结晶黄色结晶黄色结晶黄色结晶1/10/202317 异烟肼异烟肼 ChP（2005）【鉴别】【鉴别】（2）取异烟肼约）取异烟肼约10 mg，置试管中，置试管中，加水加水2 ml溶解后，加氨

8、制硝酸银试液溶解后，加氨制硝酸银试液1 m1，即发，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。银镜反应银镜反应异烟肼异烟肼异烟肼异烟肼+亚硒酸亚硒酸亚硒酸亚硒酸硒硒硒硒（红色）（红色）（红色）（红色）异烟肼异烟肼异烟肼异烟肼+AgNO+AgNO+AgNO+AgNO3 3 3 3异烟酸银异烟酸银异烟酸银异烟酸银+NN2 2+(白色）白色）白色）白色）银镜银镜银镜银镜AgAg1/10/202318 异烟肼异烟肼 ChP（2005）【鉴别】【鉴别】（1）取本品约）取本品约0.1 g，加水，加水5 ml溶解后，溶解后，加加10香草醛的乙醇溶液香草醛的乙醇溶液1

9、 m1，摇匀，微热，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在晶，在105干燥后，测定熔点，其熔点为干燥后，测定熔点，其熔点为228231，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。缩合反应缩合反应缩合反应缩合反应 ChPChP和和BPBP（20002000）均采用本法鉴别均采用本法鉴别.1/10/202319 -NH -NH2 2活性活性-CH-CH2 2-+1+1，2-2-萘醌萘醌-4-4-磺酸磺酸OHOH-红色红色异烟肼异烟肼1/10/202320分解产物反应尼可刹米 +NaOH 二乙胺，石蕊试纸红色蓝颜色反应硝苯地平-丙酮溶液+NaOH

10、橙红色1/10/202321尼可刹米尼可刹米 ChP（2005）【鉴鉴别别】（1）取取本本品品 10 滴滴，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液 3 ml，加加热热，即即发发生生二二乙乙胺胺的的臭臭气气，能能使使湿湿润润的红色石蕊试纸变蓝色。的红色石蕊试纸变蓝色。1/10/202322 本本类类药药物物的的分分子子结结构构中中均均含含有有芳芳杂杂环环，在在紫紫外外光光区区有有特特征征吸吸收收，其其最最大大、最最小小吸吸收收波波长长及及百百分分吸吸收收系系数数可可供供鉴鉴别别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法本类药物的紫外特征吸收鉴

11、别方法 药药 物物 溶溶 剂剂 max max（nmnm）min min（nmnm）E E1cm1cm1%1%异烟肼异烟肼 HCl HCl（0.01mol/L0.01mol/L）265 265 约约420420 水水 266 234 378 266 234 378 尼可刹米尼可刹米 HCl HCl（0.01mol/L0.01mol/L）263 285 263 285 NaOH NaOH（0.1mol/L0.1mol/L）255 840 255 840 260 860 260 860 硝苯地平硝苯地平 无水乙醇无水乙醇 333 140 333 140紫外吸收光谱特紫外吸收光谱特征征1/10/20

12、2323IRIR尼可刹米尼可刹米 ChP（2005）【鉴鉴别别】（4）本本品品的的红红外外吸吸收收图图谱谱应应与与对对照照的的图图谱（光谱集谱（光谱集 135 图）一致。图）一致。1/10/202324v有关物质检查异烟肼中游离肼的检查TLC（ChP法）比浊法（JP法）差示分光光度法（文献法）1/10/202325对照硫酸肼显色对二甲氨基苯甲醛规定在硫酸肼斑点相应的位置上，供试品不得显黄色斑点。样品液：50mg异烟肼/ml，点样：10ul杂质对照液：50ug游离肼/ml，点样：2ul限量计算：50250 10 1000100%=0.02%ChP1/10/202326 取本品，加水制成每取本品，

13、加水制成每 1ml 中含中含 50mg的溶液，的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中中含含 0.20mg（相当于游离肼（相当于游离肼50g 的溶液，作为对的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液照溶液。吸取供试品溶液 10l 与对照溶液与对照溶液 2l 分分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（制备）上，以异丙醇丙酮（3 2）为展开剂，）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，液，15min后检视，后检视，在供试品主斑点

