第四章--细胞化学染色课件.ppt

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1、 第三章第三章 血细胞化学染色血细胞化学染色 第一节第一节 概述概述 以细胞以细胞以细胞以细胞形态学形态学形态学形态学为基础，根据为基础，根据为基础，根据为基础，根据化学反应化学反应化学反应化学反应的原的原的原的原理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各种化学成分及其变化作定性、定位、半定量种化学成分及其变化作定性、定位、半定量种化学成分及其变化作定性、定位、半定量种化学成分及其变化作定性、定位、半定量的分析。的分析。的分析。的分析。一、研究对象一、研究对象 外周血和骨髓外周血和骨髓

2、外周血和骨髓外周血和骨髓新鲜涂片新鲜涂片新鲜涂片新鲜涂片单个细胞中的单个细胞中的单个细胞中的单个细胞中的化学物质：化学物质：化学物质：化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等 二、基本步骤二、基本步骤固定固定固定固定 保持细胞结构和化学成分保持细胞结构和化学成分保持细胞结构和化学成分保持细胞结构和化学成分显示显示显示显示 被染的化学物质最终形成稳定的被染的化学物质最终形成稳定的被染的化学物质最终形成稳定的被染的化学物质最终形成稳定的 有色沉淀有色沉淀有色沉淀有色沉淀 复染复染复染复

3、染 显示各种细胞，其颜色与有色沉显示各种细胞，其颜色与有色沉显示各种细胞，其颜色与有色沉显示各种细胞，其颜色与有色沉 淀的颜色有明显的对比度淀的颜色有明显的对比度淀的颜色有明显的对比度淀的颜色有明显的对比度 三、临床应用三、临床应用 1.1.1.1.鉴别各类血细胞鉴别各类血细胞鉴别各类血细胞鉴别各类血细胞 2.2.2.2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.3.3.3.观察疾病疗效和判断预后观察疾病疗效和判断预后观察疾病疗效和判断预后观察疾病疗效和判断预后 第二节第二节 常用细胞化学染色方法常用细

4、胞化学染色方法 过氧化物酶染色过氧化物酶染色过氧化物酶染色过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸过碘酸过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应雪夫反应雪夫反应 -醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色 铁染色铁染色铁染色铁染色 一、过氧化物酶染色一、过氧化物酶染色（peroxidaseperoxidase，POXPOX）髓过氧化物酶髓过氧化物酶（marrow peroxidase,MPO)marrow peroxidase,MPO)marrow peroxidase,MPO)marrow pero

5、xidase,MPO)血细胞主要的血细胞主要的血细胞主要的血细胞主要的POX,POX,POX,POX,是人类是人类是人类是人类中性粒细胞含量中性粒细胞含量中性粒细胞含量中性粒细胞含量最多最多最多最多的蛋白质的蛋白质的蛋白质的蛋白质，主要功能是破坏生物氧化过，主要功能是破坏生物氧化过，主要功能是破坏生物氧化过，主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物。程中有剧毒的过氧化物。程中有剧毒的过氧化物。程中有剧毒的过氧化物。POX 新生态氧新生态氧 OO过氧化氢过氧化氢（基质中）（基质中）（基质中）（基质中）二氨基联苯胺二氨基联苯胺二氨基联苯胺二氨基联苯胺 （无色）（无色）（无色）（无色）粒、单核粒

6、、单核粒、单核粒、单核细胞胞浆细胞胞浆细胞胞浆细胞胞浆【原理原理】棕黄色沉淀棕黄色沉淀 （浆内酶部位（浆内酶部位）【结果判断结果判断】阴性阴性阴性阴性 无颗粒无颗粒无颗粒无颗粒弱阳性弱阳性弱阳性弱阳性 颗粒小，分布稀疏颗粒小，分布稀疏颗粒小，分布稀疏颗粒小，分布稀疏阳性阳性阳性阳性 颗粒稍粗，分布较密集颗粒稍粗，分布较密集颗粒稍粗，分布较密集颗粒稍粗，分布较密集强阳性强阳性强阳性强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆颗粒粗大，密布于整个胞浆颗粒粗大，密布于整个胞浆颗粒粗大，密布于整个胞浆 【正常血细胞染色反应正常血细胞染色反应】1.1.1.1.粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统 POXPOXP

