蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测方法.docx

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1、团体标准蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测方法编制说明二。二二年三月一日(1)准确称取样品1005mg (干样)至15 mL带盖螺旋圆底离心管中，轻轻敲 打试管以使样品位于底部(鲜样那么称取0.5 g至试管中)；(2)加入500 |liL蒸僧水于各试管中，等电饭煲水沸后放入，蒸煮20min,然后 保温10 min；(3)取出试管，等试管冷却至室温时，加入2 mL KC1-HC1溶液(4.226),利 用手持式匀浆机(最小档，40 s)将样品捣碎；(4)力口入100|liL胃蛋白酶(422.11),置于旋转摇床37第消化1 h；(5)加入4 mL马来酸钠缓冲液混匀，然后加入4 mL

2、a-胰淀粉酶(4.2210), 混匀；(6)旋紧试管盖，置于旋转摇床(20转/min),于37。(2消化过夜(16h)；(7)取出试管,4000 rpm (1500 g)离心 10 min;(8)小心去除上清液，然后加入2mL50%乙醇，旋涡振荡，将沉淀充分重悬，然后再加入6 mL50%乙醇，混匀，4000 rpm离心10 min；(9)小心去除上清并重复重悬离心两次；(10)小心去除上清液，倒置试管去除多余水分，并用滤纸将试管壁上多余水分 小心吸去；4.522抗性淀粉测定(1)在每个试管中加入1 mL水，将沉淀充分重悬，然后再加入1 mL4MKOH 溶液(422.4),轻轻混匀后，置冰水浴中

3、振荡20 min；(2)每个试管中加入8 mLi.2 M醋酸钠缓冲液C4.2.2.2),混匀后，立即加入 0.1mL3300 U的AMG (4.228),混匀后置水浴摇床,50 30 min,期间取出 两次混匀；(3)取出试管，擦干试管外表水份，4000 rpm离心10 min；(4)吸取10 |1L上清液至96孔板中，加入190piLGOPOD试剂(试剂盒)；(5)葡萄糖标准曲线制备：吸取0, 1,3,5,7,9, 10|iLlmg/mL葡萄糖标准试剂 至96孔板中，缺乏lOpiL的分别用0.1M醋酸钠溶液(422.3)补足至lOpiL, 加入 190 jliLGOPOD 试剂；(6) 50

4、。(2温育20 min后，冷却，利用酶标仪测定510 nm处吸光值；结果计算根据葡萄糖标准样品绘制标准曲线，根据标准曲线方程计算试样中的葡萄糖溶 液，然后根据以下公式计算RS含量：RS, g/100g 样品=Cxl0.3x162 100x180 W式中:10C一 根据标准曲线得出的葡萄糖浓度（mg/mL）10.3试样体积（mL）162/180 葡萄糖淀粉转化系数精度两次独立测定结果标准误差不大于平均值的10%o五、主要试验（或验证）的分析、综合报告，技术经济论证，预期的经济效果（一）中国水稻抗性淀粉含量情况分析日常食用的稻米RS含量很低，热米饭中RS在1%以下，即使冷米饭中RS 含量也在2%以

5、下。目前，国内外已报道的熟米中抗性淀粉含量大多低于5% （Ritudomphol and Luangsakul, 2019）o Hu 等（2004）对直链淀粉含量在 0- 26.7%之 间的常规釉稻、粳稻和杂交稻品种（组合）的热米饭RS含量进行了测定，发现 2/3左右材料的RS含量在0.4%以下，1/4材料RS含量在1%左右，仅极个别品 种RS含量接近3%外。Sun etal. （2017）利用CRISPR/Cas9对BEIIb进行基因编辑，获得了生米抗 性淀粉含量高达9.8%的水稻转基因系。杨瑞芳等（2005）利用BEIIb的一个功 能标记CAPs/Spel进行辅助筛选，从降糖稻1号和密阳2

6、3,秀水123和沪稻55 杂交群体中筛选获得了 3个高RS水稻新品系（生米中RS含量分别为12.17%, 11.82%, 11.53%）o吴清清（2019）利用CRISPR/Cas9技术，对粳稻嘉花1号的 SSIIIa和PPDK基因进行编辑，获得的SSIIIa突变系抗性淀粉含量尽量较亲本大 幅上升，但其绝对值仅0.4%左右。云南省农科院与本课题组合作，选育了米饭 抗性淀粉含量高达10%以上的功能型釉稻“功米3号”（曾亚文等，2009）。上海 农科院利用化学诱变、常规杂交和花培技术，从花晴稻中选育的降糖稻1号其生 粉中的抗性淀粉含量高达14.86% （朱辉明等，2010）。随后，他们以“降糖稻1

