药物分析湖南大学第05章巴比妥类药物的分析.ppt

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1、第五章第五章 巴比妥类药物的分析巴比妥类药物的分析巴比妥类药物是一类临床常用的催眠镇静药。巴比妥类药物是一类临床常用的催眠镇静药。这这类类药药物物应应用用广广泛泛，容容易易因因不不合合理理使使用用而而引引起中毒。起中毒。需要对本类药物的原料、制剂进行分析。需要对本类药物的原料、制剂进行分析。有有时时也也需需要要对对生生物物样样品品中中微微量量巴巴比比妥妥类类药药物物进行分析。进行分析。第一节、化学结构与性质第一节、化学结构与性质第二节、鉴别试验第二节、鉴别试验第三节、特殊杂质检查第三节、特殊杂质检查第四节、含量测定第四节、含量测定 内内 容容目的和要求目的和要求1.1.掌握巴比妥类药物的化学结

2、构与分析方法间掌握巴比妥类药物的化学结构与分析方法间的关系；的关系；2.2.掌握巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥及硫代掌握巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥及硫代巴比妥类药物的鉴别巴比妥类药物的鉴别;3.3.巴比妥类药物的银量法与溴量法测定的原理巴比妥类药物的银量法与溴量法测定的原理与方法与方法;4.4.熟悉巴比妥类药物的紫外分光光度法熟悉巴比妥类药物的紫外分光光度法;5.5.了解苯巴比妥的特殊杂质及其检查。了解苯巴比妥的特殊杂质及其检查。第一节第一节 结构与性质结构与性质一、基本结构一、基本结构 巴比妥类药物的基本结构通式 1.1.环状母核部分环状母核部分:2.2.环环状状丙丙二二酰酰脲脲、1,3-1

3、,3-二二酰酰亚亚胺胺基基团团决决定定巴巴比比妥妥类类药药物物的的特特性。性。2.2.取代基部分取代基部分:区区 别别 各各 种种 巴巴 比比 妥妥 类药物。类药物。1.1.5,5-5,5-取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物 巴比妥（巴比妥（BarbitalBarbital）5CCCONONC OH5C2H5C2HH苯巴比妥（苯巴比妥（PhenobarbitalPhenobarbital）5司可巴比妥钠（司可巴比妥钠（SecobarbitalSecobarbital Sodium Sodium）5戊巴比妥（戊巴比妥（PentobarbitalPentobarbital）CCCONONC OH

4、5C2CH3(CH2)2CHHCH35异戊巴比妥（异戊巴比妥（AmobarbitalAmobarbital）CCCONONC OH5C2CHCH2CH2CH3CH3H5环己烯巴比妥环己烯巴比妥52.2.1,5,5-1,5,5-取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物51己琐巴比妥己琐巴比妥甲苯巴比妥甲苯巴比妥51CCNCNHOOOH5C2CH33.3.硫代巴比妥类药物硫代巴比妥类药物 硫喷妥钠硫喷妥钠HCCCONONCSNaH5C2CH3CH2CH2CHCH352一、主要性质一、主要性质 1.1.物理性质物理性质 白白色色结结晶晶或或结结晶晶性性粉粉末末，具具有有固固定定的的熔熔点；点；游游离离巴

5、巴比比妥妥类类药药物物微微溶溶或或极极微微溶溶于于水水，易溶于乙醇及有机溶剂；易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。2.2.化学性质化学性质弱酸性弱酸性巴巴比比妥妥类类药药物物分分子子结结构构中中都都有有1,3-1,3-二二酰酰亚亚胺胺基基团团，能能发发生生酮酮式式和和烯烯醇醇式式的的互互变变异异构构，在在水溶液中可以发生二级电离。水溶液中可以发生二级电离。本本类类药药物物的的水水溶溶液液显显弱弱酸酸性性（p pK Ka a为为7.37.38.48.4），可与强碱形成水溶性的盐类。），可与强碱形成水溶性的盐类。巴巴比比妥妥钠钠盐盐的的水水

6、溶溶液液呈呈碱碱性性，加加酸酸酸酸化化后后，析析出出结结晶晶性性的的游游离离巴巴比比妥妥类类药药物物，可可用用有有机机溶剂提取出来。溶剂提取出来。与强碱的成盐反应：与强碱的成盐反应：CONHCNCOOHR1R2C+NaOHCONHCNCOONaR1R2C+H2O水解反应水解反应 巴巴比比妥妥类类药药物物的的分分子子结结构构中中含含有有酰酰亚亚胺胺结结构构，与与碱碱液液共共沸沸即即水水解解，释释放放出出氨氨气气，可可使红色石蕊试纸变蓝。使红色石蕊试纸变蓝。CONHCNCOOHR1R2C+5 NaOHR1R2CHCOONa+2NH3 +2Na2CO3本本类类药药物物钠钠盐盐在在吸吸湿湿的的情情况况

