白参和发酵白参抗疲劳及对免疫功能的影响.doc

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1、白参和发酵白参抗疲劳及对免疫功能的影响摘要： 目的：研究白参和发酵白参对于小鼠免疫功能的调节作用和对于小鼠疲劳状况的改善作用。 方法：根据白参、发酵白参、细胞因子等不同的处理方式将小鼠分为6组，进行溶血空斑实验、单核巨噬细胞吞噬功能实验、NK细胞活力测定、T细胞增殖情况测定、半溶血素测定，并用SPSS18.0软件分析所得数据。 结果：中浓度的自制白参可以明显的增加溶血空板的形成、吞噬率和吞噬指数也明显高于空白对照，NK细胞的活力和半溶血素（HC50）也明显强于空白对照，但是对T细胞的增殖没有明显作用；两个浓度的发酵白参对NK细胞的活力和T细胞的增殖都有很明显的促进作用。中浓度的白参和高中两个浓

2、度的发酵白参能够增强小鼠的免疫力、提高小鼠的抗疲劳能力。 结论：由此可知，中浓度的白参和高中两个浓度的发酵白参能够增强小鼠的细胞免疫免疫力、提高小鼠的抗疲劳能力，且发酵白参的效果好于白参。关键词：白参 免疫功能 抗疲劳 溶血空斑 吞噬功能现今，随着工作压力的增加、生活节奏的加快，很多人都因为疲劳的不断累积而处在亚健康的身体状态下、对于疾病的免疫力也受到了影响。近些年来，有很多关于如何改善疲劳状态和增加机体免疫力的研究，诸如健康饮食、合理运动、规律作息、中药调理等方式都为越来越多的人所接受。其中，对于中药调理的研究就涵盖了药材的选择和搭配、药物剂量的确定、药物疗效的研究。已经有很多研究报道了多种

3、中药在抗疲劳和改善免疫功能中的作用，这其中就包括白参对于人体肝炎、肿瘤、糖尿病多种慢性疾病的调理和改善作用。白参是一类性味甘平，微苦稍寒，具有补气生津、宁神益智功用的食药兼用的珍有菌菇。在这里本实验室通过溶血空斑实验、单核巨噬细胞吞噬功能实验、NK细胞活力测定、T细胞增殖情况测定、半溶血素测定来研究白参和发酵白参对于小鼠免疫功能的调节作用，通过小鼠负重游泳实验来研究白参对于小鼠疲劳状况的改善作用。1、材料与方法1.1 动物选用购买于本校动物中心的ICR小白鼠，雌性和雄性小鼠各一半，体重16-20g。1.2 药物制备1.2.1 白参取已粉碎的白参200克，加70%酒精1600毫升，浸泡、封口、过

4、夜。次日，80恒温水浴90分钟。冷却后过滤、滤液移入大烧杯，剩余残渣加入50%酒精1250毫升、80摄氏度恒温水浴60分钟。冷却后再次过滤，将滤液与第一次滤液混合、室温冷却后放置于4保存1.2.2 发酵白参和细胞因子采购于XX公司的发酵白参、货号xxxxxx，细胞因子xx、货号xxxxxx。1.3 分组方法按照用药不同分为以下几组：空白对照组给予生理盐水；高浓度白参组：给予xx浓度自制白参；中浓度白参组：给予xx浓度自制白参；高浓度发酵白参组：给予xx浓度购买的发酵白参；中浓度发酵白参组：给予xx浓度购买的发酵白参；细胞因子对照组：给予xx浓度细胞因子。1.4 实验方法1.4.1 溶血空斑实验

