08 平板菌落计数法.ppt

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1、实验八实验八 平板菌落计数法平板菌落计数法 一、目的要求一、目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。学习平板菌落计数的基本原理和方法。二、基本原理二、基本原理平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由

2、均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。即可换算出样品中的含菌数。三、器材三、器材酵母菌悬液，酵母菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏蛋白胨培养基，1mL无菌吸管无菌吸管无菌平皿无菌平皿盛有盛有9 mL无菌水的试管无菌水的试管四、操作步骤四、操作步骤1编号：编号：取无菌平皿取无菌平皿 8套，在皿底分别标记套，在皿底分别标记10-5、10-6、10-7、10-8各各2套。（不得开盖，）套。（不得开盖，）取取1只装有只装有99mL无菌水的三角瓶无菌水的三角瓶1只，标明只，标明10-2。另取另取6

3、支盛有支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次无菌水的试管，排列于试管架上，依次标记标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。2稀释稀释用用1ml无菌吸管精确地吸取无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入原菌悬液放入10-2的三的三角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自取一支吸管自10-2三角瓶中吸三角瓶中吸1m

4、L放入放入10-3试管中，吸吹试管中，吸吹三次，三次，其余依次类推。整个稀释过程如图。其余依次类推。整个稀释过程如图。3取样取样用用4支支1mL无菌吸管分别精确地吸取无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、10-8的稀释菌液的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿对号放入编好号的无菌培养皿中。中。4倒平板倒平板于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至后冷却至45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约1015mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于置于37温室中

5、培养。温室中培养。5计数计数培养培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度小时后，取出培养皿，算出同一稀释度两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：每毫升中总活菌数每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落同一稀释度两次重复的菌落平均数平均数稀释倍数稀释倍数四实验结果四实验结果n填表填表一般选择每个平板上长有一般选择每个平板上长有30300个菌落的稀释度计算每毫个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。升的菌数最为合适。同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不

6、能相差悬不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。殊，如相差较大，表示试验不精确。n操作录像实验安排实验安排培养基配制:3种,分实验台配制（每组（每组400mL400mL）第一台第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基:平板菌落计数法用.第二台第二台:高氏一号固体培养基高氏一号固体培养基高氏一号固体培养基高氏一号固体培养基:分离分离放线菌 第三台第三台:土豆蔗糖培养基土豆蔗糖培养基:分离霉菌分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只)斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只)稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只)相关材料.灭菌:轮流值守摆放斜面试管:土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离土壤稀释分离倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个.接种:平板菌落计数每人一只平板每人一只平板.土壤稀释分离土壤稀释分离:每人划划2个平板,放线菌和霉菌各一个.培养:细菌37;放线菌,霉菌28(分开放置)观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉菌接种3天后开始形态观察:一周后.