7、OXPOX主要存在于粒系细胞中主要存在于粒系细胞中主要存在于粒系细胞中主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性分化差的原粒细胞阴性分化差的原粒细胞阴性分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。熟逐渐增强。熟逐渐增强。熟逐渐增强。2.2.2.2.单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统 阴性或弱阳性阴性或弱阳性阴性或弱

8、阳性阴性或弱阳性 3.3.3.3.淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统 红细胞系统红细胞系统红细胞系统红细胞系统 巨核细胞系统巨核细胞系统巨核细胞系统巨核细胞系统 阴性阴性阴性阴性 浆细胞浆细胞浆细胞浆细胞 组织细胞组织细胞组织细胞组织细胞 【临床意义临床意义】临临临临床床床床上上上上是是是是辅辅辅辅助助助助判判判判断断断断急急急急性性性性白白白白血血血血病病病病首首首首选选选选的的的的、最重要最重要最重要最重要的细胞化学染色的细胞化学染色的细胞化学染色的细胞化学染色 急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞

9、白血病急性淋巴细胞白血病 鉴别鉴别鉴别鉴别 1.1.1.1.急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 （1 1 1 1）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病 阳性反应：阳性反应：阳性反应：阳性反应：M3M2bM2aM1 M3M2bM2aM1 M3M2bM2aM1 M3M2bM2aM1 （分化差的原粒细胞呈阴性反应）（分化差的原粒细胞呈阴性反应）（分化差的原粒细胞呈阴性反应）（分化差的原粒细胞呈阴性反应）（2 2 2 2）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病 弱阳性反应弱阳性反应弱阳性反应弱阳性反

10、应 （分化差的原单核细胞呈阴性反应）（分化差的原单核细胞呈阴性反应）（分化差的原单核细胞呈阴性反应）（分化差的原单核细胞呈阴性反应）2.2.2.2.急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病 阴性反应阴性反应阴性反应阴性反应 或阳性率或阳性率或阳性率或阳性率 3%(3%(3%(3%(残留的原粒细胞残留的原粒细胞残留的原粒细胞残留的原粒细胞)二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （neutrophilic alkalineneutrophilic alkaline phosphatasephosphatase，NAPNAP）磷酸萘酚钠磷酸萘酚钠

11、（基质中）（基质中）（基质中）（基质中）中性粒细胞中性粒细胞中性粒细胞中性粒细胞胞浆中胞浆中胞浆中胞浆中NAPNAPNAPNAP磷酸钠磷酸钠-萘酚萘酚 重氮盐重氮盐（坚牢蓝盐（坚牢蓝盐（坚牢蓝盐（坚牢蓝盐RRRRRRRR）紫黑色偶氮染料紫黑色偶氮染料 （胞浆中）（胞浆中）水解水解【原理原理】KaplowKaplow偶氮偶联法偶氮偶联法 【结果判断结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性胞浆中有紫黑色颗粒为阳性胞浆中有紫黑色颗粒为阳性胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+(+）【正常血细胞染色反应正常血细胞染色反应】1.1.1.1.中性成熟粒细胞（杆状和分叶）阳性反应中性成熟粒细胞（杆状和分叶）阳性反应中性成熟

12、粒细胞（杆状和分叶）阳性反应中性成熟粒细胞（杆状和分叶）阳性反应 其他细胞呈阴性反应其他细胞呈阴性反应其他细胞呈阴性反应其他细胞呈阴性反应 2.NAP2.NAP积分值积分值 油镜下计数油镜下计数100100个成熟中性粒细胞（杆状个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）和分叶）,分别记录其分级情况：分别记录其分级情况：(-)0(-)0(-)0(-)0分分分分 (+)1(+)1(+)1(+)1分分分分 (+)2(+)2(+)2(+)2分分分分 (+)3(+)3(+)3(+)3分分分分 (+)4(+)4(+)4(+)4分分分分 阳性率阳性率阳性率阳性率 全部阳性反应细胞之和全部阳性反应细胞之和全部阳性反应细胞

