农药残留快速检测技术讲课讲稿.ppt

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1、农药残留(cnli)快速检测技术第一页，共33页。一、国内农残快速检测的现状及意义 二、常用的农药残留(cnli)快速检测方法 三、农残快速检测方法的介绍 四、农残快速检测方法的注意事项目录(ml)第二页，共33页。（一）现状（一）现状现状现状1 1：起步晚、意识淡薄：起步晚、意识淡薄(dnb)(dnb)、缺乏、缺乏宣传。宣传。现状现状2 2：投入少、检测力量薄弱、缺乏有效：投入少、检测力量薄弱、缺乏有效的数据信息监管。的数据信息监管。现状现状3 3：地区之间、部门之间、单位之间差：地区之间、部门之间、单位之间差异极大异极大一、国内农残快速检测一、国内农残快速检测(jin c)(jin c)的

2、现的现状及意义状及意义第三页，共33页。（二）快速检测实施的必要性（二）快速检测实施的必要性农残超标的主要原因：农残超标的主要原因：一是生产者不严格按农药安全使用准则的一是生产者不严格按农药安全使用准则的要求进行生产要求进行生产,使用违禁农药或使用量和安全使用违禁农药或使用量和安全期掌握不好期掌握不好(b ho)。二是施药器具喷洒的均匀性欠佳二是施药器具喷洒的均匀性欠佳,易导致易导致局部给药超量所致。局部给药超量所致。由于高毒、高残留的有机磷农药如：对硫由于高毒、高残留的有机磷农药如：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧乐果、敌敌畏及甲磷、甲基对硫磷、乐果、氧乐果、敌敌畏及甲胺磷等占据了杀虫剂产量的胺

3、磷等占据了杀虫剂产量的70以上，并且其以上，并且其中中70以上的中毒事故都是由有机磷农药引起以上的中毒事故都是由有机磷农药引起的。的。一、国内农残快速一、国内农残快速(kui s)(kui s)检测的检测的现状及意义现状及意义第四页，共33页。（二）农药残留快速（二）农药残留快速(kui s)检测技术检测技术的意义的意义 农药残留快速农药残留快速(kui s)检测技术是保检测技术是保障农产品质量安全的重要技术支撑。障农产品质量安全的重要技术支撑。农药残留快速农药残留快速(kui s)检测技术在鲜检测技术在鲜活农产品现场监测、市场准入、进入口活农产品现场监测、市场准入、进入口岸贸易、快速岸贸易、

4、快速(kui s)筛查等工作中发筛查等工作中发挥着越来越重要的作用。挥着越来越重要的作用。一、国内农残快速一、国内农残快速(kui s)(kui s)检测的检测的现状及意义现状及意义第五页，共33页。l生化检测l生物(shngw)检测l化学比色酶抑制酶抑制(yzh)法法免疫免疫(miny)分析法分析法发光菌检测法发光菌检测法敏感家蝇检测法敏感家蝇检测法速测卡速测卡速测仪速测仪 主要为酶免疫法主要为酶免疫法二、常用的农药残留快速检测方法二、常用的农药残留快速检测方法第六页，共33页。方法检测对象国内外对比化学检测技术有机磷灵敏度低酶抑制检测技术有机磷和氨基甲酸酯国内假阳性、假阴性率高，几十余家生

5、产厂商，多种速测卡，速测仪，GB/T 5009.199-2003;NY/T 448-2001国外 测定样品和农药种类有限，欧美作为普查农药残留和田间实地检测的基本手段；AOAC官方方法 964.17免疫分析法有机磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯类、有机氯类、三嗪类、拟除虫菊酯类和酰酯类等几十种农药国内研究活跃，但未有整正推广使用的商品化产品国外技术成熟，灵敏度高，FAO推荐方法，美国USAD、EPA、AOAC制定了评定标准，但经认证的有限，经EPA认证的免疫试剂盒约有4个厂家的26种试剂盒；EPA方法4010、EPA方法 4015 EPA方法3030等生物传感器有机磷、氨基甲酸酯国内处于研究阶段

