医学实验动物学.docx

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1、医学实验动物学王彦平主编2005-1-1吉林大学出版社出版医学实验动物学目录第一章 总论一、实验动物和实验用动物二、实验动物学的定义和范围三、实验动物的重要性四、实验动物的分类五、实验动物学的发展概况第二章实验动物遗传学和质量控制一、实验动物的遗传学分类二、近交系动物三、近交系的命名问题四、同源突变近交系五、同源导入近交系六、分离近交系七、重组近交系八、杂交F1代动物九、封闭群十、实验动物的遗传质量控制第三章常用实验动物及其管理一、小鼠一、大阻三、豚鼠四、家兔五、家犬六、家猫七、非人灵长类动物八、猪及小型猪九、其它实验动物和实验用动物第四章 医学科学研究中实验动物的选择和应用一、生命科学研究的

2、基本途径二、选择实验动物的基本原则第五章人类疾病的动物模型一、人类疾病动物模型的定义二、应用疾病动物模型的意义三、动物模型的评估四、人类疾病动物模型的分类五、设计动物模型的原则六、动物模型的复制方法第六章环境因素对实验动物和动物实验的影响第一章总则第一条 为了加强实验动物的管理工作，保证实验动物质量，适应科学研究、经济建设 和社会发展的需要，制定本条例。第二条 本条例所称实验动物，是指经人工饲育，对其携带的微生物实行控制，遗传背 景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。第三条 本条例适用于从事实验动物的研究、保种、饲育、供应、应用、管理和监督的 单位和个人。

3、第四条 实验动物的管理，应当遵循统一规划，合理分工，有利于促进实验动物科学研 究和应用的原则。第五条 国家科学技术委员会主管全国实验动物工作。省、自治区、直辖市科学技术委员会主管本地区的实验动物工作。国务院各有关部门负责管理本部门的实验动物工作。第六条 国家实行实验动物的质量监督和质量合格认证制度。具体办法由国家科学技术 委员会另行制定。第七条 实验动物遗传学、微生物学、营养学和饲育环境等方面的国家标准由国家技术 监督局制定。第二章 实验动物的饲育管理第八条从事实验动物饲育工作的单位，必须根据遗传学、微生物学、营养学和饲育环 境方面的标准，定期对实验动物进行质量监测。各项作业过程和监测数据应有

4、完整、准确的 记录，并建立统计报告制度。第九条 实验动物的饲育室、实验室应设在不同区域，并进行严格隔离。实验动物饲育室、实验室要有科学的管理制度和操作规程。第十条 实验动物的保种、饲育应采用国内或国外认可的品种、品系、并持有效的合格 证书。第十一条 实验动物必须按照不同来源，不同品种、品系和不同的实验目的，分开饲养。第十二条 实验动物分为四级：一级，普通动物；二级，清洁动物；三级，无特定病原 体动物；四级，无菌动物。对不同等级的实验动物，应当按照相应的微生物控制标准进行管理。第十三条 实验动物必须饲喂质量合格的全价饲料。霉烂、变质、虫蛀、污染的饲料, 不得用于饲喂实验动物。直接用作饲料的蔬菜、

5、水果等，要经过清洗消毒，并保持新鲜。第十四条 一级实验动物的饮水，应当符合城市生活饮水的卫生标准。二、三、四级实 验动物的饮水，应当符合城市生活饮水的卫生标准并经灭菌处理。第十五条 实验动物的垫料应当按照不同等级实验动物的需要，进行相应处理，达到清 洁、干燥、吸水、无毒、无虫、无感染源、无污染。第三章实验动物的检疫和传染病控制第十六条对引入的实验动物，必须进行隔离检疫。为补充种源或开发新品种而捕捉的野生动物，必须在当地进行隔离检疫，并取得动物检 疫部门出具的证明。野生动物运抵实验动物处所，需经再次检疫，方可进入实验动物饲育室。第十七条 对必须进行预防接种的实验动物，应当根据实验动物要求或者按照

6、家畜家 禽防疫条例的有关规定，进行预防接种，但用作生物制品原料的实验动物除外。第十八条 实验动物患病死亡的，应当及时查明原因，妥善处理，并记录在案。实验动物患有传染性疾病的，必须立即视情况分别予以销毁或者隔离治疗。对可能被传 染的实验动物，进行紧急预防接种，对饲育室内外可能被污染的区域采取严格消毒措施，并 报告上级实验动物管理部门和当地动物检疫、卫生防疫单位，采取紧急预防措施，防止疫病嗜肺性巴氏杆菌（Pacteurella pneumotropia）是啮齿类实验动物寄生菌，对健康小鼠一 般不致病，但是可使支原体或仙台病毒相起的肺炎复杂化。（二）症状兔的巴氏杆菌可表现为鼻炎（分泌浆液性或脓性鼻涕

7、），地方性流行性肺炎，中耳炎， 结膜炎，子宫炎，睾丸炎等，有的还会引起败血症致死。尸检可见该菌引起的化脓性或坏死性炎症。（三）诊断根据临床表现，结合病理，诊断应当不难。确诊要依靠细菌检查，包括涂片镜检接种血 琼脂平板或接种实验动物等。（四）防治建立无多杀巴氏杆菌病的种兔群是最有效的防范措施，同时也应注意改善实验动物的环 境条件，及时隔离、淘汰病兔。七、波氏杆菌病波氏杆菌病是由支气管腐败波氏杆菌（Bordetello hronchiseptica）引起的多种动物的以 支气管肺炎等呼吸道感染为主要特征的疾病。（一）病原该菌是Bordetella属的细菌，和百日咳菌同属，革兰阴性，无芽胞短杆菌。大小

