液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用.ppt

《液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用.ppt（33页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、Agilent LC-MS/MS 64201内容1.LC-MS/MS的基本原理的基本原理2.方法开发流程及优化方法开发流程及优化3.电离影响因素与溶液化学电离影响因素与溶液化学4.注意事项注意事项2022/12/121.LC-MS/MS的基本原理的基本原理2022/12/13ESI ion source42022/12/15Front-end ion optics2022/12/16Quadrupole2022/12/17Collision cell HexapoleQuadrupole：ion focusingOctopole：ion transmissionN2 0.5 ml/min202

2、2/12/18Rear quadrupole and detector2022/12/19Pumping system2torr 10-2 10-3 10-5 torr torr torr102.LC/MS/MS 方法开发流程1 电离模式的选择2 查阅文献，参考样品前处理的技术路线和色谱分离条件、质谱参数条件等。3 MRM 参数优化 使用标准品优化 fragmentor 和collision energy4 离子源参数的优化（源温度、流速）5 LC分离方法的优化，1-3 min为理想2022/12/111MRM 参数优化o扫描（MS2 Scan）2022/12/112选择离子监测（SIM）优化

3、毛细管出口电压（fragmentor），保证母离子的传输效率2022/12/113子离子扫描（Product Ion Scan）使用已优化好的fragmentor，选择定性定量离子，优化碰撞能量（collision energy），得到/优化子离子的响应，每个化合物一般选择两个强度最高的子离子，分别作定性离子与定量离子2022/12/114多反应监测（MRM）使用已优化好的 fragmentor 和collision energy，优化Dwell time2022/12/115Dwell time 优化2022/12/116Dwell time 优化2022/12/117Dynamic MRM

4、o标准MRM对多组分，出峰时间波动，灵敏度低。odMRM适合应用于多组分同时分析，自动优化分配Dwell Time，兼顾灵敏度与数据采集质量！2022/12/118the number of MRMs at any time are many fewer than with time segment methods,allowing much faster MS cycle times2022/12/1193.电离影响因素与溶液化学o溶液的化学性质 流动相 被分析物 基质的性质o喷针 内部针的位置 针的状况 雾化气压力o高电压电极 毛细管和喷雾室电压设置 毛细管和喷雾室高压部件的状态 绝缘体的

5、状态20离子模式的选择o正离子ES模式 适合于碱性样品，amines，amides，aminoacids，antibiotics等 酸性流动相o负离子ES模式 适合于酸性样品，acids，hydroxyls，含强负电性基团 有杂原子，可失去质子。如COOH、OH 中性偏碱性流动相o可正可负 比较灵敏度2022/12/121溶剂匹配o反相溶剂：甲醇、乙腈、水o兼容液质的盐（常用）：甲酸、乙酸(0.01-1%)、甲酸铵、乙酸铵(小于20 mM)o慎用：三氟乙酸等o不兼容盐 硼酸盐、硫酸盐、磷酸盐（不挥发或易形成离子对）2022/12/122流动相中添加剂o正离子模式-甲酸、乙酸和三氟乙酸（慎用）o

6、负离子模式-氨水o正离子负离子-甲酸铵或乙酸铵（不高于20 mM）2022/12/123电喷雾-离子对的形成 对正离子检测，由于离子对的形成，是溶液或气相中的离子中和！M+H+A-M+H+A0 A=B,S,P 有利于中性产物 A=甲/乙酸盐 有利于生成带电物质o离子对强度：B,S,P 三氟乙酸 乙酸盐，甲酸盐2022/12/124电喷雾-离子对的形成 对负离子，由于离子对的生成，使溶液或气相中的离子中和！M-H-+C+M-H+C0 C=Na,K,Li 有利于中性产物 C=NH4+有利于带电物质2022/12/125ESI:离子竞争机制o表面竞争 被分析离子与电解质离子转换为气相离子的竞争使被分

7、析物相应降低。o电荷竞争 OAc+AH+HOAc+A2022/12/1264.注意事项o使用0.22 um孔隙滤膜过滤o流动相含水50%,适当提高干燥气体的流速和温度o选择母离子：准分子离子，M+H+、M-H-优先，避免选择加和离子M+Na+,所需能量较低，灵敏度好。o子离子的选择：高质量端的特征离子。2022/12/127气相离子的产生o表面活性高（具低溶剂化能）的离子优先转移至雾滴表面，最终转变为气相离子-竞争机制o应采用表面活性低的缓冲盐o低浓度的挥发性的酸、碱及缓冲盐2022/12/128小结：流动相的考虑o金属离子缓冲盐影响离子化o表面活性剂影响去溶剂化o离子对试剂可以离子化，而导致

8、高背景噪音o强离子对试剂可与待测物反应，导致待测物不能离子化oTEA 干扰正离子模式(m/z102)oTFA 扰负离子模式(m/z113)o增塑剂（邻苯二甲酸酯）背景干扰，(m/z149,315,391)2022/12/129API质谱图的解释o检测到的离子种类依赖于溶剂添加剂和分析所用的条件。正离子检测-M+H+酸性条件-M+Na+，M+K+-M+NH4+有铵盐缓冲盐-M+X+X=溶剂或缓冲溶液中的阳离子-2M+H+高浓度时形成的二聚体离子-M+H+S+溶剂加合离子负离子检测-M-H-碱性条件-M+X-X=溶剂或缓冲溶液中的阴离子-M-H+S-溶剂加合离子2022/12/130名义分子量和平均分子量o对于分子C6H3Cl3o平均分子量为o6(12.01115)+3(1.000797)+3(35.453)oMW=181.428o6(12.000)+3(1.00078)+3(34.9989)=179.9990精确质量/单同位素质量o180.0 daltons-名义分子量 nominal mass2022/12/131精确质量计算器o在Masshunter定性分析软件中，有“mass calculator”可以计算精确质量。o另：o可以计算精确质量2022/12/132谢谢2022/12/133