NY∕T 3279.2-2018 病毒微生物农药 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 第2部分：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒悬浮剂(农业).pdf

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1、ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3279.2一2018病毒微生物农药茵宿银纹夜峨核型多角体病毒第2部分:茵宿银纹夜峨核型多角体病毒悬浮剂Viral based insecticides-Autographa californica nucleopolyhedrovirus(AcNPV)-Part 2:Autographa californica nucleopolyhedrovirus suspension concentrate(SC)2018-07-27发布2018-12-01实施中华人民共和国农业农村部发布.a.&.目U吕NY/T 3279.2-

2、2018 NY/T 3279(病毒微生物农药盲宿银纹夜峨核型多角体病毒分为2个部分:-一第1部分:茵宿银纹夜峨核型多角体病毒母药;一一第2部分:茵宿银纹夜娥核型多角体病毒悬浮剂。本部分为NY/T3279的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位:农业农村部农药检定所、中国科学院动物研究所、河南省济源白云实业有限公司。本部分主要起草人:秦启联、王晓军、张寰、郭明程、王红托、程清泉、何静。I NY/T 3279.2-2018 病毒微生物农药茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒第2部分:茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒悬浮齐。范围本部分规定

3、了茵宿银纹夜峨志、标签、包装、储运、安全和本部分适用于以茵宿核型多角体病毒悬浮剂2 下列文件对件。凡是不注日GB/T 160 GB/T 16 GB/T 16 GB 3796 GB 4789.GB 6682 GB/T 81 GB/T 1 GB/T 161 GB 20813 GB/T 28137 GB/T 31737 3 术语和定义4 下列术语和定义适用3.1 茵蓓银纹夜蜡核型多角pension concentrate(SC)、产品的检验与验收以及标以茵稽银纹夜峨核型多角体病毒母药与适宜的载体及分散剂混合均匀的液体制剂。3.2 病毒包酒体polyhedral inclusion body(Pffi

4、)病毒水平传播的主要载体形式，其结构特征是病毒粒子包埋于蛋白质基质的多角体中。3.3 生测效价比potency ratio 根据药物的药理和对生物体的作用设计试验，比较样品、标准品引起的生物反应，测定药物效价或其生物学活性。3.4 1 NY/T 3279.2-2018 菌落形成单位colony fonning units(CFU)由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。指在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数目的单位。3.5 杂菌菌落总数number of microbial contaminants 将盲稽银纹夜峨核型多角体病毒悬浮

5、剂样品稀释后涂布在琼脂营养培养基上，所得到的微生物(真菌和细菌)菌落数之和。4 要求4.1 外观应是可流动、易测量体积的悬浮液体;存放过程中可能出现沉淀，摇匀应恢复原状，不应有结块。4.2 指标茵宿银纹夜峨核型多角体病毒悬浮剂还应符合表l的要求。表1茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒悬浮剂控制项目指标项目指标病毒包涵体数量，PIB/mL二三标刁可值生测效价比(标准品LCso/待测样品LCso)，%二注80.0杂菌菌落总数，CFU/mL1.0X107 pH 5.0-7.5 悬浮率，%三，80.0细度(通过75口标准筛)，%二主95.0倾倒性倾倒后残余物，%3.0 洗涤后残余物，%O.5 持久起泡量(1m

6、in后)，mL30.0 5 试验方法5.1 一般规定除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液，试验用水为GB/T6682中规定的三级水。5.2 抽样按照GB/T1605中液体制剂采样方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量应不少于200mL。5.3 毒种鉴别5.3.1 病毒毒种的分子鉴定首宿银纹夜峨核型多角体病毒毒种的鉴定，采用PCR扩增及DNA测序分子鉴定的方法。通过提取试样中病毒DNA作为模板，用AcNPV的ie-1基因、helicase基因和gp64基因的特异性引物分别进行PCR扩增反应，琼脂糖凝胶电泳检测。当PCR扩增片段大小约为1kb或300bp时，回收扩