13、之和全部阳性反应细胞之和 积分值积分值积分值积分值 各种阳性程度细胞的分值之和各种阳性程度细胞的分值之和各种阳性程度细胞的分值之和各种阳性程度细胞的分值之和 3.3.3.3.参考值参考值参考值参考值 积分值积分值积分值积分值 40804080分分分分 阳性率阳性率阳性率阳性率 10%10%10%10%40%40%40%40%(各实验室参考值不同各实验室参考值不同各实验室参考值不同各实验室参考值不同)【临床意义临床意义】病理性变化：病理性变化：病理性变化：病理性变化：（1 1 1 1）细菌性感染与病毒性感染）细菌性感染与病毒性感染）细菌性感染与病毒性感染）细菌性感染与病毒性感染 （尤其是化脓性感

14、染）（尤其是化脓性感染）（尤其是化脓性感染）（尤其是化脓性感染）明显增加明显增加明显增加明显增加 无明显变化无明显变化无明显变化无明显变化 (2(2(2(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病类白血病反应与慢性粒细胞白血病类白血病反应与慢性粒细胞白血病类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加明显增加明显增加明显增加 明显下降且常为零分，明显下降且常为零分，明显下降且常为零分，明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常缓解时又上升到正常缓解时又上升到正常缓解时又上升到正常 （3 3 3 3）再生障碍性贫血再生障碍性贫血再生障碍性贫血再生障碍性贫血 增加增加增加增加 阵发性睡眠性血红蛋白尿阵发性睡眠性血红

15、蛋白尿阵发性睡眠性血红蛋白尿阵发性睡眠性血红蛋白尿 下降下降下降下降 三、过碘酸三、过碘酸-雪夫反应雪夫反应 (糖原染色糖原染色 )（periodic acid-Schiff reactionperiodic acid-Schiff reactionperiodic acid-Schiff reactionperiodic acid-Schiff reaction，PASPASPASPAS）双醛双醛基基过碘酸过碘酸过碘酸过碘酸雪夫试剂中雪夫试剂中雪夫试剂中雪夫试剂中的无色品红的无色品红的无色品红的无色品红 紫红色化合物紫红色化合物 (附于含多糖类附于含多糖类 的胞浆内的胞浆内)乙二醇基乙二醇基

16、(多糖类物质含有多糖类物质含有多糖类物质含有多糖类物质含有)氧化氧化氧化氧化【原理原理】【结果判断结果判断】阳性阳性阳性阳性 胞浆内出现红色阳性物，胞浆内出现红色阳性物，胞浆内出现红色阳性物，胞浆内出现红色阳性物，呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。阴性阴性阴性阴性 胞浆内无色胞浆内无色胞浆内无色胞浆内无色,核淡绿。核淡绿。核淡绿。核淡绿。用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。【正常血细胞染

17、色反应正常血细胞染色反应】1.1.1.1.粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性；分化差的原粒细胞为阴性；分化差的原粒细胞为阴性；分化差的原粒细胞为阴性；分化好的分化好的分化好的分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞原粒细胞至中性分叶核粒细胞原粒细胞至中性分叶核粒细胞原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反各阶段均呈阳性反各阶段均呈阳性反各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细应，阳性程度随细应，阳性程度随细应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。胞的成熟逐渐增强。胞的成熟逐渐增强。胞的成熟逐渐增强。阳性物呈细颗粒、阳性物呈细颗粒、阳性物呈细颗粒、阳性物呈细颗粒、均匀红色。均匀

18、红色。均匀红色。均匀红色。2.2.2.2.红细胞系统红细胞系统红细胞系统红细胞系统 阴性阴性阴性阴性 3.3.3.3.单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统 细细细细颗颗颗颗粒粒粒粒状状状状，有有有有时时时时分分分分布布布布于于于于细细细细胞胞胞胞边边边边缘缘缘缘的的的的阳阳阳阳性性性性颗颗颗颗粒较粗大。粒较粗大。粒较粗大。粒较粗大。4.4.4.4.淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性；大多数淋巴细胞呈阴性；大多数淋巴细胞呈阴性；大多数淋巴细胞呈阴性；少于少于少于少于20%20%20%20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。

19、淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.5.5.5.巨核细胞系统巨核细胞系统巨核细胞系统巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）呈颗粒状或块状阳性（含血小板）呈颗粒状或块状阳性（含血小板）呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。【临床意义临床意义】1.1.1.1.红细胞疾病红细胞疾病红细胞疾病红细胞疾病:恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。红血病或红白血病红血病或红白血病红血病或红白血病红血病或红白血病 幼红细胞阳性幼红细胞阳性幼红细胞阳性幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血巨幼细胞