7、 号”为母本，与秀水123杂交，从中选育了生米中抗性淀粉含量为13.1%的“降糖 稻2号”，后定名为优糖稻2号并于2019年通过上海市作物品种审定委员会审定 （沪审稻2019015）（杨瑞芳等，2020）o由此可知，普通水稻抗性淀粉含量都较 低，通过生物技术手段和诱变技术可对水稻抗性淀粉进行改良。本团队已有近20年的抗性淀粉方面的研究，本课题组利用诱变技术，率先 报道了熟米饭中抗性淀粉含量达7.53%的高抗性淀粉水稻RS111 （杨朝柱等,112005),并培育出首个高RS含量的早釉稻浙辐201 (沈伟桥等，2006)而后又 获得了系列高抗性淀粉水稻，米饭中含量高达15% (Shu et at

8、, 2007,2009; Sun et al., 2018)o在此基础上，通过杂交育种选育了米坂中抗性淀粉含量高达10.17% 的糖尿病专用粳稻“宜糖1号”,该稻米能显著降低模型糖尿病小鼠餐后30min和 60min的血糖水平(张宁等，2011)。课题组利用获得的高抗性淀粉亲本材料， 配制了一系列杂交组合，其中“浙大两优宜糖釉1号” 2020年通过了浙江省品 种审定委员会审定。参考文献：曾亚文，杨树明，杜娟，吴殿星，普晓英，房亚南.高抗性淀粉稻米防治慢性病研究进展.农 业科技通讯,2009, 1: 37-39沈伟桥，舒小丽，张琳琳，夏英武，吴殿星.加工型功能早釉稻新品种“浙辐201”的选育与特

9、 性.核农学报，2006, 20 (4): 312-314施标，孙志敏，白建江，杨瑞芳，张小峰，朴钟泽.优糖米对n型糖尿病人餐后血糖的影响. 中国粮油学报,2014, 29(1): 1-5, 35王蕾蕾，何芳，樊慧茹，叶丽佳，张片红.高抗性淀粉大米血糖生成指数测定及对糖尿病患 者血糖调控的干预研究.营养学报,2017, 39 (2): 97-199吴清清.利用CRISPR/Cas9系统编辑水稻淀粉合成相关的SSIIIa与PPDK的定点突变研究. 上海师范大学,2019杨朝柱，李春寿，舒小丽，张志转，张磊，赵海军，马传喜，吴殿星.富含抗性淀粉水稻突变 体的淀粉特性.中国水稻科学,2005, 19

10、 (6): 516-520杨瑞芳，白建江，方军，曾威，朴钟泽，李刚燮.分子标记辅助选择高抗性淀粉水稻新品种. 核农学报,2015,29(12): 2259-2267杨瑞芳，朴钟泽，万常照，李钢燮，龚长春，白建江.高抗性淀粉水稻新品种优糖稻2号的选 育及其特征特性.中国稻米，2020, 26 (1):94-95张宁，孙健，熊海铮，徐开盛，舒小丽，吴殿星.高抗性淀粉含量糖尿病专用粳稻的选育及其 特征特性.中国稻米，2011, 17(6): 63-65赵力超，于荣，曹素芳，曹庸，刘欣.宜糖米高抗性淀粉河粉的开发研究.食品工业科技, 2013, 17: 264-268朱辉明，白建江，王慧，李茂柏，郝再

11、彬，朴钟泽.高抗性淀粉粳稻新品系稻米淀粉特性.中 国农学通迅,2010, 26 (14): 108-112Shu XL, Jia LM, Gao JK, Song YL, Zhao HJ, Nakamura Y, Wu DX. The influences of chain length of amylopectin on resistant starch in rice (Oryza sativa L.). Starch-Starke, 2007, 59(10): 504-509.Shu XL, Jia LM, Ye HX, Li CD, Wu DX. Slow digestion prop

12、erties of rice with different content of resistant starch. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(16): 7552-7559Sun J, Wang Y, Zhang X, Rasmussen S K, Jiang X, Song W, Wu D, Shu X. 2018. Dependence of physiochemical, functional and textural properties of high - resistant starch rice on