8、为，有 鞭毛，对糖类无分解力，在石蕊牛乳中产碱，在西门枸檬酸钠培养基上发育良好，分解尿素, 产氨。大鼠、豚鼠、兔、狗、猫和猴等多种实验动物均可感染本病，也广泛发生于野生动物和 家畜。（二）症状本病大多发生在豚鼠，平时引起隐性呼吸道感染，当有应激因素如寒冷、氨浓度过高、 药物毒性等时，可以发病。急性死亡的病鼠可以无症状，亚急性病例，则有流水样或脓样鼻 涕，呼吸困难，厌食，被毛粗乱等。病理所见为呼吸道各期炎症状况。（三）诊断临床表现和病理均无特异性，难以确诊。确诊必须依赖细菌学检查，从气管下端和肺部分离出本菌是非常有意义的。（四）防治改善饲养环境，加强营养，定时清理卫生和消毒，以预防为主，接种疫苗

9、。阳性者进行 淘汰，消除隐患。八、支原体病（mycoplasma）支原体，又称菌形体，霉体，是一群介于病毒和细菌之间的多形微生物。它可引起实验 动物、家畜、家禽和人类一些疾病，特别是它与病毒、细菌合并存在时，使病情更加复杂, 故在实验动物管理中，应引起重视。（一）病原支原体属原生动物门软皮体纲（mollicutes）支原体目（mycoplasmatales）支原体科（mycoplasmataccac） 的支原体属（mycoplasma）。支原体高度多态，自直径100600um球状至长达150um的细长分支丝状。支原体没有 细胞壁，只在细胞质表面有一 3层的细胞膜，革兰染色阴性，最好用姬姆萨或端

10、特染色，因 支原体个体小，且细胞膜有弹性，故可通过300nm孔径的滤器。支原体可以在体外无细胞培养基上生长,但是对营养要求很高，在合适的琼脂培养基中, 可形成约直径的菌落，菌落为荷包蛋形。许多支原体属于非致病性微生物。例如猫、狗的呼吸道，即使在多病原感染时，支原体 也比正常动物多，但是单独不致病，故解释其致病性，要慎重。一些支原体确实可以致病，例如肺支原体（M. Pulmovis）,但一般不严重，如果有仙台 病毒或巴氏杆菌合并感染，病情则比单病原感染要严重得多。此外，嗜神经支原体可以引起 小鼠翻滚病，关节炎支原体可以引起大小鼠关节病，猪肺炎支原体引起猪的地方性肺炎，鸡 败血支原体是鸡的慢性呼吸

11、道感染的病原体。（二）症状不同的支原体，可引起不同的组织或器官患病，因此症状不一。肺支原体可致化脓性鼻炎、中耳炎和慢性肺炎等呼吸系统感染，引起精神萎靡、体重减 轻、呼吸困难等症状。嗜神经支原体可引起小鼠的翻滚病，头部振颤，身体翻滚，症状发作后，数小时内，小 鼠可死亡。泌尿系支原体感染可致不育。（三）病理呼吸道感染常见见化脓性炎症，但鼻腔可见合胞体细胞，肺部呈慢性支气管炎，但病变 部位界限分明，呈嫩肉状，甚至胰化。神经系统病变有时不显，较慢性者可见星状细胞发生海绵状性变。（四）诊断尽管有些症状可以提示有支原体感染的可能性，但是诸如呼吸道感染症状，并不特异, 应结合病理，并作病原体分离和血清学检测

12、，才能确诊。可用支原体培养基培养，培养阳性要结合临床，正确解释其致病作用。亦可用鸡胚绒毛 尿囊膜接种培养。培养阳性者，可进一步用特异血清作生长-抑制试验，而对其进行鉴定。血清抗体常用ELISA法检测，对于流行病学的研究，及对小鼠群感染状况正确估价是 很有帮助的。（五）防治支原体因无细胞壁，故青霉素对其无杀灭作用，四环素可以控制临床症状，但不能消除 感染。关键是消除传染源，发现感染小鼠，必须从SPF群淘汰，当剖腹取胎以便获得SPF动 物捍，要防止胎仔的子宫内感染。九、泰泽病（tyzzers disecise）本病是由毛发状芽胞杆菌（bacillvs piliformis）所引起的传染病，其病理特

13、征为肝脏多 发性灶状坏死和肠道出血坏死，许多实验动物（如大鼠、仓鼠、豚鼠、家兔）和家畜（如马、 犬、猪等）以及野生动物，均有发现。（一）病原毛发状芽胞杆菌是一种革兰阴性菌，长约1040um,宽约，菌体呈纤丝状、柔长、多 形态，能形成芽胞，有鞭毛，能活动。本菌仅能感染活的动物细胞和鸡胚卵黄囊，迄今还不 能在无活细胞的人工培养基上生长，在肝坏死灶周围，可发现大量本菌，呈丛状排列，细菌 细胞容易自溶，其芽胞对外界环境不良因素的抵抗力很强，污染饲料、垫料和饮水，成为播 散本病的根源。（-）病状本病常见于幼龄实验动物，特别是初离乳动物病死率很高。过分拥挤、高温、高湿、饲 料潮湿、免疫抑制等，都可诱发幼龄

