药理学实验的基本知识.ppt

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1、药理学实验概述 一、药理学实验课的目的n n在实验过程中使学生初步掌握药理学实验的基本操作技术n n验证和巩固药理学的基本理论。n n通过实验培养学生具有科学的思维方法和科学的工作态度。药理学实验的特点 n n药理学实验一般以活体为对象，包括其正常功能、整体的动物和离体的器官或组织均在具有活性的前提下用于实验。n n小心、规范地操作注意保护动物或标本于最佳活性状态。三、药理学实验课的要求n n实验前实验前n n仔细阅读本课程和有关课程的讲义，了解实验的目的、要求、步骤和操作程序。n n结合实验内容复习有关理论。n n（二）实验时（二）实验时（二）实验时（二）实验时n n保持实验室的整齐、清洁，

2、保持实验室安静，不保持实验室的整齐、清洁，保持实验室安静，不要高声谈笑，不得进行与实验无关的活动。要高声谈笑，不得进行与实验无关的活动。n n爱护公共财物爱护公共财物,各组仪器和器材由各组使用各组仪器和器材由各组使用 n n按照实验步骤，认真操作，注意保护实验动物和按照实验步骤，认真操作，注意保护实验动物和标本，节省实验器材和药品。标本，节省实验器材和药品。n n仔细、耐心地观察实验过程中出现的现象，真实仔细、耐心地观察实验过程中出现的现象，真实客观地记录实验结果客观地记录实验结果，并加上必要的文字注释，并加上必要的文字注释，有时还需要绘制图形或曲线进行分析。有时还需要绘制图形或曲线进行分析。

3、n n（三）实验后（三）实验后 n n将实验用具整理就绪，所用器械冲洗干净后，交还借用的器械。如果器械有损坏或短少，应立即报告负责教师。n n动物尸体、标本、纸片和废品应放到指定地点。n n搞好实验室的清洁卫生工作，离开实验室前应关灯，关窗，关水龙头。n n认真整理实验结果并撰写实验报告。实验报告的书写n n每次实验，均要求写出实验报告。实验报告应注意文字简练，通顺，书写清楚，整洁，正确使用标点符号。动物实验的基本操作技术动物实验的基本操作技术 n n实验动物是指人工饲养，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的动物。n n这些个体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和较好的重

4、复性。n n1 1青蛙与蟾蜍青蛙与蟾蜍n n2 2小白鼠小白鼠n n3 3大白鼠大白鼠n n4 4豚鼠：豚鼠：性情温顺，胆小怕惊吓，对组胺敏感。性情温顺，胆小怕惊吓，对组胺敏感。常用于免疫学研究和过敏性疾病模型常用于免疫学研究和过敏性疾病模型n n5 5家兔：家兔：耳大，血管清晰，便于静脉注射和取血。耳大，血管清晰，便于静脉注射和取血。眼大易观察，眼大易观察，常用于眼科研究常用于眼科研究。因其体温变化较。因其体温变化较敏感，也敏感，也常用于体温实验及热原检查。常用于体温实验及热原检查。n n6 6猫：猫：猫的血压比较稳定，较大鼠、家兔等小动猫的血压比较稳定，较大鼠、家兔等小动物更接近于人体，物

5、更接近于人体，且与人相似，故可用于循环药且与人相似，故可用于循环药理研究。理研究。n n7 7狗：狗：是医学实验中最常用的大动物是医学实验中最常用的大动物。血液、循。血液、循环、消化和神经系统均很发达、与人类较接近。环、消化和神经系统均很发达、与人类较接近。适用于药理学、毒理学和药物代谢、营养学和药适用于药理学、毒理学和药物代谢、营养学和药理学研究。理学研究。n n8 8、小型猪：毛发、皮肤厚薄，形态学和增殖动力、小型猪：毛发、皮肤厚薄，形态学和增殖动力学与人非常相似。学与人非常相似。理想的烧伤模型理想的烧伤模型n n9 9、猴：最相似的生物学和行为学特征、猴：最相似的生物学和行为学特征实验动

6、物的编号、捉拿与固定n n1染料标记法n n常用染料：n n红色染料：5中性红或品红液；n n黄色染料：3%5苦味酸溶液；n n咖啡色染料：2硝酸银溶液；n n黑色染料：煤焦油的酒精溶液。n n（2 2）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同化学药品涂染动物。化学药品涂染动物。n nA A、兔、猫、狗等动物的标记方法：用毛笔蘸取不同颜色、兔、猫、狗等动物的标记方法：用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂的染料溶液直接在动物背部涂写号码。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露写，则需在日光下暴露1 1分钟。分钟。n

