KJ 202105 水产品中地西泮残留的快速检测 胶体金免疫层析法.pdf

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1、书 书 书食 品 快 速 检 验 方 法犓犑 水产品中地西泮残留的快速检测胶体金免疫层析法 发布国家市场监督管理总局发 布书 书 书水产品中地西泮残留的快速检测胶体金免疫层析法范围本方法规定了水产品中地西泮胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于鱼、虾中地西泮的快速定性测定。原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中地西泮经有机试剂提取，固相萃取柱净化，浓缩复溶后，地西泮与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（线）颜色深浅比较，对样品中地西泮进行定性判定。试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为

2、规定的二级水。试剂 甲醇（）。乙腈（）。二水合磷酸二氢钠（）。十二水合磷酸氢二钠（）。氯化钠（）。合成硅酸镁吸附剂（），。石墨化碳黑吸附剂（），。注：合成硅酸镁吸附剂和石墨化碳黑吸附剂，颗粒较细，谨防吸入。参考物质地西泮参考物质的中文名称、英文名称、号、分子式、相对分子质量见表，纯度。注：或等同可溯源物质。表地西泮参考物质的中文名称、英文名称、犆犃犛号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称号分子式相对分子质量地西泮 溶液配制复溶溶液：磷酸盐缓冲液（），称取 氯化钠（）、十二水合磷酸氢二钠（）、二水合磷酸二氢钠（），用水溶解并定容至。犓犑 标准溶液配制 地西泮标准储备液（）：精密称取地西泮参考物

3、质（），精确至 ，置于小烧杯中，用甲醇（）溶解，定量转移至 容量瓶中，再用甲醇（）定容，摇匀，配制成 地西泮标准储备液，冷藏避光保存，有效期个月。地西泮标准中间液（）：精密量取地西泮标准储备液（）加入 容量瓶中，用甲醇（）定容，摇匀，配制成地西泮标准中间液，冷藏避光保存，有效期个月。地西泮标准工作液（）：精密量取地西泮标准中间液（）加入 容量瓶中，用甲醇（）定容，摇匀，配制成 地西泮标准工作液，临用现配。标准溶液为外部获取时，管理及使用应符合相关规定。材料 地西泮胶体金免疫层析试剂盒：一般包含金标微孔、胶体金检测卡，适用于水产品，按产品要求保存。固相萃取柱：固相萃取柱套筒（体积）中塞入筛板，称

4、取 合成硅酸镁吸附剂（）加入柱内，使填料密实且表面水平，再塞入筛板压实，即完成固相萃取柱制备。若用于检测虾、黄鳝等含色素的样品，则填料为 合成硅酸镁吸附剂（）、石墨化碳黑吸附剂（），混合均匀加入柱内，使填料密实且表面水平，再塞入筛板压实，制成固相萃取柱。或者使用同类商品化固相萃取柱。仪器和设备 电子天平：感量为 和 。注：当实验室可获得符合规定的标准溶液时，无需配备感量为 的天平。离心机：转速 。移液器：量程为、。涡漩仪。氮吹仪。孵育器：可控温 。胶体金读数仪（可选）。环境条件温度 ，相对湿度。分析步骤 试样制备水产品取可食用部分，称取约 具有代表性的样品，充分均质混匀，分别装入洁净容器作为试

5、样和留样，密封，标记。留样置于 保存。犓犑 试样提取准确称取试样（精确至 ）于 离心管中。加入 水、乙腈（），涡漩混合。加入约 氯化钠（），涡漩混合。离心，上清液备用。固相萃取柱（）使用前加入乙腈（），使乙腈流过并弃去以活化固相萃取柱。将离心管中上清液转移至固相萃取柱（），过柱并用空气压力将柱内残留液体全部吹出，收集所有样液。样液于 水浴氮气吹干，加入 复溶液（），涡漩混合，作为待测液。注：可用洗耳球或其他等效装置产生空气压力。测定步骤测试前，将未开封的金标微孔和检测卡恢复至室温。吸取 待测液置于金标微孔（）中，反复抽吸次，使微孔中试剂充分混匀，于孵育器中 孵育。吸取 混匀液垂直滴于检测卡（）

6、加样孔中，于孵育器中 反应，根据示意图判定结果，在 内进行判读。质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。空白试样应经参比方法检测且未检出地西泮。空白试验：称取同类基质空白试样，按照 和 步骤与样品同法操作。加标质控试验：准确称取同类基质空白试样（精确至 ）置于 离心管中，加入 地西泮标准工作液（），使试样中地西泮含量为 ，按照 和 步骤与样品同法操作。结果判定要求采用目视法对结果进行判读，目视判定示意图如图和图所示。注：也可使用胶体金读数仪判读，读数仪的具体操作与判读原则参照读数仪的使用说明书。比色法 无效控制线（线）不显色，表明不正确操作或检测卡无效。阳性结果检测线（线）不显色或

7、检测线（线）颜色比控制线（线）颜色浅，表明样品中地西泮含量高于方法检测限，判为阳性。阴性结果检测线（线）颜色比控制线（线）颜色深或者检测线（线）颜色与控制线（线）颜色相当，表明样品中地西泮含量低于方法检测限，判为阴性。犓犑 图目视判定示意图（比色法）消线法 无效控制线（线）不显色，表明不正确操作或检测卡无效。阳性结果控制线（线）显色，检测线（线）不显色，表明样品中地西泮含量高于方法检测限，判为阳性。阴性结果检测线（线）与控制线（线）均显色，表明样品中地西泮含量低于方法检测限，判为阴性。图目视判定示意图（消线法）质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。结论当检测结果为

8、阳性时，采用参比方法进行确证。犓犑 性能指标 性能指标计算方法按照附录执行。检出限：。灵敏度：。特异性：。假阴性率：。假阳性率：。其他本方法所述试剂、试剂盒信息、操作步骤及结果判定要求是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，应对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比方法为 出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法液相色谱质谱质谱法（包括所有的修改单）。犓犑 附录犃（规范性）快速检测方法性能指标计算表性能指标计算方法见表。表犃 性能指标计算方法样品情况检测结果阳性阴性总数阳性犖 犖 犖犖 犖 阴性犖 犖 犖犖 犖 总数犖

9、犖 犖 犖 犖 犖 犖犖犖或犖 犖 显著性差异（）（犖 犖）（犖 犖），自由度（犱犳）灵敏度（狆）狆犖 犖 特异性（狆）狆犖 犖 假阴性率（狆犳）狆犳犖 犖 灵敏度假阳性率（狆犳）狆犳犖 犖 特异性相对准确度（犖 犖）（犖犖）注：犖为任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：犖 表示第一行，第一列；犖表示所有的第一行，犖 表示所有的第二列；犖 表示第一行，第二列。由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果。由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：江西省食品检验检测研究院。本方法验证单位：浙江省食品药品检验研究院、四川省食品药品检验检测院、天津海关动植物与食品检测中心、南昌海关技术中心、江西省产品质量监督检测院。本方法主要起草人：张威、郭平、张文中、沈泓、姚欢、兰伟、王栋、肖亚兵、占春瑞、万承波、万建春。犓犑