14、动物患本病。症状：最急性型和急性型一般不表现任何症状，突然死亡；亚急性型生前可能发生严重 腹泻，每日数次，呈水样或粘液状，有时含有血液，肛周和后躯常被稀粪污染，故称湿尾病。血清学调查证明，在动物群里常存在亚临床感染。（三）病理剖检变化可分为肠型、肝型和混合型3种。肉眼观察：回肠、结肠可能无变化，有时发现肠粘膜发红、扩张，肠腔充满水样恶臭的 内容物，肝常有针尖大小、淡黄色或乳白色的坏死病变。组织病理学变化：回肠、盲肠和结肠前部都有病变，肠粘膜上皮细胞坏死，并有不同程 度脱落，粘膜下层水肿和嗜中性粒细胞浸润，呈急性出血性炎症。肝脏损害的特征为坏死，许多坏死灶沿着门静脉的分支分布。这种病变是由于肠道

15、的细 菌栓子，侵入门脉系统而进入肝脏的，肝坏死灶及其周围有嗜中性粒浸润，在肝坏死区周边 活肝细胞浆中，有很多成束的杆菌。（四）诊断家兔和大鼠还会发生心肌坏死，生前可以用血清学方法检查血清抗体，在流行病学调查 上有一定意义。1、细菌学检查 坏死灶边缘取材涂片或肠粘膜涂片，姬姆萨染液染色，在活的肝细胞 的胞浆中，或在肠道上皮细胞内可发现毛发状芽胞杆菌，革兰染色显阴性，细菌呈丛状，菌 体细胞细长似毛发状，即可诊断。2、可的松化小鼠或鸡胚卵黄囊接种可疑材料，能分离此菌。3、免疫荧胱抗体技术可测定出血清学阳性的无症状感染。（五）防治1、加强管理，搞好卫生防疫，保持环境的稳定，控制饲养密度，并注意饲料、垫

16、料、 饮水的管理和消毒。2、发病群投予四环素，可避免本病大流行，抗生素并不能将本菌消除，因此应考虑将 感染的小鼠群全部淘汰。3、繁殖群体最好来源于剖腹取胎和从未传染过本病的群体。十、绿脓杆菌感染（pseudomoniasrs）实验动物化脓性细菌的感染，可以不产生任何症状，但是在皮肤破损时，这类细菌常可 产生损害，而对免疫抑制性动物或裸鼠，可以造成严重的全身感染，甚至死亡。化脓菌常见 的有葡萄菌、链球菌和绿脓杆菌等，本节主要介绍绿脓杆菌。（一）病原绿脓杆菌为革兰阴性菌，不运动，能产生芽胞，而链球菌和葡萄球菌均为革兰阳性球菌。（二）症状皮肤破损造成的化脓，常有这类细菌。如脓液呈蓝绿色，常为绿脓杆菌

17、感染；出现蜂窝 组织炎等扩散性炎症，多为链球菌感染；而局限性、化脓性炎症则以葡萄球菌居多。绿脓杆菌感染裸鼠可产生结膜炎、出血性鼻炎、头部水肿和皮肤感染。而免疫抑制性小 鼠则可产生胃肠疡、全身性感染，上述小鼠如感染链球菌和葡萄球菌，也会发生全身播散性 感染。（三）诊断依据病史和感染的表现，可作出拟诊细菌学分离，革兰染色对葡萄球菌和链球菌的诊断 帮助很大，进一步诊断和分型，则需要进行细菌生化检测。（四）防治清洁卫生是预防的关键。屏障、隔离和微生物检测是预防绿脓杆菌进入种鼠的有效措施。饮用水的消毒、酸化或加含氯石灰（漂白粉）是预防绿脓杆菌进入种鼠群的有效措施。 饮用水的消毒、酸化或加含氯石灰（漂白粉

18、）是预防绿脓感染的有效措施之一。已经侵入鼠群的绿脓杆菌清除非常不易，因绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌等，对绝大多数 抗生素均耐药。引种时，一定要进行微生物检测，以防带菌鼠进入设施内。第五节 实验动物的寄生虫病实验动物寄生虫病很多，有体内寄生虫病，也有体外寄生虫病。但是不似病毒或细菌性 疾病那样迅速在短期内爆发流行，造成大批死亡，所以常不为人们所重视。但是，有的寄生 虫，一旦侵袭动物，很难去除，有的尚可造成人体疾病，故应引起注意。常见的体内寄生虫 病简述如下：一、球虫病 （coccidiosis）实验动物球虫病是美尔球虫寄生在肠道膜以及兔的胆管上皮细胞内引起的一类球虫病, 可引起腹和死亡。在兔和鸡是非