13、 endogenous nonstarch polysaccharides. Int J Food Sci Technol, 53(4): 1079-1086.Sun Y, Jiao G, Liu Z, Zhang X, Li J, Guo X, Du W, Du J, Francis F, Zhao Y. 2017. Generation of high-amylose rice through CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis of starch branching12enzymes. Frontiers Plant Sci, 8: 298

14、.（二）抗性淀粉含量测定方法水稻籽粒中80%左右成份为淀粉，一般蒸煮后食用，即食用米饭而非生米或 生粉。目前我国有一个测定稻米抗性淀粉含量的标准，即稻米及制品中抗性淀 粉的测定-分光光度法（NY2638-2014）,该标准与美国谷物化学协会AACC 32-40 Resistant starch in starch samples and plant materials 标准测定步骤基本一致。基于 AACC法标准，Megazyme公司开发了抗性淀粉试剂盒法。上述检测方法均未提 及稻米的蒸煮，按照上述方法测定的抗性淀粉含量均为生米中的抗性淀粉含量， 不能准确反映米饭中抗性淀粉含量。本标准主要涉及建

15、立一种检测稻米蒸煮后抗性淀粉含量的检测方法。该标准 基于本团队测定抗性淀粉含量测试方法的基础上进行改良，针对米饭蒸煮进行了 方法优化：首先利用电饭煲进行米饭的常规蒸煮，再利用手持式匀浆仪进行模拟 咀嚼，然后再进行淀粉酶解，抗性淀粉测定检测步骤，测定结果更符合实际需求 并且匀浆仪的使用极大地降低了实验误差，提高了检测的准确性。目前，本单位已经使用该方法进行了超过1万次实验样品的检测分析，验证 了方法的可行性和稳定性。参考文献：1JNY/T2638-2014稻米及制品中抗性淀粉的测定-分光光度法.2AACC 32-40 Resistant starch in starch samples and

16、plant materials.（三）技术经济论证随着人们生活方式和饮食习惯的改变，全球糖尿病患者急剧增长，已成为 21世纪危害人类健康的三大杀手之一。据健康中国行动估算，我国糖尿病患病 率12.8%,患者1.5亿；血脂异常患病率18.6%,患者1.6亿。因此，通过改良 我国主粮作物水稻功能品质，进而改善膳食结构是解决这一问题的关键手段之 -0抗性淀粉是在健康人小肠中不被消化吸收的淀粉及其降解物的总和，具有降 低血糖的独特生理功能和热量低等显著的优点，对预防肥胖、便秘等也有一定的 功效。因此，培育与选择符合日常消费习惯的蒸煮加工用高抗性淀粉水稻不但可 以满足“糖尿病和肥胖症”的个性化需求，而且

17、也是吃出健康的关键。六、与有关的现行法律、法规和强制性标准的关系13本标准编制过程中，遵守和符合相关法律法规和强制性标准要求，参考了国 家、行业有关标准，与相关的现行法律、法规和强制性标准相协调，无冲突。规 范性引用文件包括：GB/T 1.1-2020标准化工作导那么第1局部：标准化文件的结构和起草规那么GB/T1354-2018 大米NY122优质食用稻米GB/3523谷类、油料作物种子水分测定法GB/T5505-2008粮油检验 灰分测定法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T603-2002化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备七、重大分歧意见的处理经过和依据本标准起草过

18、程中没有重大分歧意见。八、标准作为强制性标准或推荐性标准的建议建议为推荐性标准。九、贯彻标准的要求和措施建议本标准为我国首次制定，建议由检验检测相关行业标准化管理机构组织贯彻 本标准的相关活动，利用各种活动（如工作组活动、行业协会的管理和活动、专 家培训、标准化技术刊物、网上信息、产品认证等）尽可能在水稻育种、种植、 产品甄别、检测行业相关单位和机构宣贯该标准。在贯彻实施上建议先在某一水 稻主产区、特定高抗性淀粉水稻生产加工企业和特定检测机构进行实施，并逐渐 带动行业内其他企业。实施过程中出现的问题和改进建议反响到起草组，以便进 一步对本标准进行修改完善。十、废止现行有关标准的建议无。十一、其

19、他应予说明的事项无。14蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测 方法标准编制小组2022年3月15蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测方法一、标准制定的必要性水稻是世界上最主要的粮食作物之一，提供了全世界50%以上人口的能量需 求。在我国，90%以上人口以水稻为主粮。随着社会经济的开展和作物产量的稳 步提升，人们的生活方式和膳食偏好也在逐步改变。饮食对人类健康影响巨大， 膳食相关慢性病发病率逐年上升，受到公众的广泛关注。最新调查结果显示，我 国糖尿病患者从2007年到2017年持续增加，按美国糖尿病协会诊断标准，我国 糖尿病患病率高达12.8%,糖尿病前期加权患病率高达35.