7、增片段，并克隆到T载体上，用M13通用引物对克隆后的PCR产物进行测序，将测序结果分别与AcNPV(E2株的ie-1基因、helicase基因及g64基因进行比对分析，两者序列一致性均应该大于98%，即认定试样中含有茵宿银纹夜峨核型多角体病毒。茵稽银纹夜峨核型多角体病毒有效成分描述参见附录A。首稽银纹夜峨核型多角体病毒毒种的分子鉴定方法按照附录B的规定。5.3.2 病毒毒种的生物测定鉴别NY/T 3279.2-2018 生物测定的方法作为茵宿银纹夜峨核型多角体病毒毒种分子鉴定的补充。分别对粉纹夜峨、甜菜夜娥和家蚕3种昆虫幼虫进行生物测定。粉纹夜娥和甜菜夜峨感病症状:虫体体色粉白，体节膨大，行动

8、缓慢，甚至液化而亡，其感病特征非常明显。而家蚕的校正死亡率应小于20%，依此可以确定试样中的病毒为首稽银纹夜峨核型多角体病毒。病毒毒种生物测定鉴别的方法参见附录C。5.4 病毒包涵体的定量检测5.4.1 血球计数极法5.4.1.1 方法提要称取少量的病毒试样，上，在光学显微镜下计数。病毒的数量。倍数后，滴加在血球计数板计算出单位质量(体积)5.4.1.2 仪器、设备分析天平，精确光学显微镜。血球计数板。微量移液器5.4.1.3 5.4.1.3.1 母液。取个病毒包涵稀释后液的量5.4.1.3.2 显微镜下观察2数池各5个中计算式中:X一一茵稽银纹夜峨核型多角瘁喇咽田间gPIB每毫升(PIB/m

9、L);A 一-2个计数池各5个中方格中病毒包涵体总数的平均值，单位为PIB;B 样品稀释倍数，单位为毫升每毫升(mL/mL);4XI06一一l毫升母液含有计数小方格的个数，单位为个每毫升(个/mL);80 一一一计数小方格数，单位为个。5.4.1.5 允许误差病毒包涵体含量2次平行测定结果之差，应不大于20%，取其算术平均值作为测定结果。5.4.2 生测效价比的测定，制备。2个计.(1)病毒试样用蒸馆水制成待测的病毒悬浮液，均匀涂布在人工饲料上，晾干后饲喂甜菜夜峨幼虫，重复3次。试验过程中供试昆虫采取单头饲养方式，环境温度控制在(26土1)OC，湿度40%以上。统计第NY/T 3279.2-2

10、018 3d第7d幼虫的死亡情况，计算其校正死亡率。仪器设备、试剂材料、测定步骤等具体按照附录D的规定执行。5.5 杂菌菌落总数的测定按GB4789.2的规定执行。5.6 pH的测定接GB/T1601的规定执行。5.7 细度的测定按GB/T16150-1995中2.2的规定执行。5.8 倾倒性试验按GB/T31737的规定测定。5.9 悬浮率的测定称取1.00 g试样(精确至O.OOOlg，悬浮剂)。按GB/T14825的规定执行。按5.4规定的方法测定试样和剩余的1/10悬浮液中的首稽银纹夜峨核型多角体病毒量，计算其悬浮率。5.10 持久起泡量试验悬浮剂类产品，按GB/T28137的规定测定

11、。6 产晶的检验与验收应符合GB/T1604的规定。极限数值处理采用GB/T8170中的修约值比较法。7 标志、标签、包装、储运、安全和保质期7.1 标志、标签应符合GB3796和GB20813中的规定，注明低毒防曝晒防高温等标志。7.2 包装应符合GB3796和GB20813中的有关规定。7.3储运储运过程中应有遮避装置，严防日晒和潮湿。7.4 安全在使用说明书或包装标签上，除有相应的毒性标志外，还应有毒性说明、中毒症状、解毒方法和急救措施。7.5 保质期在规定储运条件下，茵宿银纹夜峨核型多角体病毒悬浮剂的质量保证期从生产日期算起为2年。2年保质期内，生测效价比和病毒包涵体数量不低于4.2中