19、常重要的疾病，大鼠、小鼠和豚鼠等也可感染。（一）病原引起实验动物球虫病的为爱美尔球虫共宿主，主要是家兔、啮齿类、反刍动物、猪、 家禽等。而芽抱子球虫病常发生在肉食动物和鸟类。灵长类和马科动物，一般无球虫感染。寄生在鸡肠道上皮的球虫有7个种；寄生在兔肠和胆管上皮细胞内的爱美尔球虫有11 个种，随粪便排出的是球虫的配子生殖阶段形成的卵囊，大小约2040umX1625um 一端 扁平，具有卵膜孔。（二）球虫发育史兔因食被侵袭性卵囊污染的饲料和饮水而感染球虫病，卵囊进入肠道，抱子体游出并进 入肠道上皮，开始了它的体内无性生殖阶段，即由滋养发育成裂殖子，反复进行无性繁殖, 破坏细胞并感染另外的细胞，最后

20、有些裂殖子分化成雌雄配子母细胞，开始了有性生殖，即 由雌雄配子母细胞发育成的雌雄配子接合，形成合子，而后合子分泌一层囊壁形成卵囊，多 数卵囊即排出体外，在适宜的条件下（20） 2472h内可完成抱子生殖，形成有感染力的 胞子体。因此，球虫的发育分为动物体内和体外两个阶段，在体内完成无性生殖和有性生殖 阶段，在体外完成抱子生殖阶段。（三）症状超急性兔球虫病发病后迅速死亡，粪便中很难发现虫卵。急性兔球虫病有肠型、肝型和混合型，以混合型最常见。肠型：呈急性经过，感染后67天，出现严重腹泻，污染臀尾部，并发出洋葱样腐臭味。 幼兔在12天内死亡。通常很少出血，粪便中卵囊不多。肝型：感染后1周发病，初期食

21、欲不振、便泌、贫血、消瘦，后期腹泻，肝区压痛、胆 囊肿大，第四天粪便可查到卵囊，10天左右死亡。鸡球虫症状亦类似，个月龄小鸡感染后，数日发病，表现为贫血、消瘦、腹泻、粪便中 带血，死亡率很高。（四）病理肝脏肿大，表面可见米粒至豆大结节，结节镜检可见球虫，肠道有程度不等的炎症，肠 壁充血，粘膜卡他，结肠粘膜稍肥厚，且不透明。鸡主要是出血性胃肠炎。（五）诊断可采粪便用饱和盐水漂浮法收集卵事，或取肝结节，肠粘膜镜检，即可确诊。（六）防治1、成年兔和幼兔分开饲养，减少幼兔的感染机会。2、注意饲料饮水卫生，保持环境清洁，及时清除粪便。3、可用磺胺类药物如氯苯呱和抗生素等药物进行治疗。二、弓形体病（tox

22、oplasmosis）弓形体病又称毒浆原虫病，是由袭地弓形虫（toxo plasma gondii）所引起的人畜共患病， 其终末宿主为某些猫科动物。人、哺乳类动物及鸟类、爬行类、鱼、昆虫等均为中间宿主。 实验动物中的小鼠、豚鼠、兔、犬等均有患该病的报道。（一）病原弓形体属球虫目，在整个生活史中有5种不同的形态。在中间宿主体内有滋养体和包囊, 在终末宿主体内有繁殖体、配子体和卵囊。滋养体呈半月形（弓形），约47umX24um。一端尖，一端钝圆，姬姆萨染色可见核、 副核和胞浆。滋养体见于急性病例。包囊见于慢性或无症状病例。（二）发育史猫是终末宿主，猫吃了含卵囊或滋养体的肉时，子孑包子或滋养体穿过肠

23、壁，分布到全身, 在小肠绒毛顶端上皮内形成繁殖体，开始无性繁殖，产生裂殖。有些则变成雌雄配子体，结 合而成合子，再发育成卵囊，或吃了有滋养体的肉和乳后，可以发病。（三）症状弓形体病可为有症状的常见型，亦可是无症状的隐性感染。有症状者表现也很不一致, 主要是能在体内各处，包括肠道、眼、心、脑、肺、肌肉、肝、脾甚至胎盘等形成坏死和肉 芽肿性的炎症。症状因损害的部位不同而不同，动物一般能康复，血清内可产生抗体并产生 细胞免疫。胎盘感染可致早产、死胎或胎儿发育异常。眼部感染可致失明，人脑部感染，有时可导 致癫痫。猪的症状表现为高热、抑郁、食欲不振、便泌或腹泻、呼吸困难等；犬和猫的症状相似, 类似于犬瘟

24、热，急性病例有高烧、呼吸困难，经常见有肺炎等病变。全身淋巴结肿大，各脏器充血、出血、坏死灶及肉芽肿炎症，镜检可见弓形体。（五）诊断1、患病动物的组织及体液，镜检弓形体。2、动物接种3、血清抗体（六）防治1、注意饲料、饮水卫生，防止猪的排泄物感染。2、动物尸体不要喂猪。3、防鼠、灭鼠。三、线虫病线虫病是由线形动物门、线虫纲所属的各种寄生虫性线虫寄生于实验动物，包括鼠兔、 犬直至灵长类所引起一类疾病。其中许多是肠道寄生虫，但也有心丝虫、肺丝虫等。有的无 中间宿主,但是有的必须经中间宿主才能传染。故线虫病是一组寄生虫所引起的疾病的总称。（一）病原线虫外形呈圆柱状或纺缠状，虫体大小差别很大，1mm1m