7、下下也也能能水水解解，在在pH=10pH=10以以下下，水水解解较较慢慢，pH=11pH=11以以上上，酸酸水解速度加快。水解速度加快。H2OH2OCOONaR1R2CONHCONH2CR1R2CHCOONa+2NH3 +2Na2CO3CONHCNCOONaR1R2C与重金属离子反应重金属离子反应巴巴比比妥妥类类药药物物的的分分子子结结构构中中含含有有丙丙二二酰酰脲脲（-CONHCONHCO-CONHCONHCO-）或或酰酰亚亚胺胺基基团团，在在适适当当的的pHpH条条件件下下，可可与与某某些些重重金金属属离离子子反反应应呈呈色色或或产产生生有色沉淀。有色沉淀。a.与银盐的反应与银盐的反应5,

8、5-5,5-取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物+AgNO+AgNO3 3+Na+Na2 2COCO3 3可溶性一银盐可溶性一银盐AgNO3白色二银盐沉淀白色二银盐沉淀可用于本类药物的鉴别和含量测定可用于本类药物的鉴别和含量测定CONHCNCOONaR1R2C+AgNO3+Na2CO3+NaNO3+NaHCO3CONCNCOONaR1R2CAg+AgNO3CONCNCOONaR1R2CAg+NaNO3CONCNCOOR1R2CAgAgb.与铜盐的反应与铜盐的反应c.巴巴比比妥妥类类药药物物在在吡吡啶啶溶溶液液中中生生成成的的烯烯醇醇式式异异构构体体与与铜铜吡吡啶啶试试液液反反应应，形形成成稳稳

9、定定的的配配位位化化合合物，产生类似双缩脲的呈色反应。物，产生类似双缩脲的呈色反应。铜吡啶试液的配制铜吡啶试液的配制取取CuSOCuSO4 4 4g4g，加加水水90ml90ml使使溶溶解解后后，加加吡吡啶啶30ml30ml，生成硫酸二吡啶铜，即为铜吡啶试液。，生成硫酸二吡啶铜，即为铜吡啶试液。巴比妥类药物巴比妥类药物+铜吡啶试液铜吡啶试液紫堇色或紫色紫堇色或紫色吡啶吡啶硫喷妥钠硫喷妥钠+铜吡啶试液铜吡啶试液绿色绿色吡啶吡啶水水-吡啶吡啶CR1R2COCONHNHCOCR1R2COCONNHC OH部分离子化部分离子化CR1R2COCONNHCO-+H+有色配位化合物有色配位化合物c.与钴盐的

10、反应与钴盐的反应巴巴比比妥妥类类药药物物在在碱碱性性溶溶液液中中可可与与钴钴盐盐生生成成紫紫堇堇色色配配合合物物。可可用用于于本本类类药药物物的的鉴鉴别别和和含量测定。含量测定。本本反反应应在在无无水水条条件件下下比比较较灵灵敏敏，生生成成的的有有色产物较稳定。因此，所用试剂应不含水。色产物较稳定。因此，所用试剂应不含水。常用溶剂：无水甲醇或乙醇常用溶剂：无水甲醇或乙醇钴盐：醋酸钴、硝酸钴或氧化钴钴盐：醋酸钴、硝酸钴或氧化钴碱：有机碱（如异丙胺）为佳碱：有机碱（如异丙胺）为佳CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOC

11、ONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2+(CH3)2CHN+H32d.与汞盐的反应与汞盐的反应巴比妥类药物巴比妥类药物+汞盐（硝酸汞或氯化汞）汞盐（硝酸汞或氯化汞）白色白色（可溶于氨试液）（可溶于氨试液）+Hg(NO3)2CONCNCOOR1R2CHH-HNO3CONCNCOOR1R2CHgNO3HCONCNCOOHR1R2CHgNO3CONCNCOOHR1R2CHgNO3+2NH3+H2O+NH4NO3CONCNCOO NH4R1R2CHgNO3-+与香草醛反应香草醛反应CONCNCOOR1R2CHCONCNCOOR1R2CHOHOCH3CHCONCNCOOR1R2CHHOHOCH3OH

12、C+紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱特特征征和和其其电电离离程程度度有有关关，在在不不同同pHpH溶溶液液中中其其紫紫外外吸吸收收光光谱谱发发生生特特征征性性变变化化，可可用于本类药物的鉴别、检查和含量测定。用于本类药物的鉴别、检查和含量测定。a.a.5,5-5,5-取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物pH=2pH=2酸酸性性溶溶液液中中，不不电电离离，无无明明显显的的紫紫外吸收。外吸收。pH=10pH=10碱碱性性溶溶液液中中，发发生生一一级级电电离离，于于240 nm240 nm处有最大吸收。处有最大吸收。pH=13pH=13强强碱碱性性