12、的指标。4 附录A(资料性附录)茵蓓银纹夜蝶核型多角体病毒有效成分描述A.1 中文通用名称Autographa A.4.1 形态有病毒基因组观察，病毒多之间。A.4.2 A.4.3 本产品系通过自增、分离纯化而成。产虫有特效，而对其他生病毒包涵体经害虫取食叶、织，导致害虫染病后组织细胞液化昆虫病毒病，药效持久。A.6 有效成分主要存在形态盲宿银纹夜峨核型多角体病毒包涵体。A.7 生物活性杀虫。A.8 溶解性不溶于水，溶于弱碱。NYjT 3279.2-2018 15m 目昆，急剧吞噬消耗虫体组虫之间继续传播，形成流行性5 NY/T 3279.2-2018 A.9 稳定性在40C以下可以长期保存，

13、加工过程中处理温度不得高于600C，在弱碱溶液、1000C以上高温条件下极快丧失生物活性。见光易丧失生物活性。6 NY/T 3279.2-2018 附录B(规范性附录)茵宿银纹夜蜡核型多角体病毒毒种的分子鉴定方法B.1 方法提要通过提取试样中病毒DNA作为模板，用酋稽银纹夜峨核型多角体病毒CAcNPV)的ie-1基因、helicase基因和g64基因的特异性引物分别进行PCR扩增反应，琼脂糖凝胶电泳检测后，回收扩增片段并克隆到T载体上，用M13通用引物对克隆后的PCR产物进行测序，将测序结果分别与AcNPVCE2株)的ie-1基因、helicase基因和g64基因进行比对分析，两者的基因序列一

14、致性均应该大于98%。即认定试样中含有百宿银纹夜峨核型多角体病毒。B.2 试剂和溶液碱裂解液CpH10.8):NaCl O.1 mol/L,NazC03 0.1 mol/L,EDTA 0.005 mol/L。盐酸:0.1mol/L。氯仿。异戊醇。无水乙醇。TE缓冲液CpH8.0):Tris-HCl 10 mmol/L,EDTA 1 mmol/L。十二烧基硫酸铀CSDS)。蛋白酶K。反应缓冲液:10 X PCR Buffer。脱氧核糖核昔三磷酸CdNTP)。琼脂糖。卫E缓冲液C50X储存液):pH句8.5，242g ms、57.1mL冰醋酸、37.2g NazEDD 2HzO、加水至1L。Taq

15、酶。澳化乙链。灭菌双蒸水。T载体。抗生素。大肠杆菌感受态细胞。IPTG。X-gal。LB培养液。PCR引物:ie-1基因上游引物:TGCGGCAGCTTCAAACTT;ie-1基因下游引物:CATGCTGCCGTCCTCCTTC。helicase基因上游引物:CGGCGAGCAGCGAAAATG;helicase基因下游引物:GATCCCGATACCGTTGACCGACAC。gp64基因上游引物:CCCGCCCAAAGACAGAGTAATG;7 NY/T 3279.2一2018gj.而4基因下游引物:CACACGCGGTTTTGGTTG。B.3 仪器、设备B.4 分析天平:精确到0.0001g

16、。微量移液器。高速离心机:最高转速10000r/min。振荡器。恒温水浴。紫外分光光度计。PCR仪。电泳仪。水平电泳槽。凝胶成像系生化培恒温摇DN 离心量筒。容量培养试管B.4.1 取人蛋白酶K24:1，体积仿，10000r/mm;弃去上清液，下干燥;加人TEB.4.2 PCR扩增及检以提取试样病毒DNA喃1Ii.l.0ng芳酶时将在cN组1基因、helie基因和别基因片段。反应组分为:10倍反后凋且叫轧上游引物1L(10mol/L);下游引物lL(10mol/L);DNA模板1L;Taq苦6.3 l3想限蒸水补充总体积至50L。PCR反应条件:950C，5min预变性;然后进行30个循环:9

17、40C30 s,550C 30 s,720C 60 S;最后720C5 min延伸。用1%的琼脂糖凝胶电泳，澳化乙键溶液染色后，利用凝胶成像系统观察DNA条带。B.4.3 PCR产物的T载体克隆和测序首先，PCR产物与T载体按比例混合，加入连接酶混合反应后，转化至大肠杆菌感受态细胞中。然后，均匀地涂在含有与T载体相应的抗生素、IPTG、X一gal的琼脂平板上，370C培养箱中过夜后，挑出白色菌落，加入至5mL含有抗生素的液体LB培养基中。最后，370C恒温摇床中振荡培养过夜后，取菌液送测序公司，使用M13通用引物对其进行测序。B.4.4 序列比对ie-1基因、helicase基因和g64基因分