14、前方与硫酸在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。ChP(2005)异烟肼中游离肼的检查异烟肼中游离肼的检查1/10/202327 JP原理 游离肼+水杨醛水杨醛腙（浑浊）规定 异烟肼样品+水杨醛5min内不得浑浊灵敏度法灵敏度法比浊法比浊法 此法专属性差，因异烟肼此法专属性差，因异烟肼(慢慢)和硫酸肼均生和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。成腙而析出沉淀。1/10/202328原理：文献游离肼异烟肼+对-二甲氨基苯甲醛黄色两者灵敏度不同，两者灵敏度不同，同时丙酮可与同时丙酮可与肼形成无色缩合物，在上述肼形成无色缩合物，在上述反应中加一定量丙酮，

15、使游离肼缩合物的反应中加一定量丙酮，使游离肼缩合物的吸收度发生变化，而同样条件下异烟肼缩吸收度发生变化，而同样条件下异烟肼缩合物的吸收度不变合物的吸收度不变差示分光光度法测定1/10/202329肼缩合物异烟肼缩合物456nm3%A丙酮%A=0 可在可在456nm456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度波长处测定并计算二者的差示吸收度AA456456，同时以对照品比较法计算游离肼含量。，同时以对照品比较法计算游离肼含量。1/10/202330 具体测定法：具体测定法：对照品溶液：对照品溶液：硫酸肼硫酸肼C CR R1g/ml1g/ml 5 ml+5 ml+丙酮丙酮 maxmax=456nm=

16、456nm 测测A A1 1 +对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛(AA456456A A2 2A A1 1)AAR R 5 ml5 ml maxmax=456nm=456nm 测测A A2 2 供试品溶液：供试品溶液：异烟肼异烟肼C C2mg/ml2mg/ml 游离肼游离肼 C CX X=AAs s/A/AR RCCR R 1 1份份+丙酮丙酮 maxmax=456nm=456nm 测测A A1 1 +对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛(AA456456A A2 2A A1 1)AAs s 2 2份份 maxmax=456nm=456nm 测测A A2 2 参比：参比：异烟肼异烟肼+游离肼游

17、离肼+对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛+3%丙酮丙酮 样品：样品：异烟肼异烟肼+游离肼游离肼+对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛1/10/202331以各自空白溶剂为对照，测定A计算：A样=A测 A参以硫酸肼为对照，同法测得：A对=A测 A参1份+对-二甲氨基苯甲醛(测定液)1份+丙酮+对-二甲氨基苯甲醛(参比液)供试液C肼=A样/A对 C对杂质%=C肼/W异 100%杂质限量？1/10/202332尼可刹米中有关杂质检查尼可刹米中有关杂质检查 因有关杂质的化学结构不明，故因有关杂质的化学结构不明，故Ch.pCh.p采用采用TLCTLC法中的法中的高低浓度对比法高低浓度对比法进行检查。进行检查。

18、1/10/202333硝苯地平中有关物质检查（HPLC法）分解物A分解物B硝苯地平1/10/202334色谱条件与灵敏度调节色谱条件与灵敏度调节 填充剂：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：流动相：甲醇甲醇-水（水（3 3：2 2）；）；检测波长：检测波长：235235nmnm。取对照品溶液取对照品溶液2020ll注入液相色谱仪，调节检测注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质灵敏度，使杂质A A和和B B组分色谱峰的峰高为满量程的组分色谱峰的峰高为满量程的20%20%；杂质；杂质A A和和B B组分之间，杂质组分之间，杂质B B与硝苯地平之间的分离度与硝苯地平之间的分离度