20、性贫血巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性幼红细胞阴性幼红细胞阴性幼红细胞阴性 骨髓增生异常综合征骨髓增生异常综合征骨髓增生异常综合征骨髓增生异常综合征 幼红细胞阳性幼红细胞阳性幼红细胞阳性幼红细胞阳性 再生障碍性贫血再生障碍性贫血再生障碍性贫血再生障碍性贫血 幼红细胞阴性幼红细胞阴性幼红细胞阴性幼红细胞阴性 2.2.鉴别急性白血病类型鉴别急性白血病类型（1 1）急性淋巴细胞白血病）急性淋巴细胞白血病 阳性率阳性率阳性率阳性率20%20%8080%，呈红色粗颗粒状或块状。，呈红色粗颗粒状或块状。，呈红色粗颗粒状或块状。，呈红色粗颗粒状或块状。（2 2 2 2）急性粒细胞白血病）急性粒细胞

21、白血病）急性粒细胞白血病）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3 3 3 3）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病 可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。胞质边缘处颗粒较粗大。胞质边缘处颗粒较粗大。胞质边缘处颗粒较粗大。（4 4）巨核细胞白血病）巨核细胞白血病 阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。阳性或强阳性反应，表现为

22、红色颗粒或块状。3.3.3.3.其他细胞其他细胞其他细胞其他细胞 戈谢细胞呈强阳性戈谢细胞呈强阳性戈谢细胞呈强阳性戈谢细胞呈强阳性 （葡萄糖脑苷脂在单核（葡萄糖脑苷脂在单核（葡萄糖脑苷脂在单核（葡萄糖脑苷脂在单核-吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）尼曼尼曼尼曼尼曼-匹克细胞呈阴性或弱阳性匹克细胞呈阴性或弱阳性匹克细胞呈阴性或弱阳性匹克细胞呈阴性或弱阳性 （鞘磷脂在单核（鞘磷脂在单核（鞘磷脂在单核（鞘磷脂在单核-吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）吞噬细胞积聚）四、四、-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色（-naphthol acetate esterase-napht

23、hol acetate esterase-naphthol acetate esterase-naphthol acetate esterase，-NAE-NAE-NAE-NAE）酸性酸性酸性酸性-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 （T T淋巴细胞、单核淋巴细胞、单核-巨噬细胞）巨噬细胞）-醋酸萘酚酯酶（醋酸萘酚酯酶（醋酸萘酚酯酶（醋酸萘酚酯酶（-NAE-NAE-NAE-NAE）非特异性非特异性非特异性非特异性 （单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶 （单核细胞、巨噬细胞）（单核细胞、巨噬细胞）醋酸醋酸醋酸

24、醋酸AS-DAS-DAS-DAS-D萘酚酯酶（萘酚酯酶（萘酚酯酶（萘酚酯酶（AS-D NAE)AS-D NAE)AS-D NAE)AS-D NAE)（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）特异性特异性特异性特异性 氯乙酸氯乙酸氯乙酸氯乙酸AS-DAS-DAS-DAS-D萘酚酯酶萘酚酯酶萘酚酯酶萘酚酯酶(AS-D NCE)(AS-D NCE)(AS-D NCE)(AS-D NCE)（粒细胞）（粒细胞）酯酶酯酶 -醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 （细胞内）（细胞内）（细胞内）（细胞内）-醋酸萘酚醋酸萘酚醋酸萘酚醋酸萘酚 （基质液中）（基质液中）（基质液中）（基

25、质液中）-萘酚萘酚萘酚萘酚 重氮盐重氮盐重氮盐重氮盐（坚牢蓝（坚牢蓝（坚牢蓝（坚牢蓝B B B B）胞浆不溶性灰黑色胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀或棕黑色沉淀水解水解水解水解【原原理理】【结果判断结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。为阳性。为阳性。为阳性。氟化钠抑制试验氟化钠抑制试验氟化钠抑制试验氟化钠抑制试验 在基质液中加入适量在基质液中加入适量在基质液中加入适量在基质液中加入适量NaF,NaF,NaF,NaF,其余染色方法同上。其余染色方法同上。其余染色方法

