水质微生物检测基础.ppt

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1、微生物基微生物基础知知识培培训宁波安联检测有限公司微生物的定微生物的定义 微生物微生物（microorganism,microbe）:存在于自然界存在于自然界中的一群体型中的一群体型细小、小、结构构简单、肉眼看不、肉眼看不见，必，必须借助于特殊借助于特殊仪器放大后才能器放大后才能观察到的微小生物察到的微小生物按其按其结构、化学构、化学组成及生活成及生活习性可分性可分为:原核类:仅有原始核有原始核质，无核仁或核膜，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如胞器很不完善。如细菌、菌、放放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体 真核类:细胞核的分化程度胞核的分化程度较高

2、，有核膜、核仁和染色体，高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、整。如真菌（酵母菌和霉菌）、原生原生动物、藻物、藻类非细胞类:体体积微小，能通微小，能通过除菌除菌过滤器。如病毒和器。如病毒和朊病毒等病毒等按其致病性可分按其致病性可分为:病原性微生物非病原性微生物微生物的特点微生物的特点个体小个体小,面面积大：大：小于小于0.1mm。肉眼不可。肉眼不可见。分布广分布广,种种类多（多（10万多种）万多种）：自然界中到：自然界中到处都都有，如水、空气、土壤等有，如水、空气、土壤等,土壤中的数量最多。土壤中的数量最多。代代谢强，转化快：化快：发酵乳糖的酵乳糖的细菌在菌在1小

3、小时内可分内可分解其自重解其自重100010000倍的乳糖；倍的乳糖；产朊假假丝酵母合酵母合成蛋白成蛋白质的能力比食用公牛的能力比食用公牛强10万倍万倍生生长旺，繁殖快：旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代内就可以繁殖一代适适应性性强，易，易变异异（耐（耐药性性产生的原因）生的原因）葡萄球菌葡萄球菌 酵母菌（芽痕）酵母菌（芽痕）酵母菌（芽痕）酵母菌（芽痕）棒状杆菌棒状杆菌棒状杆菌棒状杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌弧状菌弧状菌弧状菌弧状菌链球菌链球菌链球菌链球菌菌落菌落单位位菌落菌落单位位-CFU 由由单个菌个菌

4、细胞或几个同种菌胞或几个同种菌细胞在培养基上胞在培养基上长成肉成肉眼可眼可见的菌落，每个菌落就是的菌落，每个菌落就是1CFU光滑型菌落光滑型菌落粗糙型菌落粗糙型菌落微生物的分布微生物的分布土壤：土壤：是微生物生活的最适是微生物生活的最适环境境水：水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二次于土壤的微生物分布、定居的第二场所所空气空气：空气中的微生物主要来源于空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及有微生物菌体及孢子子的灰的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，微生物大多数是腐生性的，还来源于人和来源于人和动物，它物，它们大多数是通大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原呼吸道排出的，其中也包含有病原

5、微生物，微生物，悬浮在大气中。浮在大气中。微生物的微生物的类群和形群和形态结构构 一、一、细菌菌 细菌是一菌是一类细胞胞细而短、而短、结构构简单、细胞壁胞壁坚韧，以二分裂方式无性，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。繁殖的原核微生物，分布广泛。1.细菌的形菌的形态与与结构构 （1）球菌球菌 多数球菌直径在多数球菌直径在1微米左右，外微米左右，外观呈球形呈球形或近似球形。由于繁殖或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排分裂平面不同可形成不同的排列方式，分列方式，分为双球菌、双球菌、链球菌、葡萄球菌等。球菌、葡萄球菌等。（2）杆菌杆菌 形形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多多数呈直