18、别扩增获得基因片段大小分别为1222bp、1126bp和3098 NY/T 3279.2-2018 bp。使用DNAMANC6.0)软件对所测到序列分别与AcNPVCE2株的ie-1基因、helicase基因及gp64基因进行比对分析。B.4.4.1 本实验中扩增的AcNPV的ie-7基因序列(1222 bp)TGCGGCAGCTTCAAACTTTTTGGCAAGCGTCAACTCGTTAACTGATAATGATTTAG TGGAATGTTTGCTCAAGACCACTGATAATCTCGAAGAAGCAGTTAGTTCTGCTTATTAT TCGGAATCCCTTGAGCAGCCTGTTGTG

19、GAGCA ACCATCGCCCAG TTCTGCTTATCAT GC GGAATCTTTTGAGCATTCTGCTGGTGTGAACCAACCATCGGCAACTGGAACTAAACGG AAGCTGGACGAATACTTGG ACAATTCACAAGGTGTGGTGGGCCAGTTTAACAA AATTA AATTGAGGCCTAAATACAAGAAAAGCACAATTCAAAGCTGTGCAACCCTTGAACAGA CAATTAATCACAACACGAACATTTGCACGGTCGCTTCAACTCAAGAAAT寸ACGCATTATTTTACTAATGATTTTGCGCCGTATTTA

20、ATGCGTTTCGACGACAACGACTACAATTCCAAC AGGTTCTCCGACCATATGTCCGAAACTGGTTATTACATGTTTGTGGTTAAAAAAAGTGA AGTGAAGCCGTTTGAAATTATATTTGCCAAGTACGTGAGCAATGTGGTTTACGAATATA CAAACAATTATTACATGGTAGATAATCGCGTGTTTGTGGTAACTTTTGATAAAATTAGGT TTATGATTTCGTACAATTTGGTTAAAGAAACCGGCATAGAAATTCCTCATTCTCAAGATG TGTGCAACGACGAGACGGCTGCAC

21、AAAATTGTAAAAAATGCCATTTCGTCGATGTGCA CCACACGTTTAAAGCTGCTCTGACTTCATATTTTAATTTAGATATGTATTACGCGCAAAC CACATTTGTGACTTTGTTACAATCGTTGGGCGAAAGAAAATGTGGGTTTCTTTTGAGCA AGTTGTACGAAATGTATCAAGATAAAAATTTATTTACTTTGCCTATTATGCTTAGTCGTAA AGAGAGTAATGAAATTGAGACTGCATCTAATAATTTCTTTGTATCGCCGTATGTGAGTCA AATATTAAAGTATTCGGAAAG

22、TGTGCAGTTTCCCGACAATCCCCCAAACAAATATGTGG TGGACAATTTAAATTTAATTGTTAACAAAAAAAGTACGCTCACGTACAAATACAGCAGC GTCGCTAATCTTTTGTTTAATAATTATAAATATCATGACAATA丁TGCGAGTAATAATAACGCAGAAAATTTAAAAAAGGTTAAGAAGGAGGACGGCAGCATG。B.4.4.2 本实验中扩增的AcNPV的helicase基因序列(1126 bp)CGGCGAGCAGCGAAAATGCAGACTACATTCAAACGCAAATCAATTTGGGGCTTAT

23、AGCAArCACGAGAACATGGTTAAAGTTTTGGCGACCCACGAACGAGCCAACGATCCA AACCTTCTACAACAATACTTTGAAAAAAGCAAATTTAAAAATTTTGATTTTTTAATCTAT GTACTGTGGAAGATATTGACCAAGAACGAAAATTTCTCGTACAGAGAAACCGACATCA AACTGTTTTTGGAACTTTTGTGTGAATCATTATTTGCCTGCGACAAAGAAGCTTTGAAT GAAGCTTTGAAGCGATGTGAGCCTTACAAAAAACAAGAGAAAATAGTGTTTAATAGGG CCT