25、者均有，主要有蛔目，杆 形目，旋尾目，毛首目等。（二）症状因线虫寄生的部位不同，数量不一，所表现的症状及其严重程度有极大的差别。一般来 说，少量线虫寄生，不会引起严重症状，但是大量的线虫寄生，则会引起一定的症状。消化道线虫，可以引起营养不良，肠炎甚至梗阻等症状，肺丝虫可引起支气管炎或为病 毒、细菌感染创造条件。心丝虫则可影响肺循环，诱发血栓等。（三）诊断1、粪便检查到虫卵，则消化道线虫可确诊。2、尸检中可发现肺丝虫、心丝虫等。3、变态反应，用抗原作皮内试验，观察皮肤反应，但应注意假阳性。（四）防治1、消灭传染源 定期检查、定期驱虫，以消灭传染源。小动物的线虫在清洁级动物是 不应有的，如发现，则

26、表明该群动物或是来源不好，或是因管理不善，造成污染。它的污染 是一种标志，是也污染了其他病毒、细菌的间接证据，故应将该种群换掉。2、注意卫生，执行隔离制度，切断传播途径。3、对许多线虫，可用药物治疗，如消化道线虫，可用口塞噗类药；乙胺嗪可治疗犬心丝 虫病；氯乙酰则可防治肺丝虫。四、体外寄生虫实验动物体外寄生虫，以螭、蚤和虱为主，这些寄生虫本身可引起实验动物健康的下降, 严重者甚或死亡。有些体外寄生虫也可传染给人，造成接触实验动物者的感染。另一方面, 这些寄生虫的出现与否，是实验动物清洁级别的标志，它的感染通常说明环境控制不严，故 也应引起高度重视。（一）螭病即疥癣，在实验动物饲养管理条件条件很

27、差的动物场，特别是兔场，常引起大批动物传 染而患病，尽管只是皮肤病，但也可引起死亡。小鼠的蛾病是由鼠肉螭、雷螭、鼠肉细蛾、简单生疥蛾等引起的；大鼠螭病是由大鼠蛾 引起的；豚鼠为疥蛾；狗为犬脂蛾；兔耳蛾病原体为兔痒蛾；兔疥蛾的病原体为背肛疥蛾; 兔皮螭的病原体为姬螯蛾；而猴的螭病是由简单生疥螭、疥蜻和脂螭等引起的。由不同病原体，感染不同的动物致使病变的部位不一样，但皮损大都是斑状、毛发变粗、 斑秃、红斑、局部皮肤瘙痒，长期摩损可引起表皮增生和非化脓性皮炎，造成很厚的皮损。1、诊断 在皮损与健康皮肤交界处，用小刀刮取病料，直到见血为止，将病变材料置 于载玻片上滴加5%10%硫磺凡士林软膏，氯苯飒，

28、或1： 25005000二氯苯酸菊酯乳剂稀 释液，一般疗效不错。（-）蚤、虱是吸食血液的寄生虫，而食毛虱则是以集食毛、羽、皮屑为主。主要发生在饲养条件很 差的饲养场，对宿主无严格寄生关系，但对某些疾病的传播是很重要的。清洁卫生即可切断这类传染病的传播途径，防止传染源混入动物房也是很重要的。第十章常用动物实验技术动物实验技术是实验动物科学的主要组成部分，是生命科学研究的主要手段之一。它包 括动物实验的设计，实验动物的选择、应用；实验设备的应用；试剂、样品的筛选、配制、 应用；实验后实验动物的饲养、观察、实验样品的采集、处理等多方面的知识。在生命科学 研究的各个学科都有其不同的应用，实验方法也是多

29、种多样的。但一些基本技术是许多学科 的实验都要应用的，我们称为常用动物实验技术，是动物实验工作者必须掌握的基本功。一、动物实验前应注意的问题动物实验前要做好充分的准备，选择好合格的实验场所，实验后动物的饲养场所等。动 物实验人员要取得动物实验人员岗位证书，熟练掌握动物实验技术。1、要在动物实验前一周领取动物，在实验饲养环境内饲养观察一周，以使动物适应饲 养环境。2、每天测量动物体温，并记录室内温、湿度等。3、实验前不要使动物感到异常。4、注意消毒，不要使动物离开等级饲养设施，尤其是使用独立送风笼具或层流柜进行 动物实验饲养时要严格按操作规程进行。5、实验中要做好记录，包括实验起始时间，环境条件

30、等。二、动物的购入领取或购入实验动物前要注意以下几个问题：1、领取动物前要按计划检查各项准备工具，如笼具数量、饮水瓶、饲养环境卫生、消 毒、饲料等。2、购入动物时要索取所购动物的质量合格证，包括合格证批号，动物的品种、品系、 年龄、体重等，并有签发人签字盖章。3、同时购入相应的饲料和垫料。4、运输时要注意防止途中污染和动物窒息死亡，注意保持温度、湿度。长期运输还要 给予足够的饮水和饲料。5、运输动物要用相应等级的笼器具，例如运输清洁级动物要用带有空气过滤膜的无菌 运输罐或带过滤帽的笼盒，并严格检查密封状况。三 实验动物的抓拿、保定、编号、分组和除毛（一）抓取和固定在动物实验中必须首先抓取并固定