5、按照分组方法给药，给药后腹腔注射1:200绵羊红细胞0.5毫升，而后在无菌条件下取出小鼠脾脏，根据文献方法进行溶血空斑实验1。1.4.2 单核巨噬细胞吞噬实验吞噬实验前4d腹腔注射0.5淀粉生理盐水溶液0.5ml。实验当天腹腔注射5鸡红细胞悬液0、5ml，12h后处死；仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2ml，轻轻按揉鼠腹部1 min，然后吸出腹腔洗液lml，分滴于两片载玻片上，方入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37孵箱温育30min。以生理盐水漂洗，以除去未与载玻片黏附的细胞，晾干。1:1丙酮-甲醇溶液固定5min。4Giem-sa-磷酸盐缓冲液染色3min，流水冲洗，晾干2

6、。结果判定：油镜下计数巨噬细胞，每片200个按下试计算吞噬百分率和吞噬指数。吞噬指数=(被吞噬的鸡红细胞/200个巨噬细胞)/2；吞噬百分率()=吞噬鸡的巨噬细胞数红细胞/200个巨噬细胞(吞及未吞噬的)100%1.4.3 NK细胞活力按照分组给药后，处死老鼠、无菌取脾，支撑单细胞悬液后、按照文献报道的乳酸脱氢酶法测定NK细胞的活力，以此来指示各组小鼠脾脏中NK细胞的活性。1.4.4 T细胞增殖情况的测定按照分组给药后，处死老鼠、无菌取脾，制成单细胞悬液后用ConA液体诱导，而后用MTT法在酶标仪上以570nm测定光密度值，来指示各组小鼠脾脏中T细胞的增殖情况。1.4.5 半溶血素（HC50）

7、的测定按照分组给药后，处死老鼠、取血，根据文献报道的方法测定半溶血素（HC50），来指示各组小鼠血液发生免疫反应的能力。1.4.6 白细胞介素2（IL2）的测定采用购买于xx公司的小鼠白细胞介素2 （IL-2 ）酶联免疫分析试剂盒，用双抗体夹心法测定标本中白细胞介素2 （IL-2 ）水平。1.4.7 负重游泳实验于体积约1m3的水桶中，水深约50ml，水温25，进行游泳筛选。每10只一组，游泳10分钟，将不会游泳的、下沉的以及10分种游泳弱的小鼠淘汰。随机分组分为，白参高、中剂量组，发酵白参高、中剂量组，正常组。共5组。负重标准：给予小鼠体重的5%的铅块绑在小鼠尾巴根部。力竭标准：小鼠沉底10

8、s，不能浮起，即表示力竭。1.5 统计学方法运用SPSS18.0 软件分析上述结果，根据P0.05判断为有统计学意义。2、结果2.1 溶血空斑实验 发酵高、中、药物组比较0.05；药物组与白参高组比较p0.05，与发酵高中无显著性差异2.2单核巨噬细胞吞噬实验吞噬指数：正常组与各组比较p0.05，白高、中、发酵高、中各组比较无差异；吞噬率：正常组与各组比较p0.01，白中与发酵高之间比较p0.05。2.3 NK细胞活力正常组与各组比较p0.01，药物组与白参高中组比较p0.05，与发酵高中无显著性差异。2.4 T细胞增殖情况正常组与发酵高、中组比较P0.05, 正常组与药物组比较P0.01;

9、药物组与白参高中组比较p0.05，与发酵高中无显著性差异2.5 半溶血素（HC50）的测定正常组与白高、中组比较p0.05，与发酵高、中、药物组比较p0.01；药物组与白参高中组比较p0.05，与发酵高中无显著性差异。2.6 白细胞介素2的测定结果各个药物处理组的IL2水平都要明显大于正常对照组（p0.05）。白高、中、发酵高和发酵中两组的IL2水平明显大于白高和白中两组（p0.05），其中发酵高浓度组的IL2水平又要大于发酵中浓度组（p0.05）。2.7 2.7 负重游泳结果各个药物处理组的力竭时间都要明显长于正常对照组（p0.05）。白高、中、发酵高和发酵中两组的力竭时间明显长于白高和白中

10、两组（p0.05），其中发酵高浓度组的力竭时间又要长于发酵中浓度组（p0.05）。表1：溶血空斑、T细胞增殖、HC50及NK细胞活力空斑T细胞HC50NK细胞正常204.6037.920.340.17123.692.0835.4411.05白高165.6057.560.330.10132.815.4760.9912.18白中299.10107.070.330.21133.409.9870.3111.91发酵高338.90107.790.490.16143.138.5474.0012.76发酵中397.90138.040.470.19142.234.8576.359.67药物359.70148.