20、2%。糖尿病是我国重 要的公共卫生问题之一。研究认为，高碳水化合物膳食是导致糖尿病的重要因素。 而膳食碳水化合物提供了人体总热量摄入的45-65%o因此，通过改良水稻营养 特性进而改善膳食结构是解决这一问题的重要手段。在含水量14%的精米中，淀 粉占其含量的70-80%。淀粉依其消化特性分为快速消化淀粉、慢消化淀粉和抗 性淀粉(Resistant starch, RS)抗性淀粉指”在健康者小肠中不被吸收的淀粉及其 降解产物“，与血糖生成指数(GI)负相关，主要可分为4类：物理包埋抗性淀 粉(RS1)、抗性淀粉颗粒(RS2)、回生淀粉(RS3)和化学修饰淀粉(RS4)O 自2016年国务院印发并

21、实施“健康中国2030”规划纲要战略以来，人们营养 保健意识不断增强，RS作为平安健康的新型功能食品，越来越受人们的青睐。 高RS食品对于心血管疾病，糖尿病、结肠癌等膳食相关的慢性病具有很好的预 防和控制作用。然而，作为我国主粮的水稻，RS含量很低，热米假中RS在1% 以下，即使冷米饭中RS含量也在2%以下。培育高RS水稻品种是目前水稻育 种的重要方向之一。然而，到目前为止，国内外至今没有水稻中抗性淀粉含量 高、低指标的划分标准，也没有高抗性淀粉水稻品种的抗性淀粉含量指标定义 和规范。尽管有稻米抗性淀粉的测定标准方法及食品中抗性淀粉含量的检测标 准，但都是对样品直接检测，即对生的未蒸煮加工水稻

22、，这与日常食用米保需 蒸煮加工的实际差异完全不符。因此，本标准的制定，将首次提出水稻高抗性淀 粉含量指标，制定高效、准确且统一的稻米抗性淀粉测定标准，对更好指导育种 家选育高抗性淀粉水稻新品种，满足人民群众对生活质量和健康水平的新需求， 确保我国营养导向型农业的健康开展来说重大意义。综上所述，制定蒸煮加工用高抗性淀粉水稻中抗性淀粉含量指标和检测方法 对水稻产业的健康开展是十分必要的，对培育高抗性淀粉水稻品种和开发健康的特色专用食品具有广阔的市场前景和良好的社会效益。二、标准编制原那么及依据1 .按照GB/T 1.12020标准化工作导那么第1局部：标准化文件的结构和 起草规那么要求进行编写。2

23、 .参照相关法律、法规和规定，在编制过程中着重考虑了科学性、适用性 和可操作性。三、工程背景及工作情况（一）任务来源2020年9月，习近平总书记提出了 “四个面向”的重要指示精神，在此前 “三个面向”基础上，新增了 “面向人民生命健康”。主粮作物水稻应承载保障 人民营养健康、生命健康使命，功能稻米在“满足”人民群众“吃饱、吃好” 到“引领”人民群众“吃得健康、吃出健康”中具有重要作用。而且功能稻米也 是水稻产业开展到一定历史阶段的必然产物。2017年国家主要农作物品种审 定标准（国品审【2017】1号）首次在高产品种之后提出绿色优质品种和特殊 用途品种的新类型，使我国的农作物育种导向发生了重大

24、变化，功能性水稻品种 迎来了前所未有的开展机遇。根据中国国际科技促进会标准化工作委员会团体标准管理方法的有关规 定，经中国国际科技促进会标准化工作委员会及相关专家技术审核，批准蒸煮 加工用高抗性淀粉水稻中抗性淀粉含量指标和测定方法团体标准制定计划，计 划编号为：CI2022019o本标准中国国际科技促进会标准化工作委员会提出，中 国国际科技促进会归口。3 据计划要求，本标准完成时限为5个月。（二）标准起草单位本标准的编制工作由浙江大学、浙江绿巨人生物技术、海南浙江大 学研究院、浙江大学山东（临沂）现代农业研究院、浙江大学中南研究院、浙江 省农业科学院、浙江省中药研究所、浙江绿巨人生物技术、杭州