13、溶溶液液中中，发发生生二二级级电电离离，最大吸收红移至最大吸收红移至255nm255nm处。处。巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱A.A.H H2 2SOSO4 4溶液溶液B.B.(0.05mol(0.05mol/L)/L)B.B.缓冲溶液缓冲溶液(pH=9.9)(pH=9.9)C.C.NaOHNaOH溶液溶液(0.1mol/L)(0.1mol/L)(pH=13)(pH=13)Anm未电离未电离一级电离一级电离二级电离二级电离硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl HCl 溶液溶液(0.1mol/L):(0.1mol/L):NaOH NaOH 溶液溶液(0.1mol/

14、L):(0.1mol/L):b.硫代巴比妥硫代巴比妥c.硫代巴比妥类药物在酸性或碱性溶液中，均有较明显的紫外吸收。特殊元素及取代基的反应特殊元素及取代基的反应I.不饱和烃取代基的反应不饱和烃取代基的反应a.与溴试液或碘试液的反应与溴试液或碘试液的反应b.司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色。色。b.b.与与KMnO4KMnO4的反应的反应可还原紫色的可还原紫色的KMnOKMnO4 4为棕色的为棕色的MnOMnO2 2。II.芳环取代基的反应芳环取代基的反应a.硝化反应硝化反应b.b.与与NaNONaNO2 2-H-H2 2SOSO4 4反应反应c.c.与甲醛与甲醛-H

15、-H2 2SOSO4 4反应反应III.与硫元素的反应与硫元素的反应第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、一、丙二酰脲类反应丙二酰脲类反应苯巴比妥苯巴比妥 ChP ChP（20052005）【鉴别】【鉴别】本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录）1.与银盐的反应与银盐的反应2.取取供供试试品品约约0.1g0.1g，加加碳碳酸酸钠钠试试液液1ml1ml与与水水10m110m1，振振摇摇2min2min，滤滤过过，滤滤液液中中逐逐滴滴加加入入硝硝酸酸银银试试液液，即即白白色色沉沉淀淀，振振摇摇，沉沉淀淀即即溶溶解解；继继续续滴滴加加过过量量的的硝硝酸银试液，沉淀不再溶解。酸银

16、试液，沉淀不再溶解。2.与铜盐的反应与铜盐的反应取取供供试试品品约约50mg50mg，加加吡吡啶啶溶溶液液（110110）5m15m1，溶溶解解后后，加加铜铜吡吡啶啶试试液液（硫硫酸酸铜铜4g4g，水水90ml90ml溶溶解解后后，加加吡啶吡啶30m130m1，即得），即得）1m11m1，即显紫色或生成紫色沉淀。，即显紫色或生成紫色沉淀。二、二、熔点测定及衍生物熔点测定熔点测定及衍生物熔点测定1.熔点测定熔点测定巴比妥类的钠盐酸巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物游离巴比妥类药物 过滤过滤 洗涤洗涤 干燥干燥 测熔点测熔点 苯巴比妥钠的鉴别苯巴比妥钠的鉴别 Ch.P Ch.P（20052005）

17、取取本本品品约约0.5g0.5g，加加水水5ml5ml溶溶解解后后，加加稍稍过过量量稀稀盐盐酸酸，即即析析出出白白色色结结晶晶性性沉沉淀淀，滤滤过过；沉沉淀淀用用水水洗洗净净，在在105105干干燥燥后后，依依法法测测定定，熔熔点点为为174-174-178178。2.衍生物熔点测定鉴别衍生物熔点测定鉴别丁巴比妥丁巴比妥取取丁丁巴巴比比妥妥0.5g0.5g，加加1mol/L1mol/L碳碳酸酸钠钠溶溶液液5ml5ml使使溶溶解解，加加4.54.5（W/VW/V）对对硝硝基基氯氯苄苄的的乙乙醇醇溶溶液液10m110m1，在在水水浴浴上上加加热热回回流流30min30min，放放置置1h1h后后，

18、滤滤过过，所所得得沉沉淀淀用用9696的的乙乙醇醇进进行行重重结结晶晶后后，在在100100105105干干燥燥，测测定定衍衍生生物物的熔点，应为的熔点，应为150150左右。左右。三、特殊取代基或元素的反应三、特殊取代基或元素的反应 1.不饱和烃取代基的反应不饱和烃取代基的反应含不饱和取代基的巴比妥类药物（如司可巴比妥）含不饱和取代基的巴比妥类药物（如司可巴比妥），分子中的不饱和键可与碘、溴或高锰酸钾作用，分子中的不饱和键可与碘、溴或高锰酸钾作用，使碘、溴或高锰酸钾褪色。使碘、溴或高锰酸钾褪色。与碘液的反应与碘液的反应+I2CONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3CONCN

