[卵巢癌的基因治疗]什么是基因治疗.docx

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1、卵巢癌的基因治疗什么是基因治疗 R711 A 1672-3783（2010）11-0077-02 卵巢癌是女性生殖系统常见的三大肿瘤之一，仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，但是因其早期无明显临床症状，致使等患者出现症状后再就医往往为时已晚，所以其死亡率是妇科恶性肿瘤的首位。近年来，随着分子生物学的发展, 基因治疗作为一种新的医学技术得以快速发展，为肿瘤的治疗开创了新的领域。下面介绍几种具有应用前景的卵巢癌基因治疗策略。 1 诱导细胞凋亡基因疗法 诱导细胞凋亡基因疗法是一种通过选择性表达或导入某些外源基因诱导肿瘤细胞凋亡,增加对化疗的敏感性的有效基因疗法。Survivin是最近新发觉的一种凋亡抑制基因,

2、属于凋亡抑制蛋白(inhibition apop tosis p rotein, IAP) 家族的新成员，全部分化成熟的组织中均检测不到其表达，而大多数常见肿瘤组织内如肺癌、胃癌、宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢癌中表达异样上升1，其与恶性肿瘤的发生、发展、血管生成、肿瘤的预后关系亲密。 Wall等2应用细胞分子生物学技术通过抑制Survivin基因蛋白的磷酸化过程来提高肿瘤细胞的凋亡率,从而达到治疗肿瘤的目的。Survivin的多态序列中, 34位氨基酸为苏氨酸,是细胞周期素依靠蛋白激酶P34cdc22的磷酸化点,该位点的磷酸化对维持Survivin的凋亡抑制功能特别重要。以丙氨酸取代后的突变体(T

3、34A)可以使凋亡抑制功能丢失,以此突变体转染Hela癌细胞,突变体的高度表达可以诱导转染细胞的自发性凋亡。经证明,新一类的抗癌药物GGTls中的GGTI-298 和GGTI-2166通过阻抑PBK/AKT和survivin途径来诱导顺铂敏感和耐药的人类卵巢上皮性癌细胞凋亡。在GGTI-298和GGTI-2166治疗后, PBK和AKT激酶水平降低,生存素表达明显削减。构成上活化的AKT2和/或生存素的异位表达能明显地复苏被GGTI-298诱导凋亡的人类癌细胞。其前的探讨显示Akt调整生长因子诱导的生存素,而p53抑制生存素的表达。然而,构成上活化的AKT2却不能复苏GGTIs下调生存素,再进

4、一步, GGTIs在野生型p53和p53不足的卵巢癌细胞株中均能抑制存活素的表达并诱导细胞程序性死亡。这些资料表明GGTI-298和GGTI -2166不依靠于p53而针对PBK/AKT和survivin 类似途径来诱导凋亡3。 2 抑制细胞信号传导通路疗法 探讨表明,表皮生长因子受体(EGFR)在很多恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的发生、转移、预后等亲密相关。Shih等在脑细胞瘤中发觉了原癌基因neu，Padly等证明该癌基因编码的185kDa的蛋白质P185neu与EGFR的基因一样同CerbB具有同源序列，故将EGFR基因命名为CerbB-1（HER-1），neu基因命名为CerbB-2（

5、HER-2）。近年来，又接连发觉了CerbB-3（HER-3）CerbB-4（HER-4），组成了EGFR家族。此家族成员均是具有酪氨酸蛋白激酶活性（TPK）的生长因子受体。 CerbB-2的过度表达与卵巢癌患者生存期、生存率及卵巢癌的耐药性的发生亲密相关4。Herceptin作为人源性单克隆抗体, 与CerbB-2 的细胞外部分有高度亲和力, 能靶向结合于表达CerbB-2的卵巢癌细胞, 阻断配体介导的细胞信号传导，影响上皮细胞生长，也可通过诱导抗体介导的细胞毒作用杀伤肿瘤细胞。Mauricio等通过将Herceptin 与肿瘤坏死因子联合应用于阳性的CerbB-2卵巢癌细胞系,发觉Herc