25、赋禾数 字科技、衢州市三易易生态农业科技共同完成。浙江大学负责标准文档起草及相关文件的编制等工作。浙江绿巨人生物技术 、海南浙江大学研究院、浙江大学山东（临沂）现代农业研究院、浙江 大学中原研究院、浙江省中药研究所、浙江省农业科学院、杭州赋禾数字科技有 限公司等共9家单位作为参与单位共同完成，负责标准中重要技术点的研究和建 议，并参与标准内容的讨论。牵头单位与参与单位为此专门成立蒸煮加工用高 抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测方法团体标准起草小组，负责本标准的 各项工作。（三）编写人员与分工编写人员：舒小丽、吴殿星、徐开盛、王寅、孙健、张宁、孟雨莎、张晓 艳、郑楠楠、詹宇、徐应英、姜章、沈易姓

26、名工作单位职称/职务承当任务舒小丽浙江大学/海南浙江 大学研究院教授主持人，负责工程整体规划设计、 标准起草和规范性审核吴殿星浙江大学教授系主 任副主持人，协助工程整体规划设 计、确定标准内容和检测方法，起 草标准徐开盛浙江绿巨人生物技术 总经理蒸煮加工用高抗性淀粉水稻制品 开发王寅浙江省农业科学院副研究员、 副主任分析国内外蒸煮加工用水稻中抗 性淀粉含量水平孙健浙江省中药研究所高级工程师负责抗性淀粉含量检测方法优化张宁浙江大学副研究员负责抗性淀粉含量检测孟雨莎浙江省农业科学院助研，博士负责抗性淀粉含量检测张晓艳浙江大学山东（临沂） 现代农业研究院副研究员稻米及其制品中抗性淀粉含量检 测验证郑

27、楠楠浙江大学中原研究院助理研究员稻米及其制品中抗性淀粉含量检 测验证詹宇浙江绿巨人生物技术 总经理蒸煮加工用高抗性淀粉水稻种植徐应英衢州市三易易生态农 业科技总经理蒸煮加工用高抗性淀粉水稻种植姜章杭州赋禾数字科技有 限公司总经理高抗性淀粉米大米休闲产品开发4沈易浙江大学博士负责标准规范性审核上报（四）标准研制过程及相关工作计划1 .标准起草组成立2021年8月20日召开第一次会议成立标准起草组。标准起草牵头单位浙江 大学，与参加单位海南浙江大学研究院、浙江绿巨人生物技术、浙江大 学山东（临沂）现代农业研究院、浙江省中药研究所、浙江省农业科学院经讨论 研究，建议编制“蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性

28、淀粉含量指标和检测方法”团体 标准。2021年9月1日在浙江杭州召开第一次标准工作会议，标准起草小组正 式成立。在本次会议上，局部标准起草人对国内外水稻抗性淀粉含量指标研究现 状、检测方法和规范，高抗性淀粉水稻种植、加工及消费情况进行了深入、全面 分析，并对拟制定标准内容进行探讨，确定了编制原那么，明确了各单位任务分工 及标准制修订工程实施计划。2 .收集查阅相关资料、实地调研标准编制人员按既定分工从不同方面收集数据和查阅相关文献、书籍等资 料，主要包括国内外抗性淀粉及高抗性淀粉水稻的术语、定义、范围，抗性淀粉 及蒸煮加工用高抗性淀粉水稻的研究现状、高抗性淀粉水稻中抗性淀粉含量指 标，以及水稻

29、及制品中抗性淀粉测定方法等。标准起草小组还先后对浙江大学、浙江绿巨人生物技术、浙江省农 业科学院等单位进行实地调研，详细的了解蒸煮加工用水稻中抗性淀粉含量测定 的样品制备工艺、测试工艺、检测方法。3 .编制标准讨论稿根据前期资料收集、整理和实地调研情况，按照本标准制定的编制原那么，参 照GB/T 1.1-2020标准化工作导那么 第1局部：标准化文件的结构和起草规那么 的要求，2021年9月下旬完成标准讨论稿的编制。4 .召开第二次标准工作会议2022年2月11日在浙江杭州召开第二次标准工作会议。本次会议对意见稿 中，从不同角度讨论蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量下限确实定和探讨水稻中抗性