6、 国外电导型生物传感器、光寻址电位型传感器、安培型传感器，处于研究和应用阶段，并未广泛推广使用第七页，共33页。lGB/T 5009.199-2003蔬菜(shci)中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测lNY/T 448-2001蔬菜(shci)上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法二、我国的农药残留快速二、我国的农药残留快速(kui s)(kui s)检测方法检测方法第八页，共33页。小知识小知识 依据依据(yj)中华人民共和国标准化法的规定，按中华人民共和国标准化法的规定，按照适用范围将我国的标准划分为国家标准、行业标准、地照适用范围将我国的标准划分为国家标准、行业标准、地方标准

7、和企业标准方标准和企业标准4个层次。个层次。二、我国的农药残留快速二、我国的农药残留快速(kui s)检检测方法测方法第九页，共33页。国标和行标方法国标和行标方法(fngf)比较比较国标方法国标方法行标方法行标方法标准编号标准编号 GB/T 5009.199-2003GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001NY/T 448-2001适用范围适用范围原理原理酶抑制原理酶抑制原理比色波长比色波长 412nm412nm4104103nm3nm取样方法取样方法 去掉泥土，剪成去掉泥土，剪成1cm1cm见方见方不锈钢管取样器叶片：不锈钢管取样器叶片：至少至少8-108-10片果菜

8、：从表片果菜：从表皮至果肉皮至果肉1-1.5cm1-1.5cm处处取样量取样量1g1g叶菜类叶菜类2g2g非叶菜类非叶菜类4g4g有机磷和氨基甲酸酯类农药有机磷和氨基甲酸酯类农药(nngyo)全部全部(qunb)部分部分第十页，共33页。国标和行标方法国标和行标方法(fngf)比较比较国标方法国标方法行标方法行标方法缓冲液缓冲液pH8pH8磷酸缓冲液磷酸缓冲液5mL5mLpH8pH8磷酸缓冲液磷酸缓冲液20mL20mL酶酶乙酰胆碱酷酶乙酰胆碱酷酶0.1mL0.1mL丁酰胆碱醋酶丁酰胆碱醋酶50uL50uL显色剂显色剂二硫代二硝基苯甲酸和二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氢钠碳酸氢钠0.1mL0.1mL二

9、硫代二硝基苯甲酸二硫代二硝基苯甲酸50uL50uL底物底物硫代乙酰胆碱硫代乙酰胆碱0.1mL0.1mL碘化硫代丁酰胆碱碘化硫代丁酰胆碱50uL50uL第十一页，共33页。国标和行标方法国标和行标方法(fngf)比较比较国标方法国标方法行标方法行标方法提取时间提取时间1-2min1-2min需提取液的量需提取液的量2.5mL2.5mL3mL3mL培养温度培养温度373737-3837-38培养时间培养时间至少至少15min15min30min30min结果判定结果判定抑制率抑制率50%50%为合格为合格抑制率抑制率70%70%为合格为合格第十二页，共33页。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍

10、本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速甲酸酯类农药残留量的快速(kui s)(kui s)筛选测定。筛选测定。（一）适用范围（一）适用范围（以（以GB/T5009.199-2003中酶抑制率法为例）中酶抑制率法为例）第十三页，共33页。有机磷或氨基甲酸酯类农药有机磷或氨基甲酸酯类农药(nngyo)(nngyo)乙酰胆碱乙酰胆碱显色剂显色剂黄色黄色(hungs)(hungs)物质物质温度温度(wnd)(wnd)、pHpH、胆碱、胆碱酯酶等酯酶等一一定定条条件件胆碱胆碱乙酰乙酰+三、方法介绍三、方法介绍（以（以GB/T5009.199-2003中酶抑制

11、率法为例）中酶抑制率法为例）水解水解412nm412nm测定一定时间内的吸光度测定一定时间内的吸光度（二）原理（二）原理第十四页，共33页。原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，抑制率与农药浓度成正相关关系。正常情况下，酶（胆碱酯酶）催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应(fnyng)，产生黄色物质，用农药残毒速测仪于412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率判断样品中是否存在有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第十五页，共33页。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍GDYN-308S农

12、药(nngyo)残留速测仪提取(tq)瓶（三）仪器（三）仪器配套箱超声提取仪第十六页，共33页。移液器电子(dinz)台秤不锈钢取样器三、方法三、方法(fngf)介绍介绍搅拌棒比色瓶第十七页，共33页。结果结果(ji gu)判定判定样品样品(yngpn)测量测量样品样品(yngpn)处理处理空白测量空白测量（四）实验流程四）实验流程（以小天鹅以小天鹅GDYN-308SGDYN-308S农药残留速测仪为例农药残留速测仪为例）试剂配制试剂配制样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品测量样品测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品测量样品测