19、COONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3II司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP ChP（20052005）【鉴别】【鉴别】取取本本品品0.1g0.1g，加加水水10ml10ml溶溶解解后后，加加碘碘试试液液2m12m1，所所显棕黄色在显棕黄色在5min5min内消失。内消失。与高锰酸钾的反应与高锰酸钾的反应+2KMnO4+4H2OCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C33+2MnO2 +2KOHCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3HO OH3（棕色沉淀）（棕色沉淀）2.利用芳环取代基的鉴别实验利用芳环取代基的鉴别实验硝化反应硝化反应CONCNCOO

20、NaH2CCHH3CCONCNCOONaH2CCHH3CO2NNO2+2KNO3+H2SO4+2H2O+K2SO4与硫酸与硫酸-亚硝酸反应亚硝酸反应本本法法对对巴巴比比妥妥不不显显色色，可可用用于于苯苯巴巴比比妥妥与与巴比妥等不含芳环取代基的本类药物的区别。巴比妥等不含芳环取代基的本类药物的区别。苯巴比妥苯巴比妥 ChP ChP（20052005）【鉴鉴别别】取取本本品品约约10mg10mg，加加硫硫酸酸2 2滴滴与与亚亚硝硝酸酸钠钠约约5mg5mg，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。与硫酸与硫酸-甲醛反应甲醛反应苯巴比妥与硫酸苯巴比妥与硫酸-甲醛反应，生成玫瑰

21、红产物。甲醛反应，生成玫瑰红产物。巴比妥和其他无芳环取代的巴比妥类药物无巴比妥和其他无芳环取代的巴比妥类药物无此反应，可供区别。此反应，可供区别。苯巴比妥苯巴比妥 ChP ChP（20052005）【鉴鉴别别】取取本本品品约约50mg50mg，置置试试管管中中，加加甲甲醛醛试试液液1ml1ml，加加热热煮煮沸沸，冷冷却却，沿沿管管壁壁缓缓缓缓加加硫硫酸酸0.5ml0.5ml，使使成成两两液液层层，置置水水浴浴中中加加热热，界面显玫瑰红色。界面显玫瑰红色。3.硫元素的反应硫元素的反应4.4.硫代巴比妥类分子中的硫元素可在硫代巴比妥类分子中的硫元素可在NaOHNaOH溶溶液中与铅离子反应生成白色沉

22、淀，加热后，转变液中与铅离子反应生成白色沉淀，加热后，转变为黑色的硫化铅。可用于硫代巴比妥类与巴比妥为黑色的硫化铅。可用于硫代巴比妥类与巴比妥类的区别。类的区别。CONCNCOSNaH2CCHH3CCHCH3H7C3+Pb2+PbSCONCNCOSH2CCHH3CCHCH3H7C32Pb 注射用硫喷妥钠注射用硫喷妥钠 ChP ChP（20052005）【鉴别】【鉴别】取本品约取本品约0.2g0.2g，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液5ml5ml与醋酸与醋酸铅试液铅试液2ml2ml，生成白色沉淀；加热后，沉淀，生成白色沉淀；加热后，沉淀变为黑色。变为黑色。四、四、红外光谱法红外光谱法中中国国药药典

23、典收收载载的的巴巴比比妥妥类类药药物物，几几乎乎都采用红外光谱作为鉴别方法。都采用红外光谱作为鉴别方法。司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP ChP（20052005）【鉴鉴别别】本本品品的的红红外外光光吸吸收收图图谱谱与与对对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集137137图）一致。图）一致。五、五、显微结晶鉴别显微结晶鉴别特色鉴别反应特色鉴别反应1.药物本身的晶形药物本身的晶形巴比妥：长方形巴比妥：长方形苯巴比妥：球形苯巴比妥：球形花瓣状花瓣状2.反应产物的晶形反应产物的晶形巴比妥巴比妥 铜吡啶试液铜吡啶试液 十字形紫色结晶十字形紫色结晶苯巴比妥苯巴比妥 铜吡啶试液铜吡啶试液 细小不规则或似细小不

24、规则或似 菱形浅紫色结晶菱形浅紫色结晶第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、苯一、苯巴比妥的特殊杂质检查巴比妥的特殊杂质检查苯巴比妥的合成工艺：苯巴比妥的合成工艺：CH2CONH2CH2COOC2H5水解，酯化水解，酯化C2H5OH，H2SO4O=COC2H5OC2H5C=CONaCOOC2H5COOC2H5缩合缩合C2H5ONa（）酸化，消除酸化，消除HClCHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2H5COOC2H5H5C2乙基取代乙基取代C2H5BrO=CNH2NH2环合环合CH3ONa，NNOOH5C2ONaH酸析酸析HClNNOOH5C2OHH（）苯巴比妥中的特殊杂质主要是中间体

