血糖定量.ppt

《血糖定量.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血糖定量.ppt（9页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 血糖定量Folin-Wu法测定血糖浓度 空腹血糖的正常值是空腹血糖的正常值是3.896.11mmol/L 或或109mg以下。空以下。空腹血糖大于腹血糖大于7mmol/L。餐后。餐后2h血糖大于血糖大于11.1mmol/L或或 140mg以下。标准糖尿病的诊断依据是血糖和临床症状。以下。标准糖尿病的诊断依据是血糖和临床症状。1999年年WHO：静脉静脉(全血全血)毛细血管毛细血管 静脉静脉(血浆血浆)：(糖尿病糖尿病)空空 腹腹 6.1 6.1 7.0 或或126mg服糖后服糖后2h 10.0 11.1 11.1 或或200mg以上。以上。v一、实验目的一、实验目的 掌握Folin-Wu法测

2、定血糖含量的原理和方法v二、实验原理二、实验原理 无蛋白血滤液无蛋白血滤液中的葡萄糖与碱性硫酸铜溶液共热，中的葡萄糖与碱性硫酸铜溶液共热，Cu2+即被血滤液中的葡萄糖即被血滤液中的葡萄糖还原还原成成Cu+(Cu2O)，Cu2O又使钼又使钼酸试剂还原成低价的酸试剂还原成低价的兰色钼兰色钼化合物。血滤液的糖含量和产化合物。血滤液的糖含量和产生的生的Cu2O量成正比，量成正比，Cu2O的量与形成钼化合物的量成正的量与形成钼化合物的量成正比，可用比色法测定比，可用比色法测定。三、材料、仪器与试剂三、材料、仪器与试剂1.材料：材料：动物血液。全血为鸡血。动物血液。全血为鸡血。1只鸡，称只鸡，称1g草酸钠

3、草酸钠，边滴边拌匀。，边滴边拌匀。2.仪器：仪器：分光光度计、血糖管、奥氏吸管、水浴锅、表面皿、三角瓶、漏斗等。分光光度计、血糖管、奥氏吸管、水浴锅、表面皿、三角瓶、漏斗等。3.试剂：试剂：（1）标准葡萄糖溶液：）标准葡萄糖溶液：1%葡萄糖母液：称取葡萄糖母液：称取1.000g纯葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释至纯葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释至100ml；葡萄糖标准液：取葡萄糖标准液：取1.0ml母液置于母液置于100ml容量瓶，加蒸馏水至刻度容量瓶，加蒸馏水至刻度（2）碱性硫酸铜溶液）碱性硫酸铜溶液A液：无水碳酸钠液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠，酒石酸钠13g，碳酸氢钠，碳酸氢钠11g溶于蒸馏水后，稀释

4、至约溶于蒸馏水后，稀释至约700ml，待溶液清晰后再稀释至，待溶液清晰后再稀释至1000ml。B液：晶体硫酸铜液：晶体硫酸铜5g，溶于蒸馏水并稀释至，溶于蒸馏水并稀释至100ml，加浓硫酸数滴作保护剂。，加浓硫酸数滴作保护剂。临用时，取临用时，取A液液25ml，B液液5ml，混合后，再加，混合后，再加A液至液至50ml，摇匀。并冰箱内可保存。，摇匀。并冰箱内可保存。（3）酸性钼酸盐溶液：酸性钼酸盐溶液：称取钼酸钠称取钼酸钠600g，加少量蒸馏水溶解后倒入，加少量蒸馏水溶解后倒入2000ml容量瓶，定容，容量瓶，定容，摇匀，倒入一较大的试剂瓶中，加溴水摇匀，倒入一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml

