血涂片制备染色及白细胞形态分解.ppt

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1、血涂片制备、染色及白血涂片制备、染色及白细胞形态观察细胞形态观察医学技术学院 胡淼联系电话：实验内容1.血涂片制备 2.血涂片染色3.正常白细胞形态观察目的目的目的目的：掌握血涂片的制备方法、瑞吉氏染色方 法，观察正常白细胞形态。染色原理染色原理染色原理染色原理：根据不同种类细胞及细胞的不同成分 ，对酸性及碱性染料结合能力不同，而使各种细胞呈现各自的特点。器材器材器材器材：载玻片、推片、染架、吸耳球、显微镜、微量吸管、拭镜纸。试剂试剂试剂试剂：瑞吉氏染液、磷酸盐缓冲液、香柏油、乙醇-乙醚溶液。标本标本标本标本：抗凝血。左手持载玻片，右手持推片，将推片置血滴前方，向后移动到接触血滴，使血滴沿推片

2、边缘展开成线状。1.血 涂 片 制 备血液充分抗凝。微量吸管虹吸取血7-8l，置血滴于载玻片一端。推片与载片呈推片与载片呈3040角角，向另一端，向另一端匀速地匀速地推出。推出。血 涂 片 制 备血 涂 片 制 备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾 涂片干燥后用铅笔铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B 1 2 32.血 涂 片 染 色再加再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴，滴，液和液和液充分混匀静置液充分混匀静置5分钟分钟直接在无血膜处无血膜处流水冲洗3-5分钟血涂片干燥后用油镜分类计数200个白细胞李李四四1 12 23

3、3涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴覆盖整个血膜滴覆盖整个血膜1分钟分钟1.1.玻片清洗：新玻片玻片清洗：新玻片常有游离碱质常有游离碱质,因此应用因此应用 清洗液或清洗液或10%10%盐酸浸泡盐酸浸泡24h,24h,然后再彻底清洗。然后再彻底清洗。用用过的玻片过的玻片可放入适量肥皂水煮沸可放入适量肥皂水煮沸20min,20min,再用热再用热水将肥皂和血膜洗去水将肥皂和血膜洗去,自来水反复冲洗自来水反复冲洗,必要时必要时再置再置95%95%乙醇中浸泡乙醇中浸泡1h,1h,然后然后擦干或烤干擦干或烤干备用。备用。2 2.使用玻片使用玻片：只能手持玻片边缘只能手持玻片边缘,切勿触

4、及玻片切勿触及玻片表面表面,以保持玻片清洁以保持玻片清洁、干燥干燥、中性、无油腻。中性、无油腻。注 意 事 项 玻片3.3.良好的血良好的血涂涂片片,厚薄适宜厚薄适宜,头体尾分明头体尾分明,分分布均匀布均匀,边缘整齐边缘整齐,两侧留有空隙。两侧留有空隙。血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。4.4.血涂片血涂片干透干透后方可染色，否则染色过程中后方可染色，否则染色过程中血膜容易脱落。血膜容易脱落。血血涂涂片制好后最好片制好后最好立即固定立即固定染色染色,以免细胞溶解和发生退行性变。以免细胞溶解和发生退行性变。注 意 事 项 推片 5.5.H H+影响细

5、胞染色影响细胞染色,配制染液必须用配制染液必须用优质甲醇优质甲醇,稀释染液稀释染液必须用必须用缓冲液缓冲液,近中性水近中性水冲洗冲洗,否则各种细胞染色反应异否则各种细胞染色反应异常常,致使细胞的识别困难致使细胞的识别困难,甚至造成错误。甚至造成错误。6.6.染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染染液越淡、室温越低、细胞越多液越淡、室温越低、细胞越多,染色时间越长或适当增染色时间越长或适当增加染液量。加染液量。7.7.染液不可过少染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难冲洗干净。冲洗干净。流水冲去染液流水冲