25、苯巴比妥中的特殊杂质主要是中间体和和，以及，以及副反应产物，副反应产物，常通过检查酸度、乙醇溶液的澄清度及中性或碱性常通过检查酸度、乙醇溶液的澄清度及中性或碱性物质来加以控制。物质来加以控制。1.酸度检查酸度检查主主要要用用于于控控制制中中间间体体 乙乙基基化化反反应应不不完完全全时时，与与尿尿素素缩缩合合产产生生酸酸性性比比苯苯巴巴比比妥妥强强的的副副产产物物苯苯基基丙二酰脲，能使甲基橙指示剂显红色。丙二酰脲，能使甲基橙指示剂显红色。在在一一定定量量苯苯巴巴比比妥妥供供试试品品水水溶溶液液中中，加加入入甲甲基基橙橙指示剂不得显红色，控制酸性杂质的量指示剂不得显红色，控制酸性杂质的量2.乙醇溶

26、液的澄清度乙醇溶液的澄清度原理：原理：主主要要利利用用酸酸性性杂杂质质在在乙乙醇醇溶溶液液中中溶溶解解度度小小来来严严格格控制苯巴比妥中酸性杂质的量。控制苯巴比妥中酸性杂质的量。方法：方法：取取供供试试品品1.0g，加加乙乙醇醇5ml加加热热回回流流3min，溶溶液液应澄清。应澄清。3.中性或碱性杂质的检查中性或碱性杂质的检查原理：原理：该该类类杂杂质质主主要要是是中中间间体体的的副副产产物物（2-2-苯苯基基丁丁酰酰胺胺，2-2-苯苯基基丁丁酰酰脲脲），不不溶溶于于NaOHNaOH试试液液但但溶溶于于乙乙醚；苯巴比妥具有酸性，溶于醚；苯巴比妥具有酸性，溶于NaOHNaOH试液。试液。方法：方

27、法：取取供供试试品品1.0g1.0g，加加NaOHNaOH试试液液10ml10ml，加加水水5ml5ml与与乙乙醚醚25ml25ml，振振摇摇1min1min，分分取取乙乙醚醚层层，经经干干燥燥滤滤纸纸滤滤过过，滤滤液液置置于于蒸蒸发发皿皿中中蒸蒸干干，遗遗留留残残渣渣不不得得超超过过3mg3mg。二、司可二、司可巴比妥的特殊杂质检查巴比妥的特殊杂质检查司可巴比妥的合成工艺：司可巴比妥的合成工艺：COOC2H5COOC2H5CH2COOC2H5COOC2H5CCH3CH2CH2CHCH3H缩合缩合CH3CH2CH2CHCH3Br环合环合H2NCONH2，C2H5ONaNNOOONaHCH3CH

28、2CH2CHCH3HNNOOOHCH3CH2CH2CHCH3HHH H+NNOOONaHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2CH3CHBrCH2Br，NaOH丙烯化丙烯化NaOH，C2H5ONa，CH3COCH3成盐成盐NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2H1.溶液的澄清度溶液的澄清度原理：原理：司司可可巴巴比比妥妥极极易易溶溶于于水水，水水溶溶液液应应澄澄清清，否否则则表表明含有水不溶性杂质。明含有水不溶性杂质。司司可可巴巴比比妥妥水水溶溶液液易易和和COCO2 2作作用用析析出出司司可可巴巴比比妥妥，故水应先煮沸除去故水应先煮沸除去COCO2 2。方法：方法

29、：取取供供试试品品1.0g，加加新新沸沸过过的的冷冷水水10ml溶溶解解，溶溶液液应澄清。应澄清。2.中性或碱性杂质的检查中性或碱性杂质的检查原理：原理：该该类类杂杂质质主主要要是是合合成成过过程程中中的的副副产产物物（酰酰脲脲、酰酰胺类物质），不溶于胺类物质），不溶于NaOHNaOH试液但溶于乙醚；试液但溶于乙醚；方法：方法：检查方法检查方法同苯巴比妥。同苯巴比妥。第四节第四节 含量测定含量测定巴巴比比妥妥类类药药物物的的含含量量测测定定方方法法：银银量量法法、溴溴量量法法、紫紫外外分分光光光光度度法法、酸酸碱碱滴滴定定法法、提提取取重重量量法法、HPLCHPLC法、法、GCGC法及电泳法。

30、法及电泳法。一、一、银量法银量法1.原理：原理：巴比妥类药物巴比妥类药物可溶性一银盐可溶性一银盐AgNOAgNO3 3白色二银盐沉淀白色二银盐沉淀AgNOAgNO3 3可溶性一银盐可溶性一银盐（指示滴定终点）（指示滴定终点）2.注意事项：注意事项：本本法法受受温温度度影影响响较较大大，在在接接近近终终点点是是反反应应较较慢慢，难以准确观察滴定终点。难以准确观察滴定终点。二银盐具有一定的溶解度，测定结果偏高。二银盐具有一定的溶解度，测定结果偏高。中中国国药药典典采采用用甲甲醇醇及及3%3%无无水水碳碳酸酸钠钠溶溶液液溶溶剂系统，银剂系统，银-玻璃电极系统电位法指示终点。玻璃电极系统电位法指示终点