19、均符合规定。均符合规定。1/10/202335溶液配制:供试品液1：1mg/ml供试品液2：0.2mg/ml杂质对照品液1:杂质A和B各10mg/50ml杂质对照品液2:各1ml100ml供试品液2杂质对照品液1杂质对照品液2中：硝苯地平2ug/ml，杂质A和B各2ug/ml1/10/202336判断供试液1中杂质A，B峰 杂质对照品液2中杂质A，B峰面积供试液1中其他杂质峰 杂质对照品液2中硝苯地平峰面积供试品液1进样记录至主峰tR的2倍分离度灵敏度检测杂质对照品液2进样测定1/10/202337A B 样 A B 样 杂1 杂2tR杂质对照品液2：硝苯地平2ug/ml杂质A和B各2ug/m

20、l供试品液1：1mg/ml100500%2tR1/10/2023381.下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应A.地西泮B.阿司匹林C.异烟肼D.苯佐卡因E.苯巴比妥 1/10/2023392用于吡啶类药物鉴别的开环反应有A.茚三酮反应B.戊烯二醛反应C.坂口反应D.硫色素反应E.二硝基氯苯反应 1/10/202340例1.能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为A.对乙酰氨基酚B.异烟肼C.尼可刹米D.地西泮E.维生素E 1/10/202341例2.经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为A.葡萄糖B.皮质酮C.维生素CD.土酶素E.异烟肼 1/10/20

21、2342例3.异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质A.间氨基酚B.水杨酸C.对氨基苯甲酸D.游离肼E.其他甾体 1/10/202343例4.可用于异烟肼鉴别的反应有A.与氨制硝酸银的反应B.戊烯二醛反应C.坂口反应D.硫色素反应E.二硝基氯苯反应 1/10/202344第二节 喹啉类药物硫酸奎宁（左旋）（奎尼丁为右旋）碱性，旋光性，荧光特性盐酸环丙沙星碱性，无旋光性，无荧光1/10/202345主要化学性质主要化学性质1.1.碱碱性性 喹喹啉啉环环上上的的氮氮原原子子具具有有碱碱性性，与与强强酸酸形形成成稳稳定定的的盐盐。环环丙丙沙沙星星与与盐盐酸酸成成盐盐，奎奎宁宁和和奎

22、奎尼尼丁丁可可与与二二元元酸酸成成盐盐，结结构构中中喹喹核核碱碱含含脂脂环环氮氮，碱碱性性强强，可可与与硫硫酸酸成成盐盐；而而喹喹啉啉环环系系芳芳环环氮氮，碱碱性性较较弱弱，不不与与硫硫酸酸成成盐盐。奎奎宁宁pKpKb1b1为为5.075.07，pKpKb2b2为为9.79.7，饱饱和和溶溶液液的的pHpH值值为为8.88.8。奎尼丁奎尼丁pKpKb1b1为为5.45.4，pKpKb2b2为为1010。2.2.旋光性旋光性 硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237-237o o至至-244-244o o；硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+27

23、5+275o o至至+290+290o o；而盐；而盐酸环丙沙星无旋光性。酸环丙沙星无旋光性。3.3.荧光特性荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。1/10/202346v鉴别试验绿奎宁反应荧光反应酸根反应硫酸奎宁硫酸奎尼丁溴水(氯水)+氨试液翠绿色+硫酸奎宁/硫酸奎尼丁+稀硫酸 蓝色荧光硫酸根（SO42-）反应盐酸根（Cl-）反应1/10/202347翠绿色加酸成中性蓝色加酸紫红色硫酸奎宁/硫酸奎尼丁1/10/2023486-羟基喹啉1/10/202349光谱特征光谱特征1.U

24、V1.UV Ch.PCh.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。采用本法鉴别盐酸环丙沙星。2.2.荧光光谱特征荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H H2 2SOSO4 4中均显蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，中均显蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。可用于本类药物的鉴别。3.IR3.IR Ch.PCh.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此外光谱的方法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。法。1/10/202350v特殊杂质检查硫酸奎宁其他金鸡钠碱TLC 高低浓度法氯仿-乙醇中不溶物控制无