26、同上。其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数两种方法染色后用油镜计数两种方法染色后用油镜计数两种方法染色后用油镜计数100100100100或或或或200200200200个被检细个被检细个被检细个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。积分。积分。积分。氟化钠抑制率氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分 -抑制后阳性率或阳性积分抑制后阳性率或阳性积分抑制后阳性率或阳性积分抑制后阳性率或阳

27、性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分100%100%100%100%【正常血细胞染色反应正常血细胞染色反应】1.1.1.1.单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统单核细胞系统 原始单核细胞原始单核细胞 分化差分化差 阴性阴性 分化好分化好 阳性阳性 幼稚及成熟单核细胞幼稚及成熟单核细胞 阳性阳性被氟化钠抑制被氟化钠抑制被氟化钠抑制被氟化钠抑制 2.2.2.2.粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统粒细胞系统 原粒细胞阴性或弱阳性原粒细胞阴性或弱阳性原粒细胞阴性或弱阳性原粒细胞阴性或弱阳性 以下阶段为弱阳性以下阶段为弱阳性以下阶段为弱阳性以下阶段为

28、弱阳性 3.3.3.3.淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统淋巴细胞系统 多数阴性，少数弱阳性多数阴性，少数弱阳性多数阴性，少数弱阳性多数阴性，少数弱阳性 不不不不被被被被氟氟氟氟化化化化钠钠钠钠抑抑抑抑制制制制 【临床意义临床意义】急单急单急单急单 急粒急粒急粒急粒 急性早幼粒急性早幼粒急性早幼粒急性早幼粒 急粒单急粒单急粒单急粒单 急淋急淋急淋急淋-NAE +-NAE +-NAE +-NAE +或或或或 -或或或或 +阳性阳性阳性阳性 -或或或或+弱弱弱弱+NaF NaF NaF NaF 被抑制被抑制被抑制被抑制 不被不被不被不被 不被抑制不被抑制不被抑制不被抑制 部分被抑制部分被抑制部分

29、被抑制部分被抑制 抑制抑制抑制抑制 部分未被抑制部分未被抑制部分未被抑制部分未被抑制主要用于鉴别急性白血病类型主要用于鉴别急性白血病类型 五五、-丁酸萘酚酯酶染色丁酸萘酚酯酶染色 2.2.原理原理 细胞内的细胞内的-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶(-NBE)在碱性条件下，在碱性条件下，将基质中的将基质中的-丁酸萘酚水解，产生丁酸萘酚水解，产生-萘酚，再与重氮萘酚，再与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于酶活性所在处。盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于酶活性所在处。-丁酸萘酚酯丁酸萘酚酯酶酶 （细胞内）（细胞内）（细胞内）（细胞内）-丁酸萘酚酯丁酸萘酚酯 （基质液中）（基质液中）（基质液中）（基

30、质液中）-萘酚萘酚萘酚萘酚 重氮盐重氮盐重氮盐重氮盐（坚牢蓝（坚牢蓝（坚牢蓝（坚牢蓝B B B B）胞浆不溶性灰黑色胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀或棕黑色沉淀水解水解水解水解【原原理理】参考值参考值粒细胞系统：各阶段均阴性粒细胞系统：各阶段均阴性单核细胞系统：原单阴性，余均阳性，但单核细胞系统：原单阴性，余均阳性，但被氟化钠抑制被氟化钠抑制淋巴细胞系统：淋巴细胞系统：B淋巴细胞均阴性，余可淋巴细胞均阴性，余可阳性阳性其他细胞：可阳性，不被氟化钠抑制其他细胞：可阳性，不被氟化钠抑制 5.5.临床意义：临床意义：1 1）鉴别急性白血病类型：）鉴别急性白血病类型：AM AMO OL L时，原始单核细

31、胞可呈阳性反时，原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和成熟单核细胞呈强阳性反应，但能被氟化钠应，幼单核细胞和成熟单核细胞呈强阳性反应，但能被氟化钠抑制抑制(抑制率在抑制率在50%50%以上以上)；AMLAML时，原始粒细胞一般呈阴性反应，时，原始粒细胞一般呈阴性反应，少数呈阳性反应，但不被氟化钠抑制或仅部分轻度抑制；少数呈阳性反应，但不被氟化钠抑制或仅部分轻度抑制；ALLALL时，时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应，T-ALLT-ALL原始淋巴细胞可原始淋巴细胞可呈阳性反应，但不被氟化钠抑制。呈阳性反应，但不被氟化钠抑制。2 2）鉴别急性单核细胞白血病和