31、动物，正确地抓取固定动物是为了不损害动物健康, 不影响观察指标，防止被动物咬伤，保证实验的顺利进行。同种动物往往有几种不同的固定 方法，有些单位还有自己的习惯的方法。但不管用什么方法，实验者必须了解动物的一般习 性。操作小心仔细，大胆敏捷，熟练准确，切不可粗暴，恐吓动物。本节介绍一些常用的方 法。1、小鼠的抓取固定：用右手拇指和食指捏住鼠尾根提起，放在鼠笼盖或其他较粗糙的 平面上，小鼠向前挣孔爬行，用左手拇指和食指迅速捏住其双耳和颈后部皮肤，使其不能动, 翻转左手，将小鼠置于左手掌心，再将鼠尾顺夹在左手无名指和小指之间，即将小鼠固定在 左手中。右手可进行注射等其他操作（图2）o也可使用专制的固

32、定器材，例如尾部采血可 将小鼠放入鼠筒内，将鼠尾露在筒外，手术、解剖时可固定在专制木板或蜡板上等。图2小鼠的抓取固定方法2、大鼠的抓取固定：大鼠的抓取固定基本与小鼠相同，但不可激怒大鼠，抓取耳颈后 部皮肤之前可用左手轻轻按抚头背部，然后迅速准确地捏住双耳间和颈后部皮肤，其余三指 捏住背部皮肤，将大鼠置于掌心中。也可用右手提起鼠尾将大鼠放在抓取者前胸使之向右腋 下钻爬，左手张开虎口，用食指、拇指握住鼠体，一边按抚鼠体，一边向前，用食指和中指 夹住左前肢，右前肢置于虎口，拇指向前抵住大鼠右下颌，使之不能回头，其余三指也握住 大鼠，使大鼠置于左手撑心。图3大鼠保定法之一也可用无纺布巾或无纺布三角袋包

33、起大鼠进行固定。图4无纺布方巾包裹大鼠固定为防止大鼠咬伤也可戴上帆布手套。3、豚鼠的抓取固定：豚鼠胆小易惊，抓取时要稳、准、迅速。豚鼠不会咬人，但要防 止被其抓伤。幼小的豚鼠可用两手捧起来。抓取育成的大豚鼠时选用手掌迅速扣住鼠背，抓 住其肩胛上方，以拇指、食指握住颈部，其余手指握持躯干，即可轻轻提起、固定。对于体 重大的豚鼠，要用另一只手托住臀部（图5）。图5豚鼠的抓取4、家兔的抓取固定家兔多数饲养在笼内，轻轻开启笼门，勿使受惊，一般是将一只手伸入笼内，抓住其颈 部皮毛，将兔提起，移向笼外，然后用另一手托其臀部，将兔托起。在移动兔时也是用同样 方法抱着运送。切不可抓提兔耳、腰部或四肢，以免造成

34、损伤。（图6）图6 家兔的抓取兔的固定方法常用的有手法固定、盒式固定和台式固定法。手法固定常用于灌胃给药, 人坐在椅子上用一只手抓住颈背部毛皮，另一只手抓住两后肢放入大腿之间用双腿夹住兔下 半身，空着手抓住两前肢固定之，抓颈背的手同时捏住两个耳朵，不让头部转动。盒式固定用于耳部采血和耳部血管注射，把兔放入盒或筒内，前方露出头部（图7）。图7兔的盒式固定台式固定适用于测血压、呼吸等实验或进行手术操作（图8）。图8 家兔的台式固定o让麻醉兔仰卧，用线绳依次将四肢系扎在固定器两侧，把头部放在金属制的首枷和嘴 环上固定。如果做头部手术，可用马蹄形固定器固定头部，固定时先剪去两侧眼眶下部的皮 毛，暴露颔

35、骨突起，调节固定器两端的尖头金属棒，使其正好嵌在突起下方的凹陷处，然后 在适当的高度固定金属棒（图9）。图9兔的马蹄形固定5、家犬的抓取固定经过驯服的家犬，例如Beagle犬,抓取是比较方便的。未经驯服的较凶恶的狗，要用 特制的钳式长柄狗夹挟住狗颈部，将狗按倒在地，系上脖套和铁链条。急性实验用犬可将狗 嘴绑住，再将其四肢固定好。在给狗进行静脉给药或采血等操作时可用架式悬吊固定法或用箱式固定法。箱式固定法类似家兔的盒式固定法，自制犬箱，将犬牵入，使犬不能回身，盖上箱盖前 端卡住狗颈，使犬头露在箱外（卡颈处的箱盖和箱前端合拢后应为圆形，仅容犬颈存在，犬 头不能缩回），犬即站立在犬箱内，犬箱的侧面可

36、为栅栏式，可伸手随意牵出犬腿。（二）编号和个体标记动物实验中，为了区别和观察每一个动物，必须对动物进行标记和编号，要根据动物的 种类、数量和实验时间的长短来选择合适的标记方法，标记方法要保证号码耐久、清楚、简 便、易认、适用。常用的方法有以下几种：5%苦味酸溶液（黄色），2%硝酸银溶液（咖啡色）和煤焦油溶液（黑色）。编号一般原则是“先左后右，从前到后”。一般把涂在左前腿基部（或根部）上的记为 1号，左侧腰部为2号，左后腿基部（或根部）为3号，头顶部为4号。腰背部为5号，尾 基部为6号，后前腿基部（或根部）为7号，右侧腰部为8号，右后基部（或根部）为9 号，不标记为10号。因此用单一颜色可标11