30、淀粉的检测方法、判定规那么等相关问题。会后根据讨论结果，修改标 准稿件，并撰写标准编制说明。5 .召开第三次标准工作会议2022年2月28日在浙江杭州召开第三次标准工作会议。本次会议对标准文 本和编制说明进行最后确定讨论。会后根据讨论结果，修改稿件及编制说明，形 成公开征求意见稿。6 .公开征求意见2022年4月30日标准起草组将蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量 指标和检测方法“公开征求意见稿”以电子邮件的方式分别发送给农业农村部稻 米及制品监督检测中心、中国水稻研究所、中国农业科学作物科学研究所、南京 农业大学、中国科学院遗传与发育生物研究所等单位同行业专家；同时由中国国 际科技促进会审

31、查后提交全国标准信息平台公示；为减少疫情期间不必要的人员 聚集，专家组采用线上交流，通讯评议的方式提出修改意见及建议，计划2022 年5月底召开专家评审会。四、标准编制原那么和确定标准主要内容（一）编制原那么本标准严格按照GB/T 1.1-2020的要求和规定编写编制。协调性原那么。本文件旨在规范蒸煮加工用高抗性淀粉水稻抗性淀粉含量指标 和检测方法。在内容上力求与相关现有标准相协调，充分参考GB/T1354-2018、 NY122、AACC32-40. NY/T2638-2014等相关内容，科学制定蒸煮加工用高抗性 淀粉水稻抗性淀粉含量指标和检测方法。必要性原那么。标准编写过程中坚持必要性原那

32、么，仅对高抗性淀粉水稻进行了 术语规范和定义。适用性原那么。标准编写过程中坚持适用性原那么，从服务育种、种植和加工应 用利益出发，充分考虑行业开展需求，保证标准内容方便被其他标准或文件引用 且可操作性强。科学性原那么。在标准制定过程中充分调研与高抗性淀粉水稻相关的研究、检 测和生产企业，归纳总结共性指标和因素，综合全面考虑，并广泛吸收专家意见, 逐一对标准各局部内容进行科学规范。（二）主要内容本标准主要内容如下：1范围本标准规定了抗性淀粉及高抗性淀粉水稻的术语、定义、范围，高抗性淀粉大米 中抗性淀粉含量指标的科学确定及大米中抗性淀粉含量的测定方法。2规范性引用文件以下文件对于本文件的应用是必不

33、可少的。但凡注日期的引用谁的，仅注日期的 版本适用于本文件，但凡不注日期的引用文件，其最亲版本（包括所有修订单） 适用于本文件。GB/T 1.1-2020标准化工作导那么第1局部：标准化文件的结构和起草规那么GB/T1354-2018 大米NY122优质食用稻米GB/3523谷类、油料作物种子水分测定法GB/T5505-2008粮油检验 灰分测定法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T603-2002化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备3术语及定义3.1 抗性淀粉（Resistant starch）是指在健康人体小肠中不被消化而在大肠中被全部或局部的淀粉。3.2 高抗性淀粉大

34、米常规方式蒸煮后米饭的抗性淀粉含量N8%的水稻品种（系）。4测定方法4.1 原理体外模拟人体消化，大米经唾液淀粉酶，胃蛋白酶和胰淀粉酶过夜消化后，非抗 性淀粉被水解成葡萄糖，然后利用乙醇终止反响，消化后残渣即为粗抗性淀粉。 然后用KOH将未被消化的淀粉溶解，再利用淀粉葡萄糖甘酶将抗性淀粉水解 成葡萄糖。生成的葡萄糖与葡萄糖氧化酶/过氧化物酶（GOPOD）试剂会产生显 色反响，形成复合物，在510nm处会产生特征吸收峰。测定其在510nm处吸光 值，利用葡萄糖标准液绘制标准曲线，计算出样品中产生的葡萄糖量，再利用葡 萄糖淀粉转化系数将其转化为淀粉含量，即可得出抗性淀粉含量。4.2 试剂和材料4.