6、去染液,不能先倒掉染液不能先倒掉染液,以免染料沉以免染料沉着于血涂片上。着于血涂片上。冲洗时间冲洗时间不宜过久，以防脱色。不宜过久，以防脱色。注 意 事 项 染色染色3.血涂片的观察l低倍镜观察低倍镜观察 1.1.染色情况染色情况(满意、偏酸、偏碱）满意、偏酸、偏碱）2.2.细胞分布情况细胞分布情况l油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李李四四1 12 23 3中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞中性分叶核粒细胞中性

7、分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞正 常 细 胞 形 态胞体：圆形，直径 10-15m。胞核：核形不一，呈S形、U形等，核凹陷程度大于核直径的1/2，核最窄径大于最宽径的1/3。核色质粗糙成块。胞浆：胞质量丰富，充满浅红色中性颗粒。中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分2-5叶。直径10-12m。嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色

8、，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成桔红色。直径10-15 m。嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞体积略小于嗜酸性白细胞，细胞中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11 m。单核细胞单核细胞体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20 m。淋巴细胞淋巴细胞小淋巴细胞：与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成 深紫色。周围细胞质嗜碱性，染成淡蓝。大淋巴细胞：较大，核圆形。直径6-8 m。细胞细胞细胞细胞 形态形态形态形态 胞质着色胞质着色胞质着色胞质着色 胞质内颗粒胞质内颗粒胞质内颗粒胞质内颗粒

9、细胞核型细胞核型细胞核型细胞核型 中性杆中性杆中性杆中性杆 圆形圆形圆形圆形 粉红色粉红色粉红色粉红色 量多量多量多量多 细小细小细小细小 均匀均匀均匀均匀 紫红色紫红色紫红色紫红色 杆状杆状杆状杆状 中性叶中性叶中性叶中性叶 圆形圆形圆形圆形 粉红色粉红色粉红色粉红色 量多量多量多量多 细小细小细小细小 均匀均匀均匀均匀 紫红色紫红色紫红色紫红色 2-52-5叶叶叶叶 嗜酸嗜酸嗜酸嗜酸 圆形圆形圆形圆形 不清不清不清不清 粗大整齐均匀橘黄色粗大整齐均匀橘黄色粗大整齐均匀橘黄色粗大整齐均匀橘黄色 2 2叶眼镜形叶眼镜形叶眼镜形叶眼镜形 嗜碱嗜碱嗜碱嗜碱 圆形圆形圆形圆形 不清不清不清不清 量少

10、量少量少量少 排列紊乱排列紊乱排列紊乱排列紊乱 不均紫黑色不均紫黑色不均紫黑色不均紫黑色 覆盖核上覆盖核上覆盖核上覆盖核上 核形不清核形不清核形不清核形不清 单核单核单核单核 圆圆圆圆 椭圆椭圆椭圆椭圆 灰蓝色灰蓝色灰蓝色灰蓝色 细小尘土样紫红色细小尘土样紫红色细小尘土样紫红色细小尘土样紫红色 肾型肾型肾型肾型 马蹄形马蹄形马蹄形马蹄形 淋巴淋巴淋巴淋巴 圆圆圆圆 椭圆椭圆椭圆椭圆 透明透明透明透明 淡蓝色淡蓝色淡蓝色淡蓝色 多无多无多无多无 大细胞可有少量大细胞可有少量大细胞可有少量大细胞可有少量 圆圆圆圆 椭圆椭圆椭圆椭圆 肾形肾形肾形肾形红细胞红细胞淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8m。血小板血小板形状不规则，一般呈圆形，比红细胞和白细胞小得多，无细胞核，有质膜。血小板在长期内被看作是血液中无功能的细胞碎片。1.本次实验的关键环节是什么？2.同一标本不同组分类是否一致，原因分析。3.5种白细胞形态绘图。分析讨论分析讨论 Thank you for your attention!