37、0号。若编号超过10或更大数字时，可用两 种不同颜色，把其中一种做为个数，另一种作为十位数。交互使用可编到99号。例如用红 色表示十位数，黄色表示个位数。将昆明小鼠左前腿涂为红色，左侧腰部涂为黄色，则表示 为第12号鼠（图10）o图10小鼠和大鼠标号图式染色法常用于实验同期短的实验，方法简单，动物无疼苦损害，但常因动物磨擦、舐毛, 尿、水浸、被毛脱落等而脱落，因此不适用长期的实验。2、挂牌法：用带号码的金属牌固定在动物的耳上或挂在脖颈上，常用铝牌，可以反复 使用不生锈，常用于家兔、豚鼠和猫、家犬、猴等动物。在兔耳上固定时要将号码牌的尖端 避开血管，穿过耳壳，在耳的内侧面将其折曲固定。3、耳缘剪

38、孔法：在动物的耳边缘剪出不同的缺口或打成不同的小孔进行标记的方法。 剪耳缘和打孔后要注意防止伤口感染，可用消毒滑石粉涂沫在打孔局部（图11）。图11耳缘剪孔标记法4、烙印法：烙印法是把编号烙压在动物身上，如狗可将号码烙在被毛上，其他动物（主 要为兔）可用刺数钳在耳上刺上号码，然后用棉签蘸溶在酒精中的染料（如黑墨）涂沫。5、形态特征标记法：可用于豚鼠、家犬等，根据动物形态颜色特征编号6、笼子编号：用笼号作为个体号，但千万注意不要把动物放错笼盒。（三）、分组进行动物实验，常常需要把选择的动物按需要分成若干组。1、分组的原则：按随机分配的原则，使每一只动物都有同等机会被分配到各个组，包 括各个实验组

39、和对照组。以避免各组之间的差别，保证实验结果准确，有利于统计检验。应 避免人为因素，要随机将动物编号；若分两组进行，可把双数做为一组，单数做为一组；若 分为多组时可用统计学的随机数字表进行完全随机化分组。每组动物的数量要根据实验周期的长短，实验的类型和统计学要求而定。慢性、周期长 的实验或实验中要定期处死动物检验的实验，使用的动物数量就多一些，以补充动物自然死 亡和人为处死丧失的数量，保证有合乎统计学要求的动物数量。2、建立对照组：一般动物实验都要设立对照组，常设的对照组有以下几种（1）、自身对照：用每个动物实验处理前和实验处理后的各项相关数据进行对照，就分 别是对照组和实验组的实验结果。用每

40、个实验动物自身对比，可排除个体间的差异。（2）、平行对照组：设两个对照组，正对照和负对照组；对实验组给以实验处理；对照 组也给予同样的实验处理手段，但处理时不给予实验所要的药物（或样品）；而负对照组则 不给任何处理。还有一些其他的设立对照组的方法，可根据实验的需要进行设置。（四）、被毛去除在实验中有些处理，例如手术等需要除去动物部分被毛，除毛的方法有剪毛、拔毛、剃 毛和脱毛等。1、剪毛法：用剪毛剪刀紧贴动物皮肤剪去被毛，动物要固定好，不可用手提起被毛， 以免剪伤皮肤。2、拔毛法：用拇、食指拔去被毛，常用于兔耳注射和鼠尾注射时。3、剃毛：常用剃刀剃去被毛，往往先将被毛剪短，然后刷以温肥皂水，再用

41、剃刀剃除, 常用于手术备皮。4、脱毛法：用化学药品脱去被毛。先将被毛剪短，然后用棉球蘸取脱毛剂，在欲脱毛 部位涂一薄层，2-3分后用温水洗去脱下的被毛，用纱布擦干。常用于犬等大动物的脱毛 剂配方为：硫化钠10g,生石灰15g,溶于100ml水中。用于兔、鼠等小动物脱毛剂为： 硫化钠3g,肥皂粉1g,淀粉7g,加适量水调成糊状。硫化钠8g,淀粉7g,糖4g,甘油 5g,硼沙1g,加水75ml。硫化钠8g溶于100ml水中。四实验动物的麻醉实验中为了减少动物痛苦和不适，保证动物安全，使动物服从操作，确保实验顺利进行, 常常需要对动物进行麻醉。因动物品种不同，实验的方法不同，麻醉的方法也不同。（一）

42、常用的麻醉药1、常用局部麻醉药一1%普鲁卡因（Procaine,又名奴佛卡因，Novocain）毒性小，见效快（注射后1一3min）, 作用时间短（3045min）,常用于局部浸润麻醉。（2）利多卡因（Lidocaine,又名赛罗卡因，Xylocainc）注身后见效快，作用时间稍长， 组织穿透）性好，用于大动物神经干阻止效果好，也用于局部浸润麻醉（0.25%0.5%）。 2%水溶液。2、全身麻醉药：见表15o表15常用实验动物全身麻醉药及其用法和剂量（方喜业，1995年）麻醉药名适用动物给药途径用药剂量 常配浓度 用药量麻醉维持时间(mg/kg)(mg/kg)(%)(ml/kg)狗、猫、兔 静

