NY∕T 2899-2016 农业机械生产企业维修服务能力评价规范(农业).pdf

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1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 2898一2016饲料中串珠镰刀菌素的测定高效液相色谱法Determination of moniliformin in feeds-High performance liquid chromatography 2016-05-23发布2016-10-01实施中华人民共和国农业部发布目。吕本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会CSAC/TC76)归口。本标准起草单位:华中农业大学。本标准主要起草人:齐德生、张妮娅、高思、陈雷。NY/T 2898-

2、2016 I NY/T 2898-2016 范围饲料中串珠镰刀菌素的测定高效液相色谱法本标准规定了饲料中串珠镰刀菌素的高效液相色谱测定法。本标准适用于谷物及其加工副产品、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中串珠镰刀菌素的测定。本标准的方法检出限为0.003mg/怡，定量限为0.05mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理试样中的串

3、珠镰刀菌素经四丁基硫酸氢镀(TBAHS)水搭液提取、二氯甲;皖萃取和强阴离子交换固相萃取柱净化后，采用反相高效液相色谱-紫外检测器进行测定，并用外标法定量。4 试剂和材料除特别说明外，所有试剂均为分析纯和符合GB/T6682中规定的二级用水，标准榕液和流动相用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.1 甲醇:色谱级。4.2 乙睛:色谱级。4.3 囚丁基硫酸氢镀(TBAHS)。4.4 二氯甲皖。4.5 二水合磷酸二氢铀。4.6 氢氧化铀。4.7 提取液:称取5g囚丁基硫酸氢镀(4.3)，用水溶解并定容至1L，制成5g/L的四丁基硫酸氢镀溶液。4.8 试剂A:称取40g四丁基硫酸氢镀(4.3)

4、，用水溶解并定容至100mL,1!lU成400g/L的四丁基硫酸氢镀榕液。4.9 试剂B:称取17.16g二水合磷酸二氢铀(4.5)，用水溶解并定容至100mL，制成1.1 mol/L的磷酸二氢铀溶液。4.10 离子对改性剂:试剂A(4.8)和试剂B(4.9)按照体积比1:2混合均匀后即成离子对改性剂。4.11 乙腊-水溶液A:将乙腊(4.2)和水按照体积比1:1混合均匀备用。4.12 乙腊-水溶液也将乙睛(4.2)和水按照体积比8:92混合均匀备用。4.132mol/L氢氧化铀洛液:称取80g氢氧化铀(4.6)，用水溶解并定容至1L。1 NY/T 2898-2016 4.14 0.05mol

5、/L磷酸二氢铀榕液:称取7.8g二水合磷酸二氢铀(4.5)，用水洛解并定容至1L，pH为5.0，有效期为1个月。4.15 流动相:取10mL离子对改性剂(4.10)，用乙腊-水洛液B(4.12)稀释至1L，并用氢氧化纳榕液(4.13)调pH为6.5，经O.22m有机微孔滤膜过滤后备用。4.16 串珠镰刀菌素标准品:串珠镰刀菌素铀盐，纯度二三98%。4.17 串珠镰刀菌素标准储备液:取包装规格为5mg的串珠镰刀菌素标准品，用乙腊水洛液A(4.11)、溶解定容到50mL容量瓶中，配制成100g/mL的串珠镰刀菌素标准储备液，转入塑料瓶中200C密封保存，有效期为12个月。注:其他包装规格的串珠镰刀

6、菌素的串珠镰刀菌素标准4.18 串珠镰刀菌素标准铀恪液(4.14)稀释至刻5.0 mL、10.0mL、20.至刻度，配mL的标准工作液5 5.1 高效液相5.2 强阴离子5.3 氮吹仪。5.4 实验室6.F 时阳，哇哇F7 分析步骤7.1 提取A(4.11)配制成100g/rnL量瓶中，用磷酸二氢0.1 mL、1.0 mL、溶液(4.14)稀释mL和4.0g/国.-、O.的规定将取4叫到0.00眶|哥E恼E唰吨，次提取。首先，准确加入10.0mL提取液H4匾旋提用匾，2甩in，吸.陪液。再次，准确加入10.0 mL提取液(4.7)重复7.2 萃取与浓缩准确移取3.0mL(V2)血液(7.1节，

7、c-岳烧，轻柔摇匀3m叫，5000r/mm离心10min，吸出全部二氯甲皖层。再次加入5mL二氯甲烧并重复萃取一次。合并二氯甲:皖于玻璃管中，在400C下用氮气吹干。向干燥后的玻璃管中加入1mL流动相(4.1日，涡旋处理3min，制成浓缩液。注:萃取振摇过程中避免用力震荡，氮气吹干应在通风柜巾进行。7.3 固相革取柱净化用1mL甲醇和1mL流动相连续洗涤同相萃取柱，将浓缩液(7.2)全部转入罔相萃取柱中。待所有浓缩液过柱后，用1mL水清洗同相萃取柱并加压使空气过柱以排出所有清洗液。准确量取1.0 mL(V3)磷酸二氢铀溶液(4.14)洗脱同相萃取柱中吸附的串珠镰刀菌素，并加压使所有的洗脱液过柱

8、。用O.22m微孔滤膜过滤洗脱液，将滤液储于干净容器中，40C条件下密封保存备测。NY/T 2898-2016 7.4 高效液相色谱检测7.4.1 高效液相色谱参考条件a)色谱柱:C18反相色谱柱，长150mm，内径4.6mm，粒径5m;b)流动相流速:1mL/min;c)检测波长:228nm;d)柱温:350C;e)进样量:20L。7.4.2 定量测定分别取20L标工作液的浓度为横坐标面积用标准，曲范罔内，超出线性8 串珠镰刀C V1 V2 V3 rn 测值的15%。列色谱参考条件上机测定。以标准洗脱液中串珠镰刀菌素的峰素浓度应在标准曲线线性(1)3 NY/T 2898一2016附录A(资料性附录)串珠镰刀菌素参考色谱图O.1g/mL串珠镰刀菌素标准溶液高效液相色谱图，见罔A.l。mV m测器A:228nmnu 1 2.0 L 一溶剂中的杂质p、po、a./、一一一一J,，/If镰刀酷4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 mlO 2.5 2.0:1.5 1.0:0.5 O旷0.0 3.0 图A.l串珠镰刀菌素标准溶液(Q.1阅/mL)高效液相色谱图4