7、nB B、大鼠、小鼠的标记：、大鼠、小鼠的标记：通常在动物不同部位涂上有色斑通常在动物不同部位涂上有色斑点来表示不同的号码。点来表示不同的号码。常规的涂染顺序是从左到右、从上常规的涂染顺序是从左到右、从上到下。左前肢为到下。左前肢为1 1号、左侧腹部号、左侧腹部2 2号、左后肢号、左后肢3 3号、头部号、头部4 4号、号、背部背部5 5号、尾根部号、尾根部6 6号、右前肢为号、右前肢为7 7、右侧腹部、右侧腹部8 8号、右后肢号、右后肢9 9号、不作染色标记为号、不作染色标记为1010号。号。n n在每组实验动物不超过在每组实验动物不超过1010只的情况下适用。只的情况下适用。n n双色涂染法

8、是采用两种颜色同时进行染色标记的双色涂染法是采用两种颜色同时进行染色标记的方法。方法。双色法色法可标记双色法色法可标记100100位以内的号码。位以内的号码。n n例如用苦味酸（黄色）染色标记作为个位数，用例如用苦味酸（黄色）染色标记作为个位数，用品红（红色）染色标记作为十位数。个位数的染品红（红色）染色标记作为十位数。个位数的染色标记方法同单色涂染法；十位数的染色标记方色标记方法同单色涂染法；十位数的染色标记方法参照单色涂染法，法参照单色涂染法，n n即即左前肢为左前肢为1010号、左侧腹部号、左侧腹部2020号、左后肢号、左后肢3030号、号、头部头部4 04 0号、背部号、背部5050号

9、、尾根部号、尾根部6060号、右前肢号、右前肢7070号、号、右侧腹部右侧腹部8080号、右后肢号、右后肢9090号，第号，第100100号不作染色标号不作染色标记。记。n n比如标记第比如标记第1212号实验动物，在其左前肢涂染品红号实验动物，在其左前肢涂染品红（红色），在其左侧腹部涂上苦味酸（黄色）即（红色），在其左侧腹部涂上苦味酸（黄色）即可。可。n n2穿耳打孔法：用专门的打孔器在动物耳朵的不同部位打孔或缺口来表示一定号码。此法是小鼠常用的标记方法之一。n n3挂牌编号法：常用于狗、猴、猫等大动物的编号。实验前将之固定于动物的颈圈或耳上 n n4人工针刺号码法：先将动物被毛去除，用针在

10、动物皮肤上刺出号码，再用酒精墨汁涂染即可动物的抓动物的抓取取n n小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。有经验者直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。大鼠的抓取固定方法大鼠的抓取斯基本同小鼠，只不过大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，否则会被咬伤手指，抓取时为避免咬伤，可带上帆布手套。动物的抓动物的抓

11、取取实验动物的给药方法实验动物的给药方法 n n经消化道给药经消化道给药1小鼠灌胃法灌胃法小鼠灌胃法灌胃法 1216号注射针头，尖端部磨钝，针头长45cm进针23cm后。灌药量一般为0.10.3ml/10g体重 n n大鼠灌胃法 n n长约68cm，直径约为1.2mm，n n一次灌胃量一般在1ml/100g体重。二、注射给药法n n小鼠皮下注射 n n通常在背部皮下注射。注射时以左手拇指和中指将小鼠颈背部皮肤轻轻提起，食指轻按其皮肤，使其形成一个三角形小窝，右手持注射器从三角窝下部刺入皮下，轻轻摆动针头，如易摆动时则表明针尖在皮下，此时可将药液注入，针头拔出后，以左手在针刺部位轻轻捏住皮肤片刻

12、，以防药液流出。n n药量一般为0.1ml0.3ml/10g体重。n n大鼠皮下注射 n n注射部位可在背部或后肢外侧皮下，操作时轻轻提起注射部位皮肤，将注射针头刺入皮下后推注药液。n n一次注射量不超过1ml/100g体重。2腹腔注射法腹腔注射法n n（1）小鼠腹腔注射 n n左手固定动物，使腹部向上，头呈低位。右手持注射器，在小鼠下腹部腹白线稍向左或右的位置，从下腹部朝头方向刺入皮肤，针头到达皮下后，沿皮下向前推进35mm，然后使注射器针头与皮肤呈45角刺入腹膜。针头刺入腹膜后感抵抗力消失，此时在保持针头不动的状态下回抽针栓，如无回血或尿液，则可推入药液。n n一次可注射量为0.10.2m

13、l/10g体重。n n大鼠、豚鼠、兔、猫等的腹腔注射皆可参照小鼠腹腔注射法。但应注意家兔与猫在腹白线两侧注射（应在离腹白线约1cm处进针）。n n3肌肉注射法 n n小鼠、大鼠、豚鼠肌肉注射 一般因肌肉少，不作肌肉注射，如需要时，可将动物固定后，一手拉直动物左或右侧后肢，将针头刺入后肢大腿外侧肌肉内，n n小鼠一侧药液注射少于0.4ml，针头选用57号。n n兔肌肉注射 可选两臂或股部。静脉注射法静脉注射法 n n小鼠大鼠一般采用尾静脉注射。小鼠大鼠一般采用尾静脉注射。n n注射前先将动物固定于注射前先将动物固定于固定器固定器内（可采用铁丝笼、内（可采用铁丝笼、金属筒或底部有小孔的玻璃筒），金