5、，摇匀，静置数小时。取上，摇匀，静置数小时。取上清液清液500ml到到1000ml容量瓶，徐徐加入容量瓶，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀。再磷酸，边加边摇匀。再加加25%硫酸硫酸150ml，放在暗处至次日，用空气将剩余的溴赶去，然后加，放在暗处至次日，用空气将剩余的溴赶去，然后加99%醋酸醋酸75ml，加蒸馏水稀释至，加蒸馏水稀释至1000ml，贮存于棕色瓶中。，贮存于棕色瓶中。（4）10%钨酸钠溶液：钨酸钠溶液：钨酸钠钨酸钠10g溶于蒸馏水并稀释至溶于蒸馏水并稀释至100ml。（5）0.33mol/L硫酸溶液：硫酸溶液：于于53ml蒸馏水中加入蒸馏水中加入1ml浓硫酸。浓硫酸。（6

6、）抗凝剂：（草酸钠或草酸钾）抗凝剂：（草酸钠或草酸钾）四、实验操作流程v.无蛋白血滤液的制备：无蛋白血滤液的制备：注：用奥氏吸管吸全血较困难，可用普通的1ml移液管代替。全血全血（已加抗凝剂）（已加抗凝剂）1ml 50ml三角瓶三角瓶 H2O 7ml 血液变为红色透明血液变为红色透明 10%钨酸钠钨酸钠1ml 0.33mol/L H2SO4 1ml-充分沉淀充分沉淀-过滤过滤-滤滤（随加随摇，加完后充分摇匀）（随加随摇，加完后充分摇匀）（鲜红（鲜红暗棕红色）暗棕红色）液（清的无色滤液，不含蛋白质）液（清的无色滤液，不含蛋白质）摇匀摇匀摇匀摇匀摇匀摇匀摇匀摇匀.血糖测定血糖测定取3支血糖管编号，

7、然后在血糖管中按下表操作。血糖管号试剂1号（空白）2号（标准液）3号（样品）无蛋白滤液（ml）0 00 01.01.0蒸馏水（ml）2.02.01.01.01.01.0葡萄糖标准液（ml）0 01.01.00 0碱性酮试剂（ml）2.02.02.02.02.02.0三支血糖管分三支血糖管分别别混匀，沸浴混匀，沸浴8min8min，自来水冷却，自来水冷却3min3min（勿（勿摇摇），接着往下加，接着往下加试剂试剂。磷钼酸试剂（ml）3.03.03.03.03.03.0加磷钼酸试剂后，混匀，静置加磷钼酸试剂后，混匀，静置2min（使（使CO2自然逸出），然后各管用蒸自然逸出），然后各管用蒸馏水稀

8、释至刻度，即馏水稀释至刻度，即25ml，混匀后于，混匀后于430nm 处比色。处比色。.用分光光度计测定用分光光度计测定选好波长选好波长 空白管调空白管调100%T100%T，0%T0%T 标尺置于吸光度处标尺置于吸光度处 样品入光样品入光路路 读数读数记录测得的样品的光密度值记录测得的样品的光密度值ODOD1 1 ；标准液的；标准液的光密度值光密度值ODOD2 2 五、实验结果与分析五、实验结果与分析v计算血糖含量：计算血糖含量：100ml全血含血糖毫克数全血含血糖毫克数=C标准葡萄糖标准葡萄糖（0.1）OD待测待测/OD标准标准100/0.1 0.11ml血滤液相当于血滤液相当于0.1ml

9、全血全血v作业：作业：简要介绍本实验以外的两种糖测定方法。六、注意事项v 1.取血液时量要准确。由移液管放出血液的速度取血液时量要准确。由移液管放出血液的速度要慢，以尽量减少黏附在管壁上的血液，一般放出要慢，以尽量减少黏附在管壁上的血液，一般放出1ml血液所用的时间应不少于血液所用的时间应不少于1min。v 2.如果血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍混如果血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍混浊，可在钨酸与血混合液中加入浊，可在钨酸与血混合液中加入10%硫酸硫酸1-2滴，等滴，等变为暗棕红色后再滤。变为暗棕红色后再滤。(沉淀由鲜红变为暗棕红色，沉淀由鲜红变为暗棕红色，是因为钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时，是因为钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时，血红蛋白变性、沉淀。血红蛋白变性、沉淀。)v 3.过滤时盖上表面皿防水分蒸发。过滤时盖上表面皿防水分蒸发。