平板菌落计数法教案.ppt

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1、平板菌落计数法 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望v学习平板菌落计数法。学习平板菌落计数法。实验目的实验目的实验原理实验原理v1编号编号v取无菌平皿取无菌平皿9个，分别用记号笔标明个，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6（稀释度）各（稀释度）各三套。另取三套。另取6支试管，加入支试管，加入9ml无菌水，依次标明无菌水，依次标明10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。v2稀释稀释v水样：用水样：用1ml无菌试管吸取无菌试管吸取1ml样品

2、精确加入加有样品精确加入加有9ml无菌水的无菌水的10-1的试管中，此即为的试管中，此即为10倍稀释。将倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸取另一吸管吸取10-1菌液菌液1ml，精确加入，精确加入0.5ml至至10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀释。其余倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。依次类推。v固体样品：准确称取固体样品：准确称取10g上午膜样，加入上午膜样，加入90ml无菌水中，充分混匀无菌水中，充分混匀后即为后即为10倍稀释。将倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸试管振荡，使其充分混匀。用

3、另一吸管吸取取10-1稀释液稀释液1ml，精确加入，精确加入0.5ml至至10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀倍稀释。其余释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。依次类推。三三.实验步骤实验步骤v3加样倒平板：加样倒平板：v用不同的灭菌吸管分别吸取用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、10-5、10-6稀稀释液释液1ml，分别注入，分别注入3个灭菌培养皿中。分别立个灭菌培养皿中。分别立即倾注约即倾注约15ml已熔化并冷却到已熔化并冷却到45左右的牛肉膏左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀（每稀

4、释度做水样与培养基充分混匀（每稀释度做3个）。另个）。另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。培养基凝固后，倒置于，做空白对照。培养基凝固后，倒置于37温箱中培养。温箱中培养。三三.实验步骤实验步骤v4计数计数v 培养培养24-48h后，取出培养平板，并按下后，取出培养平板，并按下列公式进行计算：列公式进行计算：v 每毫升中菌落形成单位（每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀同一稀释度的平均菌落数释度的平均菌落数x稀释倍数稀释倍数v 注：注：一般选择每个平板上长有一般选择每个平板上长有30-300个个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。三三.实验步骤实验步骤v三作业：三作业：v 计算菌体含量计算菌体含量(单位单位:cfu/mL)。