43、脉30腹腔4050戊巴比妥钠豚鼠腹腔4050氨基甲酸狗、猫、兔 腹腔，静脉 750-1000253424小时,主要适蛙类 皮下淋巴囊 2000mg/kg或400600mg/只 2023ml/只aw各种动物ix实验过程中一直要吸入麻醉药维持，毒性大实验过程中一直 乙雁各种动物 气管内插管吸入要吸入麻醉药维持1（二）麻醉前的准备和麻醉方法的选择1、麻醉前的准备（1）麻醉前禁食，一般在麻醉前12h禁食。（2）大动物如犬、猴、羊、猪等可给予一定量的安定剂和阿托品类药物，以减轻动物 的紧张和唾液分泌。（3）准备好麻醉器具和应急药品。2、麻醉方法的选择实验动物麻醉方法的选择要根据实验动物的种类、品系；实验

44、的方法、类型、时间的长 短；麻醉方法和麻醉药的特性，麻醉的设备、条件进行考虑，例如实验时间短可采用吸入性 麻醉或短效麻醉药；心脏、肺部手术实验，采用气管内插管控制呼吸的方法；犬、猴等适于 静脉麻醉，鼠类动物常用腹腔注射麻醉，也可以用联合麻醉的方法，例如先用乙醛吸入的方 法将大鼠麻醉，再腹腔注射麻醉药的方法。实验动物的麻醉研究已有一些医学麻醉工作者参与，较详细的论著可见邓小明等主编的 常用实验动物麻醉。列入参考书名录（三）、常用的麻醉方法1、全身麻醉：有注射麻醉、吸入麻醉、气管内插管麻醉。（1）注射麻醉：常用的药物有戊巴比妥钠、异戊巴比妥、硫喷妥钠、氯胺酮、氨基甲 乙酯等，根据实验进行选择，按要

45、求配成所需浓度和所需量，一般采用腹腔注射和静脉注射 等方法。为避免动物麻醉过深和过量死亡，常先给麻醉用总量的2/3,密切观察动物生命体 征的变化，如已达到所需麻醉程度，余下的麻醉药则可不用。（2）吸入麻醉：经呼吸道吸入麻醉药而麻醉，常用麻醉药有乙酸、氯仿等。常用于大、 小鼠等动物的麻醉，先将放有浸润乙醴的棉球的小烧杯放入麻醉盒（或缸）内，再将待麻动 物放入，盖盒盖，通过透明盒壁观察动物，动物先出现兴奋、挣扎，然后逐渐转为抑制，慢 慢倒下，呼吸由快变慢，四肢张力下降，角膜反射与痛觉消失即可取出动物进行实验。固定 好动物后，再把放乙醛棉球的烧杯放在动物鼻部，以维持麻醉时间与深度。乙酸是易燃、易 爆

46、气体，极易挥发，使用时注意避开火源，但麻醉性很强，安全范围广，麻醉深浅与维持时 间易于掌握。动物在停止吸入乙酸1分钟内可苏醒。（3）气管内插管麻醉：实验或手术时为了确保动物呼吸道通畅或进行人工呼吸，将一 特制的导管置入动物的气管内，建立一个人工通气道，通过这一导管进行麻醉的方法。常用 乙醒进行麻醉，优点是：任何动物实验（手术）体位都可保持呼吸道通畅；可防止异物进入 呼吸道，便于消除气管内的分泌物，便于进行人工呼吸和给氧，容易控制麻醉深度，便于对 动物重要的生理指标进行监测、调整和控制。不同动物的具体操作方法和注意事项请参阅常 蔓延。第四章实验动物的应用第十九条 应用实验动物就当根据不同的实验目

47、的，选用相应的合格实验动物。申报科 研课题和鉴定科研成果，应当把应用合格实验动物作为基本条件。应用不合格实验动物取得 的检定或者安全评价结果无效，所生产的制品不得使用。第二十条供应用的实验动物应当具备下列完整的资料：品种、品系及亚系的确切名称；遗传背景或其来源；微生物检测状况；合格证书；饲育单位负责人签名。无上述资料的实验动物不得应用。第二十一条 实验动物运输工作应当有专人负责。实验动物的装运工具应当安全、可靠。 不得将不同品种、品系或者不同等级的实验动物混合装运。第五章 实验动物的进口与出口管理第二十二条 从国外进口作为原种的实验动物，应附有饲育单位负责人签发的品系和亚 系名称以及遗传和微生物状况等资料。无上述资料的实验动物不得进口和应用。第十十三条 实验动物工作单位从国外进口实验动物原种，必须向国国家科学技术委员 会指定的保种、育种和质量监控单位登记。第二十四条 出口实验动物，必须报国家科学技术委员会审批。经批准后，方可输出口 手续。第二十五条 进口、出口实验动物的检疫工作，按照中华人民共和国进出口动植物检 疫条例的规定办理。第六章从呈实验动物工作的人员第二十六条实验动物工作单位应当根据需要，配备科技人员和经过专业培训的饲育人 员。各类人员都要遵守