13、量样品处理样品处理空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理空白测量空白测量样品处理样品处理样品测量样品测量空白测量空白测量样品处理样品处理样品测量样品测量空白测量空白测量样品处理样品处理三、方法介绍三、方法介绍第十八页，共33页。1、试剂(shj)配制农残试剂配制方法农残试剂配制方法 农残试剂（一）：农残试剂（一）：取塑料方瓶，将一包固体取塑料方瓶，将一包固体+500mL+500mL蒸馏水。蒸馏水。农残试剂（二）：农残试剂（二）：一支一支(y zh)(y zh)真空玻璃瓶（真空玻璃瓶（5mL5mL）转移至标有农残试剂二的塑

14、料）转移至标有农残试剂二的塑料瓶中。瓶中。农残试剂（三）：农残试剂（三）：一支一支(y zh)(y zh)塑料管（试剂三）加入到塑料管（试剂三）加入到25mL25mL农残试剂（一），农残试剂（一），混匀。混匀。农残试剂（四）：农残试剂（四）：一支一支(y zh)(y zh)塑料管（试剂四）加入到塑料管（试剂四）加入到25mL25mL蒸馏水，混匀。蒸馏水，混匀。实验用水：去离子水、蒸馏水或者纯净水实验用水：去离子水、蒸馏水或者纯净水三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第十九页，共33页。农残试剂（二）、（三）、（四）必须在冰箱0 4中避光保存，且从冰箱中取出后，其温度必须达到室温后方可使用。采用

15、双重保护(boh)技术，酶试剂在04下保质期为1年，在室温下保质期为15天。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十页，共33页。2、空白(kngbi)测量 比色瓶中+（一）1.00ml+（二）50l+（三）50l，摇 匀，放入第一(dy)通道中，计时3分钟（手动）按向上键。加入试剂（四）50l，倒计时3分钟（自动），仪器显示A值，空白测量完毕。要求A大于0.100。若小于则增加（二）用量或者增加显色时间。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十一页，共33页。3、样品(yngpn)处理 样品(yngpn)提取瓶+2.0克待测样品(yngpn)+10.0ml（一）。超声提取3分钟，取出。三

16、、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十二页，共33页。（1 1）样品处理）样品处理:选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，对于叶菜（如菠菜、油菜、白菜等）样泥土，对于叶菜（如菠菜、油菜、白菜等）样品，将叶片部分（包括茎部）切成品，将叶片部分（包括茎部）切成1cm1cm左右见左右见方碎片；对于果实蔬菜（如黄瓜、豆角等）样方碎片；对于果实蔬菜（如黄瓜、豆角等）样品，用水果刀顺皮削下一片品，用水果刀顺皮削下一片(y pin)(y pin)，然，然后切成后切成1cm1cm左右见方碎片。左右见方碎片。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十三页，共33页。辛辣样品

17、的处理：辛辣样品的处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗选取有代表性的蔬菜样品，冲洗(chngx)(chngx)掉表掉表面泥土，对于叶菜（如韭菜、韭黄、大葱等）样品，将面泥土，对于叶菜（如韭菜、韭黄、大葱等）样品，将叶片部分切成叶片部分切成2cm2cm左右长的小段；对于辣椒、生姜等样左右长的小段；对于辣椒、生姜等样品，将可食部分切成品，将可食部分切成1cm1cm左右见方碎片，对于大蒜，将左右见方碎片，对于大蒜，将蒜扒皮后整瓣提取。蒜扒皮后整瓣提取。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十四页，共33页。（2 2）样品提取）样品提取(tq)(tq)用电子台秤称取用电子台秤称取2.0g2.0g样品于

18、提取样品于提取(tq)(tq)瓶中，用移液器加入瓶中，用移液器加入10.0ml10.0ml农残试农残试剂一，用搅拌棒将样品压入页面下。然后将剂一，用搅拌棒将样品压入页面下。然后将提取提取(tq)(tq)瓶放入超声提取瓶放入超声提取(tq)(tq)仪中仪中提取提取(tq)3min(tq)3min（在超声提取（在超声提取(tq)(tq)仪仪中预先加入中预先加入500ml500ml蒸馏水）。用移液器移取蒸馏水）。用移液器移取1.00ml1.00ml样品提取样品提取(tq)(tq)液于比色瓶中，至液于比色瓶中，至于多功能固定架上备用。于多功能固定架上备用。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十五页