25、机盐与醇中不溶性杂质。其在氯仿-乙醇中不溶，过滤，干燥，称定残渣重量。盐酸环丙沙星有关物质HPLC归一化法主要控主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质。制本品中可能引入结构不清的有关杂质。1/10/202351色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验：色谱柱色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱流动相：流动相：0.05mol/L0.05mol/L枸橼酸枸橼酸-乙腈乙腈(82:18)(82:18)用三乙胺调节用三乙胺调节pHpH值值3.3.检测器：检测器：UVUV检测波长为检测波长为277nm277nm；按盐酸环丙沙星峰计算；按盐酸环丙沙星峰计算n n20

26、00;2000;盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度R R 1.5.1.5.测定方法：测定方法：取本品适量，加水制成每取本品适量，加水制成每1ml1ml中含中含0.4mg0.4mg的溶的溶液，取液，取20l20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2-42-4倍，倍，记录时间应为主成分峰保留时间的记录时间应为主成分峰保留时间的2 2倍。按倍。按面积归一面积归一化法化法计算，杂质总量不得超过计算，杂质总量不得超过1.5%1.5%。返 回1/10/2023

27、52第三节 托烷类药物硫酸阿托品酯键可水解，碱性，无旋光（外消旋化）氢溴酸东莨菪碱酯键可水解碱性，有旋光1/10/202353v主要化学性质主要化学性质1.1.水解性水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇以阿托品为例，水解生成莨菪醇()()和莨菪酸和莨菪酸()()。2.2.碱性碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子叔胺氮原子,具有较强的碱性具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的易与酸成盐。如阿托品的pKpKb1b1为为4.354.35。3.3.旋光性旋光性

28、氢溴酸东莨菪碱结构中含有氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为呈左旋体，比旋度为-24-24至至-27-27，而阿托品结构中虽然，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。1/10/202354v鉴别试验Vitali反应（托烷类生物碱的一般鉴别）氧化反应 本类药物水解后生成莨菪酸,与硫酸和重铬酸钾发生氧化反应，生成苯甲醛。沉淀反应 与生物碱沉淀试剂作用 阿托品+氯化汞醇黄色 东莨菪碱+氯化汞醇白色复盐1/10/20

29、2355黄色深紫色水解1/10/202356苦杏仁1/10/202357v特殊杂质检查硫酸阿托品莨菪碱旋光法(阿托品无旋光性，莨菪碱为左旋体)其他生物碱（利用其他生物碱碱性弱于阿托品，加氨试液被游离析出，使发生浑浊而检出）1/10/202358氢溴酸东莨菪碱其他生物碱检查原理同硫酸阿托品中其他生物碱的检查易氧化物主要检查阿扑阿托品及含不饱和双键的有机物 样品液+KMnO410min内红色不得全消失1/10/202359v基本结构-化学性质-鉴别试验第四节第四节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物(烃胺)硫氮杂蒽1/10/202360SCH3盐酸硫盐酸硫利达嗪利达嗪1/10/202361本类药物具有下列性

30、质：1.具有多吸收峰的紫外吸收光谱特征2.R取代基上N原子具有碱性3.环上硫原子易被氧化成亚砜和砜4.环上硫原子可与某些金属离子形成有色络合物以上性质1，3，4可用作鉴别试验1/10/202362紫外特征吸收有三个吸收峰205nm，254nm(强)，300nm吩噻嗪250220300 nm亚砜砜1/10/202363显色反应 H2SO4，HNO3，Br2水，H2O2，FeCl3药物硫酸硝酸H2O2氯丙嗪/红红淡黄淡黄/异丙嗪樱桃红樱桃红红红橙黄橙黄/奋乃静/深红深红褪褪三氟拉嗪/白色白色 红红/硫利达嗪蓝色蓝色/1/10/202364未被氧化未被氧化有色有色1/10/202365v鉴别试验鉴别