32、组织细胞白血病：）鉴别急性单核细胞白血病和组织细胞白血病：异常组织细胞异常组织细胞可呈阳性反应，但此酶不能被氟化钠抑制；急单时，白血病细可呈阳性反应，但此酶不能被氟化钠抑制；急单时，白血病细胞的阳性反应可被氟化钠抑制。胞的阳性反应可被氟化钠抑制。六、铁六、铁 染染 色色 （ferric stainferric stainferric stainferric stain）正常人骨髓中的正常人骨髓中的正常人骨髓中的正常人骨髓中的贮存铁贮存铁贮存铁贮存铁存在的方式：存在的方式：存在的方式：存在的方式：v 骨髓小粒中的含骨髓小粒中的含骨髓小粒中的含骨髓小粒中的含FeFeFeFe血黄素血黄素血黄素血黄素

33、 骨髓单核骨髓单核骨髓单核骨髓单核-巨噬细胞内巨噬细胞内巨噬细胞内巨噬细胞内 （细胞外铁）（细胞外铁）（细胞外铁）（细胞外铁）v 铁蛋白铁蛋白铁蛋白铁蛋白 幼红细胞内幼红细胞内幼红细胞内幼红细胞内（细胞内铁）（细胞内铁）（细胞内铁）（细胞内铁）亚铁氰化钾亚铁氰化钾亚铁氰化钾亚铁氰化钾 亚铁氰化铁亚铁氰化铁亚铁氰化铁亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含蓝色沉淀在含蓝色沉淀在含蓝色沉淀在含FeFeFeFe部位部位部位部位)铁铁铁铁酸性环境酸性环境酸性环境酸性环境普鲁士蓝普鲁士蓝普鲁士蓝普鲁士蓝 反应反应反应反应原理原理 【结果判断结果判断】细胞外铁细胞外铁细胞外铁细胞外铁 低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒低倍镜观

34、察涂片尾部和骨髓小粒低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细细细细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团块状。块状。块状。块状。再用油镜判断阳性程度，根据铁量再用油镜判断阳性程度，根据铁量再用油镜判断阳性程度，根据铁量再用油镜判断阳性程度，根据铁量多少分五级多少分五级多少分五级多少分五级:（-）（+）（+）（+）（+）细胞内铁细胞内铁细胞内铁细

35、胞内铁 幼红细胞核染色为鲜红色幼红细胞核染色为鲜红色幼红细胞核染色为鲜红色幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。铁粒呈蓝绿色。铁粒呈蓝绿色。铁粒呈蓝绿色。油镜下计数油镜下计数油镜下计数油镜下计数100100100100个中幼红细胞和晚幼红细胞，个中幼红细胞和晚幼红细胞，个中幼红细胞和晚幼红细胞，个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染

36、色深浅和颗粒分布情况深浅和颗粒分布情况深浅和颗粒分布情况深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为将铁粒幼红细胞分为将铁粒幼红细胞分为将铁粒幼红细胞分为四型四型四型四型:型型型型(1-2)(1-2)(1-2)(1-2)型型型型(3-5)(3-5)(3-5)(3-5)型型型型(6-10)(6-10)(6-10)(6-10)型型型型(11(11(11(11以上以上以上以上)铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞 胞质中出现蓝色铁颗粒胞质中出现蓝色铁颗粒胞质中出现蓝色铁颗粒胞质中出现蓝色铁颗粒 的幼红细胞。的幼红细胞。的幼红细胞。的幼红细胞。环铁粒幼红细胞环铁粒幼红细胞环铁粒幼红细胞环铁粒幼红