19、，共33页。辛辣样品的提取：辛辣样品的提取：用电子台秤称取用电子台秤称取2.0g2.0g样品（大蒜取样品（大蒜取2 2瓣）于提取瓶中，瓣）于提取瓶中，用移液器加入用移液器加入10.0ml10.0ml农残试剂一，再加入农残试剂一，再加入5050微升辛辣物微升辛辣物质质(wzh)(wzh)干扰专用消除试剂，用搅拌棒将样品压入页干扰专用消除试剂，用搅拌棒将样品压入页面下，将样品提取瓶置于比色瓶固定架上静置面下，将样品提取瓶置于比色瓶固定架上静置5min5min，提，提取液用滤纸过滤于干净并干燥的玻璃提取瓶中，弃去几取液用滤纸过滤于干净并干燥的玻璃提取瓶中，弃去几滴初滤液后再滤出滴初滤液后再滤出5ml

20、5ml以上，将盛有滤液的玻璃提取瓶放以上，将盛有滤液的玻璃提取瓶放入沸水浴（水浴锅）中加热入沸水浴（水浴锅）中加热5min5min，取出冷却至室温后作，取出冷却至室温后作为待测液。用移液器移取待测液为待测液。用移液器移取待测液1.00ml1.00ml于比色瓶中。于比色瓶中。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十六页，共33页。（3 3）、样品）、样品(yngpn)(yngpn)测量测量 比色瓶中+待测液1.00ml+（二）50l+（三）50l 摇匀，放入仪器中，按向下键。倒计时10分钟（自动）加入（四）50l，放回仪器中，按继续健。倒计时3分钟（自动）。仪器显示测量的结果(ji gu)抑制

21、率。（国标限量为50）。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十七页，共33页。（4）、结果(ji gu)判定按国标（按国标（GB/T5009.199-2003GB/T5009.199-2003）抑制率抑制率 50 50时，结果为阳性。时，结果为阳性。（含有有机磷或氨基甲酸酯类农药）（含有有机磷或氨基甲酸酯类农药）此结果若出现此结果若出现2 2次以上次以上(yshng)(yshng)，上报有关部门进行处理。，上报有关部门进行处理。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十八页，共33页。（五）、干扰（五）、干扰(gnro)及解及解决办法决办法 含有植物次生物质：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜

22、(xingci)、茭白、蘑菇及番 茄汁液对酶有影响，容易产生假阳性。含色素较高浓度的蔬菜：桔子、豆角、黄瓜等含有的色素，对比色测定有影响。解决办法：可采取整株（体）浸提，以刚好浸没为准。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第二十九页，共33页。（六）结果（六）结果(ji gu)(ji gu)表述表述1 1、结果、结果(ji gu)(ji gu)计算计算三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第三十页，共33页。按国标（按国标（GB/T5009.199-2003GB/T5009.199-2003）抑制率抑制率 50 50时，结果为阳性时，结果为阳性(yngxng)(yngxng)。（含有有机磷或氨基

23、甲酸酯类农药）（含有有机磷或氨基甲酸酯类农药）此结果若出现此结果若出现2 2次以上，上报有关部门进行处理。次以上，上报有关部门进行处理。2 2、结果判定、结果判定 结果以酶被抑制的程度结果以酶被抑制的程度(chngd)(chngd)(抑制率抑制率)表示。表示。三、方法三、方法(fngf)介绍介绍第三十一页，共33页。四、注意事项四、注意事项1.样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。2、阳性结果(ji gu)的样品需要重复检验2次以上。3、对阳性结果(ji gu)的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。4、标准NY/T 4482001使用的丁酰胆碱酯酶对甲基对硫磷、乐果、毒死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。第三十二页，共33页。5.仪器的使用与维护：将仪器放在水平的工作台上，要求避光，干燥通风的 环境。当开机后出现异常情况如显示白屏、乱码或无 显示时，请关闭电源重新开机。如未消除以上现象，请及时与厂家联系。切勿打开仪器，私自进行处理。另外附近的电磁场也干扰仪器的正常(zhngchng)使用。6.比色瓶的清洗：如果比色瓶内壁挂有颜色，可以使用 稀酸浸泡。四、注意事项四、注意事项第三十三页，共33页。