土壤总磷有机磷无机磷含量测定试剂盒说明书.docx

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1、货号：MS2905规格：100管/96样土壤总磷/有机磷/无机磷含量测定试剂盒说明书微量法留意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做猜测定。测定意义：土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物采用。土壤有机磷经过矿化分 解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷养分状况。测定原理：采用铝蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；此外取一份土样，经高 温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计 算出有机磷含量。自备试验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、可调式水浴锅

2、，分析 天平、可调式移液器、550C高温电炉、蒸储水、100目筛子（可更小）。试剂组成和配制：试剂一：液体义1瓶，4c保存。临用前用蒸偏水稀释10倍后再用。试剂二：液体义1瓶，4c保存。试剂三：粉剂义1瓶，4避光保存。临用前配制，加入8mL蒸储水，充分溶解后加入4mL 试剂二，混匀。标准品：液体XI支，20 umol/L无机磷标准品，4保存。土壤不同形态磷提取：1 .无机磷：称取通过100目筛子的风干土样0.01g,转移到1mL离心管，加入1mL试剂一，震 荡混匀，然后置于45水浴lh, 8000g, 25离心lOmin,取上清液一，用于无机磷含量测定。 2.总磷提取：取通过100目筛子的风干

3、土样，550c灼烧lh,冷却后称取约0. 01g,转移到1 mL 离心管，加入1mL试剂一，震荡混匀，然后置于45水浴lh, 8000g, 25离心lOmin,取上 清液二，用于总磷含量测定。测定步骤：1.分光光度计/酶标仪预热30 min,调整波长到660 nm,蒸储水调零。2打开水浴锅，调整温度到40。3 .空白管：取EP管，依次加入100口 L蒸储水，100 uL试剂三，混匀后置于40水浴保温 lOmin,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A空白管。4 .标准管：取EP管，依次加入10 UL标准液，90 UL蒸储水，lOOu L试剂三，混匀后置于 40水浴保温lOmin

4、,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A标准管。5 .测定管：取EP管，依次加入10uL上清液一或者上清液二，90 HL蒸储水，100 u L试剂三, 混匀后置于40水浴保温10min,室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A测定管。 留意：空白管和标准管只需测定一次。土壤磷含量计算：a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下.土壤无机磷含量（uniol /g干重）=C标准液X （A测定一A空白）+（A标准一A空白）XV=0. 02 X （A测定一A空白）小 （A标准一A空白）+WC标准液：20 umol/L； W： 土壤样品质量，g； V总：上清液一总体积，1 m

5、L=0. 001 L。1 .土壤总磷含量（umol /g干重）=C标准液X （A测定一A空白）+（A标准一A空白）XV总=0. 02X （A测定一A空白）+ （A标准一A空白）小WC标准液：20 umol/L； W： 土壤样品质量，g； V总：上清液二总体积，lmL=0. 001 L。2 .土壤有机磷（nmol /g干重）=土壤总磷-土壤无机磷b.使用96孔板测定的计算公式如下1 .土壤无机磷含量（nmol /g干重）=C标准液X （A测定一A空白）+（A标准一A空白）XV 总-FW=0. 02X （A测定一A空白）小 （A标准-A空白）4-WC标准液：20 umol/L； W： 土壤样品质量，g； V总：上清液一总体积，1位=0.001 L。2. 土 壤总磷含量（uniol /g干重）二C标准液X（A测定一A空白）+ （A标准一A空白）XV总+ W =0. 02X （A测定一A空白）+ （A标准一A空白）+WC标准液：20 umol/L； W： 土壤样品质量，g； V总：上清液二总体积，1mL=0. 001 L。3. 土壤有机磷（Pmol /g干重）=土壤总磷-土壤无机磷 留意事项：试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，留意吸取时不要将黑色固体吸入。