31、。无无水水碳碳酸酸钠钠溶溶液液需需临临时时新新配配制制（久久置置可可吸吸收收CO2）。）。银电极需用硝酸浸洗，然后用水淋洗。银电极需用硝酸浸洗，然后用水淋洗。一、一、溴量法溴量法1.原理：原理：凡凡取取代代基基中中含含有有双双键键的的巴巴比比妥妥类类药药物物（如如司司可可巴比妥钠），可与溴定量地发生加成反应。巴比妥钠），可与溴定量地发生加成反应。NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CH2CH2H+Br2NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2CHCH2HBr BrBr2（过量）（过量）+2KI2KBr+I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O62.2.溴滴定液（溴滴定

32、液（0.1mol/L0.1mol/L）的配制：）的配制：3.取溴酸钾取溴酸钾3.0g3.0g与溴化钾与溴化钾15g15g，加水适量使，加水适量使溶解成溶解成1000ml1000ml，摇匀。，摇匀。4.KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O3.注意事项：注意事项：操作中要防止溴和碘的逸失。操作中要防止溴和碘的逸失。平平行行条条件件进进行行空空白白试试验验可可减减少少溴溴和和碘碘逸逸失失带来的误差。带来的误差。司可巴比妥钠司可巴比妥钠 ChP ChP（20052005）取取本本品品约约0.1g0.1g，精精密密称称定定，置置250ml250ml碘碘瓶瓶中中，加加水水10m110m1，振

33、振摇摇使使溶溶解解，精精密密加加溴溴滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）25ml25ml，再再加加盐盐酸酸5m15m1，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1min1min，在在暗暗处处静静置置15min15min后后，注注意意微微开开瓶瓶塞塞，加加碘碘化化钾钾试试液液10m110m1，立立即即密密塞塞，摇摇匀匀后后，用用NaNa2 2S S2 2O O3 3滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将 滴滴 定定 结结 果果 用用 空空 白白 试试 验验 校校 正正。每每 1ml1

34、ml溴溴 滴滴 定定 液液（0.1mo1/L0.1mo1/L）相当于）相当于13.01mg13.01mg的的C C1212H H1717N N2 2NaONaO3 3。含量计算含量计算（原料药：剩余滴定法（原料药：剩余滴定法）三、三、酸碱滴定法酸碱滴定法1.在水在水-乙醇混合溶剂中滴定乙醇混合溶剂中滴定原理：原理：NNOOOHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2H+NaOHNNOOONaHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2+H2O注意事项：注意事项：溶剂：水溶剂：水-乙醇乙醇滴定剂：滴定剂：NaOHNaOH指示剂：麝香草酚酞（终点为淡蓝色）指示剂：麝香草酚酞（终点为淡蓝色）操操作作简

35、简单单，但但终终点点难难以以判判断断，需需采采用用空空白白对照帮助确定终点。对照帮助确定终点。操操作作过过程程中中易易吸吸收收COCO2 2而而使使终终点点的的淡淡蓝蓝色色褪褪去，最好采用电位法指示终点。去，最好采用电位法指示终点。原料药的直接滴定法（空白校正）原料药的直接滴定法（空白校正）T：滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的毫克数V：供试品消耗滴定液的体积（ml）V0：空白消耗滴定液的体积（ml）ms：供试品的质量F：浓度校正因子，2.在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定原理：原理：表表面面活活性性剂剂能能改改变变巴巴比比妥妥类类药药物物的的电电离离平平衡衡，使使药药物物的的K Ka

36、a值值增增大大，酸酸性性增增强强，从从而而滴定终点明显。滴定终点明显。滴定剂：滴定剂：NaOHNaOH常用表面活性剂：常用表面活性剂：溴化十六烷基三甲基苄胺（溴化十六烷基三甲基苄胺（CTMCCTMC）氯化四癸基二甲基苄胺（氯化四癸基二甲基苄胺（TDBATDBA）3.非水溶液滴定法非水溶液滴定法原理：原理：巴巴比比妥妥类类药药物物在在非非水水溶溶剂剂中中的的酸酸性性增增强强，从从而而滴滴定终点明显。定终点明显。指示剂：麝香草酚蓝或电位法指示终点指示剂：麝香草酚蓝或电位法指示终点滴定剂：甲醇钠（钾）的甲醇或乙醇溶液滴定剂：甲醇钠（钾）的甲醇或乙醇溶液氢氧化四丁基胺的氯苯溶液氢氧化四丁基胺的氯苯溶液

37、常用溶剂：常用溶剂：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷无水乙醇、苯、吡啶、甲醇无水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（苯（15:8515:85）四、四、紫外分光光度法紫外分光光度法巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无紫外吸巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无紫外吸收，在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构。收，在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构。1.直接测定的紫外分光度法直接测定的紫外分光度法将将供供试试品品溶溶解解后后，根根据据其其pHpH值值，选选用用相相应应的的maxmax处处，直直接接测测定定对对照照品品溶溶液液和和供供试试品品溶溶液液的的吸光度值。