24、GCAATCATTGGTTTGACTTTGACGATACCAAATTGTGCGTATCGTTGGGCTATTATT TTGGCATACACTACATGATATATTTGACTCAGTCGGCTAAAAACGAAATTTTGGATCACG ATGAATTGTGGGCGTACACGTACGAGAATGTGATGGCGCTAAACTTGCCGCCTGACAr GTGTGTAAAGGATTCTTTAGAAAATTGGAAAACGTAGTGACCGGAGTCAATTTGGTTTT CAACGGCAAACATTATCAAATTGTAAAGAAAGAGGATGACCTATTCAAATTGACCAAA AGC

25、AATTGTTACAAGTTGAGCAACATAAAATTTAAC 9 NY/T 3279.2-2018 B.4.4.3 本实验中扩增的AcNPV的gp64基因序列(309bp)CCCGCCCAAAGACAGAGTAATGTTTTTGGACACGGTTACCACCAGCGACGTGAGC AGCAAATACGAAGAATACATAAACTGCATTGTGAGCAACCGTACCGTTGAAAACGAGT GCATGTTTTTAGCCAACATGATGAACGTGCTCAACGACAAATTGGACGACGCAGCAGC TTTGGCCAAGATGCTGGAGCGAATAGTAAAACAAACG

26、CGAAAGAACAAACTCAACAT CTCCAACACGGTTATAGACGACGACACGCTGCTAACGGAAATGAAAAAATTAACACAA ACTTTATACAACCA B.4.5 结果判定试样与AcNPV(E2株飞f!hehcase四咽E-.tt序列一致性均大于98%，即可认定为相同病毒。10.NY/T 3279.2-2018 附录C(资料性附录)茵宿银纹夜峨核型多角体病毒毒种的生物测定鉴别C.1 试剂和材料标准品:茵稽银纹夜峨核型多角体病毒，2.OX10J2 PIB/g。试虫:粉纹夜峨CTricholusisni)，甜菜夜峨(5odoteraexigua)，使用人工饲料

27、饲养;家蚕(Bom-byx mori)使用桑叶饲养:连续饲养5代以上、生理状态一致的3龄初期幼虫。酵母粉。大豆粉，烤熟后磨碎过60目筛。大麦粉，过60目筛。番茄酱。玉米粉。维生素C。10%甲醒溶液。山梨酸。对是基苯甲酸甲醋。琼脂粉:凝胶强度大于300g/cm2。PBS缓冲液CO.01 mol/L,pH 7.的:称取NaC18.0 g、Na2HP04 1.44 g、KH2P040.24 g、KClO.2 g 榕于800mL蒸馆水，用1mmol/L盐酸调节溶液的pH至7.4，最后加蒸馆水定容至1L，于4.C保存。C.2 仪器、设备电动搅拌器:无级调速，100r/min6 000 r/min。分析天

28、平:精确到0.0001g。恒温培养箱。振荡器。微波炉。磨口 三角瓶:250mL具塞。养虫皿:90mm.养虫盒。小烧杯:50mL。大烧杯:500mL。微量移液器:1LlmL。C.3 测定步骤C.3.1 人工饲料的配制按照表C.1的人工饲料配方，将A组分放人锅中蒸15min，O组分加热煮沸直至琼脂完全溶化，待D组分冷却至70.C左右时加人B组分搅拌至完全溶解，再冷却至50.C时加人A组分搅拌均匀，最后加人C组分混合均匀，置55.C水浴锅中保温备用。11 NY/T 3279.2-2018 表C.l人工饲料的配方A组B组C组D组大豆粉75g 酵母粉30g 对短基苯甲酸甲醋2g蒸馆7)(700 mL 玉

29、米粉75g 山梨酸19琼脂14g 番茄酱198g 维生素C3g甲lIf1mLC.3.2 感染液的配制将标样摇匀后，准确吸取100min，取该悬浮液1mL，加体病毒包涵体浓度为2.缓冲液9.9mL，在振荡器上振荡l液(茵稽银纹夜峨核型多角C.3.4 6:8)h条件下饲养。白对照死亡率、，/-4 C，、12 NY/T 3279.2-2018 附录D(规范性附录)生测效价比(标准晶民。/待测样品LCso)的测定D.1 试剂和材料标准品:茵宿银纹夜峨核型多角体病毒(Autogra灿californicaNucleopolyhedrovirus),2.0 X 1012 PIB/mL。供试昆虫:甜菜夜峨(