31、试验v紫外光谱法紫外光谱法紫外光谱法紫外光谱法v与氧化剂或金属离子的显色反应与氧化剂或金属离子的显色反应与氧化剂或金属离子的显色反应与氧化剂或金属离子的显色反应v分解反应分解反应分解反应分解反应 含氟药物经与碳酸钠、碳酸钾在含氟药物经与碳酸钠、碳酸钾在含氟药物经与碳酸钠、碳酸钾在含氟药物经与碳酸钠、碳酸钾在600600600600 C C C C炽灼，分解成氟化物，与茜素锆作用成炽灼，分解成氟化物，与茜素锆作用成炽灼，分解成氟化物，与茜素锆作用成炽灼，分解成氟化物，与茜素锆作用成ZrFZrFZrFZrF6 6 6 6 2-2-2-2-，游离出茜素，使溶液由游离出茜素，使溶液由游离出茜素，使溶液

32、由游离出茜素，使溶液由红色红色红色红色黄色黄色黄色黄色1/10/202366紫外特征吸收和红外吸收光谱紫外特征吸收和红外吸收光谱 本类药物可用本类药物可用UV和和IR鉴别，鉴别，Ch.P中中UV鉴别实例如下：鉴别实例如下：药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml）maxmax（nmnm）A E A E1%1%1cm1cm盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 盐酸（盐酸（9 10009 1000）5 254 0.46 915 5 254 0.46 915 306 306 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 盐酸（盐酸（0.01mol/L0.01mol/L）6 249 883937 6 249 883937奋

33、乃静奋乃静 无水乙醇无水乙醇 7 258 0.65 7 258 0.65 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 乙醇乙醇 10 260 10 260 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 盐酸（盐酸（9 10009 1000）10 255 553593 10 255 553593 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 盐酸（盐酸（1 201 20）10 256 630 10 256 630盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 乙醇乙醇 8 264 8 264与与315 315 1/10/202367奋乃静奋乃静 ChP（2005）鉴鉴别别 （2）取取本本品品，加加无无水水乙乙醇醇制制成成每每1ml 中中含含 7 g 的的溶溶液液，照照分分光光光

34、光度度法法（附附录录A）测测定定，在在258nm 的波长处有最大吸收，吸收度约为的波长处有最大吸收，吸收度约为0.65。（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 243 图）一致图）一致1/10/202368v 显色反应显色反应 1.与氧化剂的显色反应与氧化剂的显色反应 药物名称药物名称 硫硫 酸酸 硝硝 酸酸 过氧化氢过氧化氢 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 显红色显红色,渐变淡黄色渐变淡黄色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 显樱桃红色显樱桃红色,放置放置 生成红色沉淀生成红色沉淀,加热即溶解加热即溶解,后颜色渐变深后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色溶液由红色转

35、变为橙黄色 奋乃静奋乃静 显深红色显深红色;放置后放置后 红色渐褪去红色渐褪去 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 显淡红色显淡红色,温热温热 后变成红褐色后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀生成微带红色的白色沉淀;放放 置后置后,红色变深红色变深,加热后变黄色加热后变黄色 盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 显蓝色显蓝色 1/10/202369奋乃静奋乃静 ChP（2005）鉴鉴别别（1）取取本本品品 5mg，加加盐盐酸酸与与水水各各 1ml，加加热热至至80，加加入入过过氧氧化化氢氢溶溶液液数数滴滴，即即显显深深红红色色；放放置置后后，红红色渐褪去。色渐褪去。盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 C

36、hP（2005）鉴别鉴别（1）取本品约）取本品约 5mg，加硫酸，加硫酸5ml 溶解后，溶液显溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。樱桃红色；放置后，色渐变深。（2）取本品约）取本品约 0.1g，加水，加水 3ml 溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸 1ml，即，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。橙黄色。1/10/202370 2.与钯离子络合显色反应与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。成有色络合物，如与癸氟

37、奋乃静形成红色络合物。癸氟奋乃静癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别鉴别（2）取本品约）取本品约 5mg，加甲醇，加甲醇2ml 溶解后，加溶解后，加 0.1%氯化钯溶液氯化钯溶液 3ml，即有沉淀生成，并显红色，再加，即有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。过量的氯化钯溶液，颜色变深。1/10/2023711/10/202372（三）分解产物的反应（三）分解产物的反应 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 碳酸钠及碳酸钾碳酸钠及碳酸钾 F F-+酸性茜素锆试液酸性茜素锆试液 ZrF ZrF6 6 2-2-配位离子，茜素游离使溶液由红色变为配位离子，茜素游离使溶液由红色变为黄色。黄色。600600