38、吸光度值。A As s：供试品溶液吸光度：供试品溶液吸光度A Au u：对照品溶液吸光度：对照品溶液吸光度C Cs s：对照品溶液浓度：对照品溶液浓度(mg/ml)(mg/ml)V V：稀释体积：稀释体积(ml)(ml)巴比妥类药物的紫外吸收的有关数据巴比妥类药物的紫外吸收的有关数据注射用硫喷妥钠注射用硫喷妥钠 ChPChP（20052005）本本品品为为硫硫喷喷妥妥钠钠100100份份与与无无水水碳碳酸酸钠钠6 6份份混混合合的的灭灭菌菌粉粉末末。按按平平均均装装量量计计算算，含含硫硫喷喷妥妥钠钠应应为为标标示示量量的的93.0%93.0%107.0%107.0%。取取装装量量差差异异项项下

39、下的的内内容容物物，混混合合均均匀匀，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫喷喷妥妥钠钠0.25g0.25g），置置500ml500ml量量瓶瓶中中，加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，量量取取此此溶溶液液用用0.4%NaOH0.4%NaOH溶溶液液定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含5 5 g g的的溶溶液液；另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品，精精密密称称定定，加加0.4%NaOH0.4%NaOH溶溶液液溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含5 5 g g的的溶溶液液。照照分分光光光光度度法法，在在304nm304nm的的波波长长处处分分

40、别别测测定定A A，根根据据每每支支的的平平均均装装量量计计算算。每每1mg1mg硫硫喷喷妥妥相当于相当于1.091mg1.091mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO2 2S S。注射用灭菌粉末注射用灭菌粉末 2.提取分离后的紫外分光度法提取分离后的紫外分光度法如如供供试试品品中中有有干干扰扰物物质质，可可采采用用提提取取分分离离的的方方法除去干扰物质后，再用紫外分光光度法测定法除去干扰物质后，再用紫外分光光度法测定。可可根根据据巴巴比比妥妥类类药药物物具具弱弱酸酸性性，在在三三氯氯甲甲烷烷等等有有机机溶溶剂剂中中易易溶溶，而而其其钠钠盐盐在在水水中中易易溶溶的的特特点

41、点进行提取分离。进行提取分离。3.3.差示分光光度法（差示分光光度法（A A法）法）测定方法：测定方法：取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境（如如在在其其一一中中加加酸酸、碱碱或或缓缓冲冲液液改改变变溶溶液液的的pHpH，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反应应的的试试剂剂），然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，一一份份置置样样品品池池中中，另另一一份份置置参参比比池池中中，于于适适当当波波长长处处，测其吸收度的差值（测其吸收度的差值（A A值）。值）。必要条件：必要条件：供供试

42、试品品在在不不同同的的化化学学环环境境中中以以不不同同的的分分子子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。干干扰扰物物的的吸吸收收不不受受测测定定时时化化学学环环境境的的影影响响，光谱行为不变。光谱行为不变。定量依据：定量依据：供供试试品品在在两两种种不不同同的的化化学学环环境境中中分分别别以以x x、y y表示，干扰物用表示，干扰物用z z表示表示特点：特点：吸吸收收度度差差值值（A A）仅仅与与待待测测组组分分的的浓浓度度有有关关，而而与与干干扰扰组组分分无无关关，即即干干扰扰组组分分的的干干扰被消除。扰被消除。保保留留了了通通常常的的分分光光光光度度法

43、法简简易易快快速速、直直接接读读数数的的优优点点，又又无无需需事事先先分分离离，并并能能消消除除干扰。干扰。五、五、高效液相色谱法高效液相色谱法多用于制剂及体液中的巴比妥类药物的测定。多用于制剂及体液中的巴比妥类药物的测定。例：血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的测定例：血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的测定色谱柱：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-CAgilent ZORBAX SB-C1818柱柱流动相：流动相：水水-甲醇甲醇-乙腈（乙腈（45:45:1045:45:10）流流 速：速：1.0ml/min1.0ml/min柱温度：柱温度：3030内内 标：标：阿普唑仑的甲醇溶液阿普

44、唑仑的甲醇溶液(5(5g/ml)g/ml)检测波长：检测波长：254nm样品处理：样品处理：于于60 60 水水浴浴中中N N2 2吹吹干干，加加提提取取液液(三三氯氯甲甲烷烷:乙乙酸酸乙乙酯酯=50:50)2ml,=50:50)2ml,涡涡旋旋混混合合5min5min，4000r/min4000r/min离离心心10min10min，取取有有机机相相1ml1ml置置塑塑料料离离心心管管中中，于于60 60 水水浴浴中中N N2 2吹吹干干，用用流流动动相相200200ll溶溶解解，取取20l20l进样。进样。计算方法：计算方法：在在对对照照品品与与内内标标峰峰面面积积比比值值与与对对照照品品