6、杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈数呈分散存在，也有的呈链状排列，分状排列，分为棒状杆菌、棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。状杆菌、球杆菌等。（3）螺形菌螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺螺杆菌。杆菌。细菌菌虽小，仍具有一定的小，仍具有一定的细胞胞结构和功能。构和功能。细胞壁、胞壁、细胞胞膜、膜、细胞胞质和核和核质等各种等各种细菌都有，是菌都有，是细菌的基本菌的基本结构。构。球菌球菌(coccus)脑膜炎奈瑟菌膜炎奈瑟菌肺炎肺炎链球菌球菌杆菌杆菌(bacillus)不同杆菌的大小、不同杆菌的大小、长短、粗短、粗细很不一致。很不一致。炭疽芽胞杆菌炭疽

7、芽胞杆菌 3-10 m3-10 m大大中中大大肠埃希菌埃希菌 2-3 m2-3 m小小布布鲁菌菌 0.6-1.5 m0.6-1.5 m细菌的繁殖菌的繁殖 细菌生菌生长速度很快，一般速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度分裂一次。若按此速度计算，算，细菌群体将菌群体将庞大到大到难以想象的程度。但事以想象的程度。但事实上由于上由于细菌繁殖中菌繁殖中营养物养物质的逐的逐渐消耗，有害代消耗，有害代谢产物的逐物的逐渐积累，累，细菌不可能始菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。保持高速度的无限繁殖。经过一段一段时间后，后，细菌繁殖速度逐菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增减慢，死亡菌数增多，活菌增

8、长率随之下降并率随之下降并趋于停滞。于停滞。热原与内毒素原与内毒素许多多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生生热原。原。热原是微量即可引起恒温原是微量即可引起恒温动物体温异常升高物体温异常升高的物的物质的的总称。称。主要物主要物质为细菌内毒素、胞壁菌内毒素、胞壁酰二二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某和某些些药物（物（类固醇）等。固醇）等。1、细菌内毒素一般指革菌内毒素一般指革兰阴性阴性细菌菌细胞壁的胞壁的结构成分，主构成分，主要是脂多糖。要是脂多糖。2、细菌内毒素生物学活性可分菌内毒素生物学活性可分为两两类：一是致病作用，一

9、：一是致病作用，一是保是保护性反性反应。3、其他理化特性、其他理化特性耐耐热性：性：120加加热4h，可破坏，可破坏98%。180加加热2h或或250加加热30min，才可，才可彻底破坏。底破坏。滤过性：其体性：其体积小，小，约在在15nm之之间，故能通，故能通过滤器器进入入滤液液中。中。具有水溶性及不具有水溶性及不挥发性。性。能被能被强酸、酸、强碱和氧化碱和氧化剂破坏破坏消毒与消毒与灭菌菌下列下列术语常用于表示物理或化学方法常用于表示物理或化学方法对微生物的微生物的杀灭程度程度 消毒：消毒：杀死物体上病源微生物的方法死物体上病源微生物的方法,并不一定能并不一定能杀死死细菌菌的芽胞。消毒所用的

10、的芽胞。消毒所用的试剂称称为消毒消毒剂。灭菌：菌：杀灭物体上所有微生物的方法。物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，菌比消毒要求高，包括包括杀灭细菌芽菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。在内的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑菌：抑制体内或体外抑制体内或体外细菌的生菌的生长繁殖。常用的抑菌繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。菌的繁殖。防腐：防腐：防止或抑制体外防止或抑制体外细菌生菌生长繁殖的方法，繁殖的方法，细菌一般不菌一般不死亡。同一种化学死亡。同一种化学药品在高品在高浓度度时为消毒消毒剂，低，低浓度度时常常为防腐防腐剂。无菌：无菌：不存在活的不

11、存在活的细菌。防止菌。防止细菌菌进入人体或其他物品的入人体或其他物品的操作技操作技术，为无菌操作。无菌操作。消毒与消毒与灭菌菌l辐射射灭菌法菌法 1、紫外紫外线：波波长200-300nm的紫外的紫外线具有具有杀 菌作用。穿透物菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超距离照射物不超过1.0米米为宜宜 2、电离离辐射射 高速高速电子、子、X射射线、射射线 3、微波、微波 波波长1mm1ml热力灭菌法：使蛋白使蛋白质、酶及核酸永久性破及核酸永久性破环，细胞膜溶胞膜溶解，解，导致致细胞胞发生不可逆生不可逆转的死亡。的死亡。1、干干热灭菌法菌法采用灼采用灼烧或干