37、细胞 幼红细胞胞质内蓝色铁幼红细胞胞质内蓝色铁幼红细胞胞质内蓝色铁幼红细胞胞质内蓝色铁 颗粒在颗粒在颗粒在颗粒在6 6 6 6颗颗颗颗以上，并围绕以上，并围绕以上，并围绕以上，并围绕 核周核周核周核周1/21/21/21/2以上以上以上以上者。者。者。者。铁粒红细胞铁粒红细胞铁粒红细胞铁粒红细胞 成熟红细胞出现蓝色铁颗成熟红细胞出现蓝色铁颗成熟红细胞出现蓝色铁颗成熟红细胞出现蓝色铁颗 粒。粒。粒。粒。1.1.1.1.细胞外铁细胞外铁细胞外铁细胞外铁 +，约，约，约，约2/32/32/32/3人为人为人为人为+，约，约，约，约1/31/31/31/3人为人为人为人为+。2.2.2.2.细胞内铁细

38、胞内铁细胞内铁细胞内铁 阳性率阳性率阳性率阳性率19%19%19%19%44%44%44%44%型为主，少数为型为主，少数为型为主，少数为型为主，少数为型（无环形铁粒幼红细胞型（无环形铁粒幼红细胞型（无环形铁粒幼红细胞型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）和铁粒红细胞）和铁粒红细胞）和铁粒红细胞）【参考值参考值】【临床意义临床意义】1.1.1.1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂细胞内、外铁明显减低甚至消失，经

39、铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。2.2.2.2.诊断铁粒幼细胞性贫血诊断铁粒幼细胞性贫血诊断铁粒幼细胞性贫血诊断铁粒幼细胞性贫血 铁铁铁铁粒粒粒粒幼幼幼幼红红红红细细细细胞胞胞胞、环环环环形形形形铁铁铁铁粒粒粒粒幼幼幼幼红红红红细细细细胞胞胞胞均均均均增多，细胞外铁也常明显增多。增多，细胞外铁也常明显增多。增多，细胞外铁也常明显增多。增多，细胞外铁也常明显增多。(与血红素合成有关的酶和辅酶缺乏或活性与血红素合成有关的酶和辅酶缺乏或活性与血红素合成有关的酶和辅酶缺乏或活性与

40、血红素合成有关的酶和辅酶缺乏或活性降低降低降低降低 铁利用障碍、血红素合成障碍、红细胞无铁利用障碍、血红素合成障碍、红细胞无铁利用障碍、血红素合成障碍、红细胞无铁利用障碍、血红素合成障碍、红细胞无效生成）效生成）效生成）效生成）3.3.3.3.骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（MDSMDSMDSMDS）伴伴伴伴环环环环形形形形铁铁铁铁粒粒粒粒幼幼幼幼红红红红细细细细胞胞胞胞增增增增多多多多的的的的难难难难治治治治性性性性贫贫贫贫血血血血（RARSRARSRARSRARS亚亚亚亚型型型型），其其其其环环环环形形形形铁铁铁铁粒粒粒粒幼幼幼幼红红红红细细

41、细细胞胞胞胞大大大大于于于于0.150.150.150.15。正常骨髓细胞各染色结果对比表正常骨髓细胞各染色结果对比表染色方法染色方法 红系红系 粒系粒系 单核系单核系 淋巴系淋巴系 巨核系巨核系 POX 阴性阴性 阳性阳性 弱阳性弱阳性 阴性阴性 阴性阴性 NAP 阴性阴性 阳性阳性 阴性阴性 阴性阴性 阴性阴性 PAS 阴性阴性 阳性阳性 阳性阳性 阴性阴性/阳性阳性 阳性阳性NAS-DCE 阴性阴性 阳性阳性 阴性阴性 阴性阴性 阴性阴性-NBE 可阳性可阳性 阴性阴性 阳性阳性 可阳性可阳性 可阳性可阳性POX:粒细胞，单核细胞粒细胞，单核细胞NAP:杆状核、分叶核杆状核、分叶核NAS-DCE：粒细胞，单核细胞：粒细胞，单核细胞-NBE ：单核细胞：单核细胞PAS:除红细胞系统外，均可除红细胞系统外，均可 常用的细胞化学种类和意义常用的细胞化学种类和意义 1 1掌掌握握常常用用细细胞胞化化学学染染色色方方法法的的结结果果判判断断和临床意义。和临床意义。2 2熟悉常用细胞化学染色方法的原理熟悉常用细胞化学染色方法的原理。本章目的要求本章目的要求