30、Spodo户teraexigua)，使用人工饲料饲养，要求试虫为连续饲养5代以上、生理状态一致的3龄初期甜菜夜峨幼虫。酵母粉。大豆粉，烤熟后磨碎过60目筛。大麦粉，过60目筛。番茄酱。玉米粉。维生素C。10%甲醒溶液。山梨酸。对美圣基苯甲酸甲醋。琼脂粉:凝胶强度大于300g/cm2 0 PBS缓冲液(0.01mol/L,pH 7.4):称取NaC18.0 g、NazHP04 1.44 g、KHzP040.24 g、KClO.2 g 溶于800mL蒸馆水，用1mmol/L盐酸调节溶液的pH至7.4，最后加蒸馆水定容至1L，于40C保存。D.2 仪器、设备电动搅拌器:无级调速，100r旷/mi丑m

31、江lnl、.、斗分析天平:精确到0.0001g。恒温培养箱。振荡器。微波炉。磨口三角瓶:250mL具塞。养虫皿:90mm。养虫盒。小烧杯:50mL。大烧杯:500mL。微量移液器:1LlmL。D.3 测定步骤D.3.1 人工饲料的配制按照表D.1的人工饲料配方，将A组分放入锅中蒸15min，D组分加热煮沸直至琼脂完全溶化，待D组分冷却至700C左右时加入B组分搅拌至完全溶解，再冷却至500C时加人A组分搅拌均匀，最后加NY/T 3279.2-2018 人C组分混合均匀，置550C水浴锅中保温备用。表D.l人工饲料的配方A组B组C组D组大豆粉75g 酵母粉30g 对短基苯甲酸甲醋2g蒸馆水700

32、mL玉米粉75g 山梨酸1g 琼脂14g 番茄酱198g 维生素C3gL一一一甲隆1mLD.3.2 感染液的配制将标样摇匀后，准确吸取100L置于10mL离心管中，加PBS缓冲液9.9mL，在振荡器上振荡lmln，取该悬浮液1mL，加PBS缓冲液定容于100mL容量瓶中，制成标样母液(茵宿银纹夜峨核型多角体病毒包涵体浓度为2.0X 108 PIB/mL)。使用微量移液器吸取适量试样，如上法制成试样母液。将样品和标准品母液用水以一定的倍数等比稀释，每个样品和标准品至少各稀释5个浓度(最低1X 107 PIB/mL)，并设蒸馆水作对照。D.3.3 饲料和感染液的混合待凝固的人工饲料迅速倒人养虫盒，

33、凝固后倒入15mL待测药液，1min后倒出，晾干后接人试虫，每处理3次重复，每重复30头试虫。D.3.4 接虫感染将处理的试虫置于温度为(26士1)OC、湿度为40%以上、光周期为L:D=06:8)h条件下饲养。D.3.5 检查和统计分析判断死虫的标准是以细签轻轻触动虫体，无任何反应者判为死亡。计算标准品和样品各浓度的供试昆虫死亡率，计算死亡率及校正死亡率Wj。空白对照死亡率10%以下需要校正，大于10%则试验结果无效。校正死亡率按式(C.1)计算。将感染液各浓度换算成对数值，校正死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法分别求出标准品LCso值和待测样品LCso值。D.3.6 计算待测样品的生测效

34、价比(标准品LCso/待测样品LCso)Wz按式(D.1)计算。Wz=手X100.(D.1)式中:Wz 待测样品的生测效价比;Z 标准品LCso值;Y一一-待测样品LCso值。D.3.7 允许差2次平行测定结果之差，不得超过20%。14 ON|N.kmN的H如Z中华人民共和国农业行业标准病毒微生物农药茵蓓银纹夜峨核型多角体病毒第2部分:首蓓银纹夜峨核型多角体病毒悬浮荆NY/T 3279.2-2018 争导中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100125网址:)北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销母*印张1.25 字数25千字2018年11月北京第1次印刷*开本880rnrnX1230rnrn 1/16 2018年11月第1版书号16109 4638 定价30.00元长版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3279.2-2018