14、属筒或底部有小孔的玻璃筒），使其整个尾部使其整个尾部外露，外露，n n以右手食指轻弹尾尖部，必要时可用以右手食指轻弹尾尖部，必要时可用45455050的的温水浸泡尾部温水浸泡尾部1 12 2分钟或用分钟或用7575乙醇擦拭尾部，乙醇擦拭尾部，或者将小鼠先放在或者将小鼠先放在40504050左右的加热板上做运动，左右的加热板上做运动，使其全部血管扩张充血。使其全部血管扩张充血。n n以拇指与食指捏住尾根部两侧，无名指和小指夹以拇指与食指捏住尾根部两侧，无名指和小指夹持尾尖部，中指从下托起尾巴固定之。持尾尖部，中指从下托起尾巴固定之。n n选择一根最为充盈的血管，右手持选择一根最为充盈的血管，右手

15、持4 4号针头号针头使其与使其与尾部呈尾部呈3030度角刺入静脉度角刺入静脉，针头在静脉内平行推进，针头在静脉内平行推进少许，左手三指连针头和鼠尾一起捏住固定，以少许，左手三指连针头和鼠尾一起捏住固定，以防动物活动时针头脱出。防动物活动时针头脱出。回抽见血，且推动药液回抽见血，且推动药液无阻力、并可见沿静脉血管出现一条白线说明针无阻力、并可见沿静脉血管出现一条白线说明针头在血管内，可注药头在血管内，可注药n n。如遇到阻力较大，局部发白变硬时，说明针头。如遇到阻力较大，局部发白变硬时，说明针头不在静脉内，需拔出针头重新穿刺。注射完毕后不在静脉内，需拔出针头重新穿刺。注射完毕后拔出针头，轻按注射

16、部止血。拔出针头，轻按注射部止血。一般选择尾两侧静一般选择尾两侧静脉，针刺宜从尾尖端开始，渐向尾根部移动，以脉，针刺宜从尾尖端开始，渐向尾根部移动，以备反复应用备反复应用。n n一般一次注射量为一般一次注射量为0.050.050.2ml/10g0.2ml/10g体重。体重。n n家兔：家兔静脉注射一般采用耳缘静脉家兔：家兔静脉注射一般采用耳缘静脉。n n注射前先剪除其表面皮肤上的毛并用水湿润局部，注射前先剪除其表面皮肤上的毛并用水湿润局部，血管即显现出来。可先轻弹或用酒精棉球揉擦耳血管即显现出来。可先轻弹或用酒精棉球揉擦耳尖部并用左手食指和中指轻压耳根部，拇指小指尖部并用左手食指和中指轻压耳根

17、部，拇指小指夹住耳边缘部分，以左手无名指放在其下作垫，夹住耳边缘部分，以左手无名指放在其下作垫，待静脉显著充盈后，右手持带有待静脉显著充盈后，右手持带有6868号针头的注射号针头的注射器刺入静脉器刺入静脉（第一次进针点要尽可能靠远心端，（第一次进针点要尽可能靠远心端，以备反复应用），以备反复应用），顺着血管平行方向深入顺着血管平行方向深入1 1厘米后，厘米后，放松对耳根处血管的压迫，左手拇指和食指移至放松对耳根处血管的压迫，左手拇指和食指移至针头刺入部位，将针头与兔耳固定针头刺入部位，将针头与兔耳固定 针头刺入血管针头刺入血管后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局后再稍向前推进，轻轻推动针

18、栓，若无阻力和局部皮肤发白、隆起现象，即可进行药物注射，部皮肤发白、隆起现象，即可进行药物注射，实验动物的处死方法实验动物的处死方法 n n1.颈椎脱臼法：n n本法最常用于小鼠。用拇指和食指压住小鼠头的后部，另一手捏住小鼠尾巴，用力向后上方牵拉，使之颈椎脱臼，延脑与脊髓离断而死亡。处死大鼠也可用此法，但需较大力气。n n2.空气栓塞法：n n主要用于大动物的处死。用注射器将空气快速注入静脉或心脏，使动物发生静脉空气栓塞，特别是肺动脉栓塞而致死。n n兔一般选用耳缘静脉，狗由前肢或后肢皮下静脉注射。n n一般兔与猫可注入空气1020ml；狗需注入70150ml空气。n n3.心脏取血法：n n用粗针头一次针刺心脏大量抽取血液，可致动物死亡。此法常用于豚鼠、猴等 n n4.大量放血法：n n大鼠可采取摘除眼球，由眼眶动脉放血致死。断头、切开股动脉亦可使其大量失血而死。家兔可在麻醉情况下，由颈动脉放血，并轻轻挤压胸部，尽可能使之大量放血致死。n n此法对内脏器官无损伤，是采集病理切片标本和血液样本的一种较好办法。n n注射或吸入麻醉剂法等。n n蛙或蟾蜍类可断头，也可用探针经枕骨大孔破坏脑和脊髓处死。