45、浓浓度度之之间间建立标准校正曲线（建立标准校正曲线（n=5n=5）。）。六、六、电泳法电泳法具有分离度高、样品和试剂用量少、快速的特点，具有分离度高、样品和试剂用量少、快速的特点，适用于巴比妥类药物体内含量分析。适用于巴比妥类药物体内含量分析。例：尿样中苯巴比妥和巴比妥的测定例：尿样中苯巴比妥和巴比妥的测定色谱柱：色谱柱：熔融石英毛细管柱熔融石英毛细管柱背景电解质：背景电解质：甘氨酸甘氨酸-氢氧化钠缓冲液氢氧化钠缓冲液(pH=11)(pH=11)样品电解质：样品电解质：甘氨酸甘氨酸-盐酸钠缓冲液盐酸钠缓冲液(pH=5.5pH=5.5)分离电压：分离电压：12.5kV12.5kV操作温度：操作温

46、度：2424检测波长：检测波长：214nm214nm内内 标：标：司可巴比妥司可巴比妥样品处理：样品处理：精精密密量量取取尿尿样样400ml400ml于于离离心心管管中中，调调节节pH4.0pH4.0，依依次次加加入入5050ll内内标标和和5050l l 200mmol/L200mmol/L甘甘氨氨酸酸溶溶液液,涡涡旋旋混混合合1min1min，加加入入400400ll乙乙酸酸乙乙酯酯，振振摇摇2min2min，1118011180r/minr/min离离心心10min10min，取取有有机机相相至至另另一一离离心心管管（两两次次提提取取），真真空空抽抽干干，以以乙乙醇醇复复溶解，加入样品电

47、解质缓冲液至溶解，加入样品电解质缓冲液至400400ll。计算方法：计算方法：在在对对照照品品与与内内标标峰峰面面积积比比值值与与对对照照品品浓浓度度之之间间建立标准校正曲线（建立标准校正曲线（n=5n=5）。）。七、七、气相色谱气相色谱-质谱法质谱法采用直接固相微萃取采用直接固相微萃取GC-MS可同时测定人体液中可同时测定人体液中异戊巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、环己烯巴比异戊巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、环己烯巴比妥、戊巴比妥、扑米酮和甲苯巴比妥等七种巴比妥妥、戊巴比妥、扑米酮和甲苯巴比妥等七种巴比妥类药物的含量。类药物的含量。例：血样中七种巴比妥类药物含量的测定例：血样中七种巴比妥类药物

48、含量的测定仪器：仪器：岛津岛津GCMS-QP5050AGCMS-QP5050A；色谱柱：色谱柱：HP-1HP-1载气：载气：氦气；氦气；流速：流速：1.1ml/min1.1ml/min进样口温度：进样口温度：270270；接口温度：接口温度：240240柱升温程序：柱升温程序：100(1min)100(1min)28028020/min定量定量m/zm/z：异异戊戊巴巴比比妥妥(156)(156)、苯苯巴巴比比妥妥(204)(204)、司司可可巴巴比比妥妥(168)(168)、环环己己烯烯巴巴比比妥妥(221)(221)、戊戊巴巴比比妥妥(156)(156)、扑扑米米酮酮(190)(190)、

49、甲苯巴比妥甲苯巴比妥(218)(218)样品处理：样品处理：精精密密量量取取0.5ml0.5ml待待测测血血样样，加加入入1.5ml1.5ml高高氯氯酸酸于于去去除除蛋蛋白白质质，涡涡旋旋混混合合1min1min，1630r/min1630r/min离离心心10min10min，精精密密量量取取1.5ml1.5ml上上清清液液，放放于于有有磁磁搅搅拌拌子子和和0.5g0.5g硫硫酸酸钠钠的的2ml2ml微微反反应应管管中中，以以0.1mol0.1mol、/L/L氢氢氧氧化化钠钠试试液液调调节节pH6.0pH6.07.07.0，封封口口后后放放入入加加热热器器中中，6060搅搅拌拌加加热热15m

50、in15min后后，将将SPMESPME萃萃取取头头插插入入样样品品也也中中萃萃取取，继继续续搅搅拌拌60min60min，取取出萃取头后，直接插入出萃取头后，直接插入GCGC进样口，解吸进样口，解吸10min10min后分析。后分析。本章学习要求本章学习要求1.掌握巴比妥类药物的化学结构与分析方法间关系掌握巴比妥类药物的化学结构与分析方法间关系弱酸性弱酸性水解性水解性与重金属离子的反应与重金属离子的反应2.掌握巴比妥类药物的鉴别：掌握巴比妥类药物的鉴别：与重金属的反应与重金属的反应特殊取代基和硫元素的鉴别试验特殊取代基和硫元素的鉴别试验3.掌握巴比妥类药物含量测定的原理与方法掌握巴比妥类药物