12、或干热空气空气灭菌菌，使用方便，使用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌菌。2、湿湿热灭菌法菌法利用利用热蒸汽蒸汽杀死微生物。死微生物。高高压蒸汽蒸汽灭菌：利用高温高菌：利用高温高压蒸汽蒸汽进行行灭菌的方法菌的方法，蒸汽的穿透力，蒸汽的穿透力较热空气空气强可以可以杀死一切微生物，死一切微生物，包括包括细菌的芽菌的芽孢，真菌的，真菌的孢子或休眠体等耐高温子或休眠体等耐高温的个体的个体。最可靠最适用最广泛的。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。菌方法。水水质微生物微生物 采采样自来水：自来水：现将自来水龙头用火焰烧灼3min，灭菌；再打开水龙头防水5mi

13、n（常用的水龙头可以 防水23min）；采样水置于无菌锥形瓶中，采样总量占锥形瓶的80%左右，以便摇匀。水源水：水源水：选取可疑及有代表性的水域，一般距离水面1015cm采样；河道水采样时，将瓶口朝向、水流方向，在指定位置打开瓶盖。采样结束后，样品冷藏运输，尽快检测。样品处理、实验准备、实验步骤及报告详见作业指导书染色染色革兰氏染色法革兰氏染色法 革兰染色法是丹麦内科医生革兰染色法是丹麦内科医生 Christain GramChristain Gram于于18841884年创立的一种细菌年创立的一种细菌复染色复染色方法，已有方法，已有130130多多年的历史，仍在广泛使用。年的历史，仍在广泛使

14、用。结晶紫结晶紫卢戈碘液液卢戈碘液液95%乙醇乙醇复红复红G-菌：菌：类脂质类脂质多多多多肽聚糖肽聚糖少少少少G+菌：菌：肽聚糖肽聚糖多多多多交联度大交联度大类脂质类脂质少少少少通透性学说通透性学说、等电学说、化学学说v鉴别细菌：把细菌分成鉴别细菌：把细菌分成G G+和和G G-两大类。两大类。v选择抗菌药物：例如选择抗菌药物：例如G G+球菌球菌对青霉素敏感对青霉素敏感,G G-杆菌杆菌耐耐药。药。v了解细菌的致病机理：了解细菌的致病机理：G G+菌大多产生外毒素菌大多产生外毒素,G,G-菌产菌产生内毒素。生内毒素。革兰染色的步骤革兰染色的步骤 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色紫紫碘酒

15、红，分分半半碘酒红，分分半半意义灭菌接种环灭菌接种环无无菌菌操操作作 细菌合适 细菌较多接种环取盐接种环取盐水水3ul23ul2滴滴,水滴间距小于水滴间距小于2cm2cm。取取 菌菌 苔苔 少少 许许（1mm1mm小小菌菌落落半半个个）与与盐盐水水混混匀匀，涂涂成成大于大于1cm1cm2 2均匀涂膜均匀涂膜。涂毕涂毕环移至涂膜中环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。裂，接种环烧灼灭菌。无无菌菌操操作作固定固定 FixationFixation涂片涂片smearsmear干燥干燥drydry手手持持载载玻玻片片一一端端，涂涂膜膜朝朝上上，两两个个涂涂膜膜快快速速通通过过火火焰焰外外层层3 3次，时间次，时间2 23 3秒钟。秒钟。促促使使菌菌体体蛋蛋白白质质凝凝固固，固固定定在在载载玻玻片片上上，以以免免染染色色水水洗洗的的时候，细菌被水洗掉。时候，细菌被水洗掉。Thanks