38、炽灼炽灼癸氟奋乃静癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别鉴别（1）取本品）取本品 15 20mg，加碳酸钠与碳酸钾各，加碳酸钠与碳酸钾各约约0.1g，混匀，在，混匀，在 600 炽灼炽灼 1520分钟，放冷，加分钟，放冷，加水水2ml 使溶解，加盐酸溶液（使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液液加茜素锆试液 0.5ml，应显黄色。，应显黄色。1/10/202373v特殊杂质检查n盐酸异丙嗪中有关物质检查主要指合成过程中副产物（异构体）盐酸硫利达嗪中有关物质检查均采用TLC高低浓度法1/10/202374薄层板硅胶GF254 供试液10mg/ml对照液 0.15 mg

39、/ml（1）0.05 mg/ml（2）点样各10ul，紫外254nm检测样样 对对1 对对2规定：杂质斑点不得多于3个 荧光强度不得较对照液2强 如有一点超过，不得深于对照液1（0.5%）(1.5%)盐酸异丙嗪中有关物质检查例例1/10/202375第五节第五节 苯并二氮杂卓类药物苯并二氮杂卓类药物环庚三烯环庚三烯卓卓1/10/202376第五节 苯骈二氮杂卓类药物水解印三酮反应水解重氮化-偶合结构特征与典型药物结构特征与典型药物（1955年合成）1959年合成1/10/202377阿普唑仑阿普唑仑奥沙西泮奥沙西泮水解重氮化-偶合1/10/202378性质性质 1.苯并二氮杂卓母核苯并二氮杂卓

40、母核 弱碱性，弱碱性，UV 2.结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。相应的二苯甲酮衍生物。可用于鉴别和比色测定。可用于鉴别和比色测定。3.含卤素含卤素4.本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。中。1/10/202379 (一一)化学鉴别试验化学鉴别试验 1 1。沉淀反应。沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 KBiI KBiI4 4 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色

41、变深，放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。因此可以相互区别。鉴别试验鉴别试验阿普唑仑阿普唑仑+遇硅钨酸遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。白色沉淀，药典中也用于鉴别。1/10/202380氯氮卓氯氮卓 ChP（2000）【鉴别】【鉴别】（2）取本品约）取本品约 10mg，加盐酸溶液，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生滴，即生成橙红色沉淀。成橙红色沉淀。阿普唑仑阿普唑仑 ChP（2000）鉴别鉴别（1）取本品约）取本品约 5mg，加盐酸溶液，加盐酸溶液（91000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试溶解后，分为两份：一份加硅钨

42、酸试液液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。滴，即生成橙红色沉淀。1/10/2023812.2.水解后呈芳伯胺反应水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：氯氮卓氯氮卓 ChP（2005）鉴别鉴别（1）取本品约）取本品约 10mg，加盐酸溶液（，加盐酸溶液（12）15ml，缓缓煮沸，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，溶液显芳香第一胺类的鉴别分钟，放冷，溶液显芳香第一胺类的鉴别反应（附录反应（附录）。）。1/10/2023823.3.硫酸硫酸-荧光反应荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外

43、光（本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm365nm）下，）下，显不同颜色的荧光。例如：显不同颜色的荧光。例如：地西泮地西泮 黄绿色黄绿色 黄色黄色 氯氮卓氯氮卓 黄色黄色 紫色紫色 艾司唑艾司唑仑仑 +H +H2 2SOSO4 4 亮绿色亮绿色 +稀硫酸稀硫酸 天蓝色天蓝色 硝西泮硝西泮 淡蓝色淡蓝色 蓝绿色蓝绿色 奥沙西泮奥沙西泮 淡黄绿色淡黄绿色1/10/2023835.5.氯化铜焰色反应氯化铜焰色反应 分子结构中含有氯元素的药物，分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧在铜网上燃烧 发发出出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。地西