11、530.530.49142.2815.7479.3216.84 表2：吞噬实验和负重游泳结果足跖力竭时间（min）IL-2（ng/ml）正常0.460.0854.328.9816.603.75白高0.490.1571.234.4935.474.68白中0.510.1469.329.3431.234.77发酵高0.600.1388.999.0945.427.54发酵中0.690.1183.426.9239.545.39表3：吞噬指数和吞噬率吞噬指数吞噬率正常0.950.2054.607.75白高1.200.1266.404.03白中1.180.1371.106.26发酵高1.110.1064.6

12、04.43发酵中1.200.1468.103.753、讨论白参是一类性味甘平，微苦稍寒，具有补气生津、宁神益智功用的食药兼用的珍有菌菇3。在这里，我们用自制白参和购买的发酵白参来处理ICR小鼠，用细胞因子处理组作为阳性对照，用生理盐水处理组作为空白对照，来研究白参和发酵白参在提高小鼠免疫力和增强抗疲劳能力中的作用4。从我们的实验结果中看到，中浓度的自制白参可以明显的增加溶血空板的形成、IL2水平、足跖增厚程度、吞噬率和吞噬指数也明显高于空白对照，NK细胞的活力和半溶血素（HC50）也明显强于空白对照，但是对T细胞的增殖没有明显作用。由此我们可以推测，白参通过对增加NK细胞的活力和半溶血素的含量

13、来增强小鼠免疫力；但是高浓度的白参并没有这种效果。高中两个浓度的发酵白参对NK细胞的活力、T细胞的增殖和半溶血素（HC50）、IL2水平、足跖增厚程度、都有很明显的促进作用，溶血空板的形成、吞噬率和吞噬指数也明显高于空白对照，而且高中两个浓度的发酵白参的作用间没有明显的差异。因此我们推测，发酵白参通增加NK细胞的活力、半溶血素的含量以及促进T细胞的增殖来增强了小鼠的免疫力。通过进一步分析，我们可知中高浓度的发酵白参增强小鼠免疫力的能力强于中高浓度的自制白参（P0.05）。综合以上结果，我们得知白参和发酵白参可以增强小鼠的细胞免疫力，且发酵白参的效果好于自制白参。另外，用两个浓度自制白参和发酵白

14、参处理后，小鼠在负重游泳试验中的力竭时间明显长于空白对照组，这就说明白参和发酵白参能够增强小鼠的抗疲劳能力。进一步比较白参和发酵白参，可知发酵白参小鼠的力竭时间长于白参，这同样证明了发酵白参提高小鼠抗疲劳能力的效果好于白参。由此可知，中浓度的白参和高中两个浓度的发酵白参能够增强小鼠的细胞免疫免疫力、提高小鼠的抗疲劳能力，且发酵白参的效果好于白参。参考文献1 朱立平，陈学清免疫学常用实验方法M北京：人民军医出版社，2003：1372 田维毅，王文佳中性红法检测巨噬细胞吞噬功能的实验条件的优化J贵阳中医学院院报2009,31（2）：23-253 陆志敏，陆北路白参菌特性与人工栽培技术J食药用菌2011,1：894 崔敬爱，胡耀辉林蛙油软胶囊小鼠负重游泳试验的研究J食品科学，205,26（8）：373-3755 龚梦鹃，王立为，刘新星大小鼠游泳实验方法的研究概况J中国比较医学杂志，2005,15（5）:311-314