35、2.1 试剂除特殊说明外，所用试剂均为分析纯试剂。试验所用水符合GB/T6682规定实验 用水4.2.1.1 氯化钾(KC1)4.2.1.2 氢氧化钠(NaOH)4.2.1.3 氯氧化钾(KC1)4.2.1.4 马来酸钠4.2.1.5 冰醋酸(HAc)4.2.1.6 二水合氯化钙(CaCb2H2O)4.2.1.7 磷酸二氢钾(KH2Po4)4.2.1.8 盐酸(HC1)4.2.1.9 无水乙醇4.2.1.10 胃蛋白酶(1:3000, Biotopped)4.2.1.11 a-胰淀粉酶(A3176, sigma)4.2.1.12 淀粉葡萄糖普酶(AMG) (A10115, sigma)4.2.

36、1.13 葡萄糖测试试剂盒4.2.2 试剂配制1.1.1.1 酸钠缓冲液(0.1 M,pH6.0)：准确称取23.2 g马来酸，力口 1600mL水 溶解后，用4 M (160 g/L) NaOH溶液定容至pH6.0o再加入0.6 g氯化钙 (CaCl2-2H2O)溶解后定容至2L。该溶液在4。(2下可稳定12个月。1.1.1.2 醋酸钠缓冲液(L2M,pH3.8)：将692mL冰醋酸加入至800mL水中, 用4MNaOH调pH至3.8,定容至1 L。该试剂在室温下可稳定12个月。1.1.1.3 醋酸钠缓冲液(0.1M,pH4.5)：将5.8 mL冰醋酸加入至800mL水中,用 4MNaOH调

37、pH至4.5,定容至1 L。该试剂在4。(2可稳定2个月。1.1.1.4 KOH溶液(4M)：准确称取44.8 g KOH至150 mL水中，搅拌溶解后定 容至200mL。试剂在室温下可稳定12个月。1.1.1.5 1溶液(0.1 M)：量取8.4 mL浓盐酸，加适量水并稀释至1000 mL。1.1.1.6 1-HC1溶液(MM,pHL5)：称取7.35g氯化钾，溶于适量水中，然后 用盐酸溶液高pH至L5o1.1.1.7 无水乙醇，50%： 5稀释500 mL无水乙醇至1 L。80%：稀释800 mL无 水乙醇至1L。溶液室温下可稳定12个月。1.1.1.8 3300 U/mLAMG：用 pH

38、4.5 NaAc 缓冲液(422.3)配制，4。(2 下可稳定 5 年。1.1.1.9 300 U/mLAMG：用 0.1 M 马来酸钠缓冲液(pH6.0) (4.221)将 2 mL 3300U AMG C4.2.2.8)稀释至22 mL,然后分装在小离心管中，-2(TC保存备用，试 剂-20。(2下可稳定5年。1.1.1.10 a-胰淀粉酶(10 mg/mL) +AMG (3 U/mL)：称取1 g胰腺a-淀粉酶，用 100 mL马来酸钠缓冲液(4.221)悬浮，振荡5 min。加入1 mLAMG (300 U/mL) (422.9),充分混合。1500g离心lOmin,取上清液。现用现配

39、。1.1.1.11 胃蛋白酶(10%)：称取10.0g胃蛋白酶溶于KCL-HCL溶液，并定容至 lOOmLo4.3 材料待测样品须放干燥通风片或有空调的实验室内1周左右，使样品的水分含量为 131%,含水量的测定根据GB3523或利用全自动水分测定仪测量。碾米精度到达GB/T1354-2018三级米及以上水平。4.4 仪器和设备4.4.1 旋风式磨粉机4.4.2 冷冻干燥机4.4.3 分析天平(精度0.1 mg)4.4.4 pH 计4.4.5 电饭煲4.4.6 手持式匀浆机4.4.7 水浴摇床4.4.8 翻转摇床4.4.9 具盖螺纹圆底离心管(15 mL, 16X25 mm)4.4.10 离心机4.4.11 酶标仪(可用96孔酶标板，510 nm)4.4.12 容量瓶(100 mL, 1000 mL, 500 mL,250 mL)4.4.13 移液器(1 mL, 10似,200|11)4.4.14 磁力搅拌器4.4.15 全自动水分测定仪4.5 分析步骤4.5.1 试样准备(1)用旋风磨粉机磨碎，过150|im筛子，混匀，保存于自封袋中密封备用。(2)利用全自动水份测定仪或根据GB/T5497测定试样中水份。4.5.2 测定4.5.2.1 水解非抗性淀粉