44、泮地西泮 ChP（2005）鉴别鉴别（2）取本品）取本品 20mg，用氧瓶燃烧法（附录，用氧瓶燃烧法（附录 C）进行）进行有机破坏，以有机破坏，以 5%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录（附录）。）。4.4.分解产物的反应分解产物的反应 本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。显氯化物反应。Ch.PCh.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。1/10/2

45、02384 （二）紫外特征吸收和红外吸收光谱（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml）maxmax（nmnm）A A 地西泮地西泮 0.5%0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液 5 242 5 242 约约0.510.51 282 282 约约0.230.23 366 366 氯氮卓氯氮卓 盐酸溶液盐酸溶液(91000)7 245,308 (91000)7 245,308 阿普唑仑阿普唑仑 盐酸溶液盐酸溶液(91000)12 264 (91000)12 264 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 硫酸甲醇硫酸甲醇(136)10 2392,2842(136)10

46、 2392,2842 比值比值1.951.952.502.50 3622 3622 氯硝西泮氯硝西泮 0.5%0.5%硫酸甲醇溶液硫酸甲醇溶液 10 2392,3072 10 2392,3072 奥沙西泮奥沙西泮 乙醇乙醇 10 229,3152(10 229,3152(较弱较弱)红外吸收光谱红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。1/10/202385（三）（三）TLC法法 1.1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLCTLC法法 按按常常规规法

47、法点点样样10l10l于于硅硅胶胶G G薄薄层层板板上上，以以苯苯-丙丙酮酮（3 3：2 2）为为展展开开剂剂,饱饱和和15min15min，用用上上行行法法展展开开15cm15cm，挥挥发发溶溶剂剂，用用稀稀硫硫酸酸喷喷雾雾，于于105105干干燥燥30min30min，置置紫紫外外灯下检视荧光斑点，结果见下表。灯下检视荧光斑点，结果见下表。1/10/202386n薄层色谱法硅胶G薄层板,苯-丙酮为展开剂,荧光检视药物药物Rf值值自然光自然光254nm365nm地西泮地西泮0.78无色无色黄色黄色(m)同前同前氯氮卓氯氮卓0.34无色无色蓝紫色蓝紫色(s)同前同前(w)艾司唑仑艾司唑仑0.2

48、0无色无色灰紫色灰紫色(m)蓝紫色蓝紫色(m)硝西泮硝西泮0.72黄色黄色紫色紫色(w)同前同前奥沙西泮奥沙西泮0.52黄色黄色亮灰蓝色亮灰蓝色(s)同前同前s,m,w代表荧光强度强代表荧光强度强,中中,弱弱1/10/2023872.2.酸水解产物的酸水解产物的TLCTLC法法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的酮衍生物，因此本法的专属性较差专属性较差。1/10/202388 有

49、关物质检查有关物质检查 Ch.P Ch.P 收载的八种本类药物，除氯氮卓外，收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了其余均作此项检查。其检查方法除了三唑仑三唑仑采用采用GCGC法法外，其余均用外，其余均用TLCTLC法法进行检查。进行检查。USP(24)USP(24)和和BP(2000)BP(2000)中对中对氯氮卓氯氮卓都规定了此项检查，而且均都规定了此项检查，而且均用用TLCTLC法法进行检查。进行检查。特殊杂质检查特殊杂质检查1/10/202389 1.1.地西泮中有关物质的检查地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入中因其副

50、反应，可能引入N-N-去甲基苯甲二氮卓去甲基苯甲二氮卓及及化学结构不清的有关物质化学结构不清的有关物质，可采用，可采用TLCTLC法中的高法中的高低浓度对比法进行检查。低浓度对比法进行检查。2.2.氯氮卓中有关物质的检查氯氮卓中有关物质的检查 USP(24)USP(24)用用TLCTLC法检法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-2-氨氨基基-5-5-氯氯-2-2-苯甲酮苯甲酮含量不得过含量不得过0.01%0.01%；中间体；中间体7-7-氯氯-1-1，3-3-二氢二氢-5-5-苯基苯基-2H-1-2H-1，4-4-苯并二氮杂卓苯并二氮杂卓-2-2-