6、eptin能通过抑制酪氨酸激酶来增加肿瘤坏死因子引起的细胞凋亡效应。临床应用Herceptin治疗CerbB-2阳性卵巢癌已取得良好的治疗效果。 3 多重耐药基因疗法 卵巢癌化疗失败的根本缘由是产生化疗药物耐药性。探讨发觉, 在对顺铂、阿霉素耐药的卵巢癌细胞株中72%的细胞出现了MDR1 基因的过度表达。抑制MDR1 基因的表达, 不仅使细胞内化疗药物浓度增加，也增加细胞对药物的敏感性5。 卵巢癌多细胞球体多药耐药糖蛋白Pgp表达的上升与细胞周期素依靠性激酶抑制剂p27呈正相关6。p27可使细胞周期蛋白E和细胞周期依靠性蛋白激酶2的活性受到抑制，使细胞周期停滞在G1期，对细胞周期进行负调控。X

7、ing7将p27ASON经脂质体包袱转染人卵巢癌细胞A2780、CAOV3，用锥虫蓝解除试验法和流式细胞仪检测细胞凋亡率来分别比较单层细胞p27ASON转染前后培育的多细胞球体的紫杉醇敏感性，结果表明，p27ASON可以下调p27的表达，防止细胞间黏附并促进细胞增殖而下调Pgp的表达，从而肯定程度逆转卵巢癌对紫杉醇化疗的耐药性。 4 突变补偿疗法 突变补偿是消退主要致肿瘤基因,取代变更的肿瘤抑制基因,或干扰某些生长因子及其受体的功能。将特异性基因导入肿瘤细胞,订正肿瘤细胞的基因缺陷,使细胞周期停滞、诱导细胞程序性死亡或使肿瘤细胞对化疗和放疗敏感。编码人类免疫缺陷腺病毒与野生型P53 (SCH5

8、8500)重组体腹膜注射有良好疗效,既平安又可耐受,并且联合铂类化疗在复发性卵巢癌患者有更好的效果。 目前探讨最为深化的抑癌基因为P53。在30%79%卵巢癌中出现了P53异样。试验证明野生型P53基因转染到有P53 基因突变的卵巢癌细胞,既抑制肿瘤的生长,又具有旁观者效应2。2005年Ad-P53基因治疗获准进行期临床试验，现我国重组人P53腺病毒（今又生）广泛应用于临床卵巢癌的治疗并取得了良好的治疗效果。 5 反义基因疗法 它是利用反义技术设计与异样激活有害基因及其mRNA互补的反义寡核苷酸,特异性封闭这些基因使其不表达或低表达,从而达到削减基因产物,抑制细胞恶变的作用。由于该疗法是从核酸

9、角度着眼,故而是一种最根本、最有前途的治疗方法。Fei R8针对CerbB-2基因和c-myc基因,联合抗基因治疗,靶向CerbB-2和c-myc,抑制卵巢癌细胞COC(1)细胞增殖和CerbB-2及c-myc基因表达。c-raf-1可被ras基因激活之外还存在独立的激活途径:可被酪氨酸激酶src与JAK1、蛋白激酶C、神经酰胺活化的蛋白激酶等激活。因而c-raf-1是EGFR介导的信号转导系统上的关系基因之一9,c-raf-1是志向的基因治疗靶点。CerbB-2 ASODN 与CerbB-2 mRNA 5端编码区互补,Craf-1 ASODN 与Craf-1 mRNA 3端非编码区互补。Pi

10、rollo等针对raf-1、H-ras、CerbB-2基因设计合成的硫代ASO,不仅能抑制卵巢癌细胞生长,而且能增加对放疗的敏感性。 Zaffaroni等10在体外和体内的探讨中利用针对Survivin的反义寡苷酸治疗肿瘤,发觉肿瘤的生长速度减慢,并且可以提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,如紫杉醇、顺铂和鬼臼乙叉甙及比照射和免疫治疗的敏感性。探讨表明靶向抑制survivin基因表达在肿瘤治疗中有巨大的潜在价值。 等针对端粒酶hTERT设计合成反义脱氧寡核苷酸,对卵巢癌细胞系SKOV3及ES-2进行反义基因治疗,能通过抑制端粒酶活性,增加细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等抑制卵巢癌细胞生长,与CDDP合

11、用能增加对癌细胞的杀伤作用。 基因治疗为卵巢癌的治疗呈现了一个极有希望的前景。学者们正针对卵巢癌的基因治疗中存在的一些问题,探讨载体改良,增加目的基因靶向性等,迎接根治卵巢癌的挑战。信任随着人类基因组安排的完成,分子生物学等学科的进一步深化发展,人类将开拓卵巢癌基因治疗的新纪元。 参考文献 1 Kim HS, Shiraki K, Park SH. Exp ression of survivin in CN andinvasive squamous cell carcinoma of uterine cervixJ. Antican2cer Research, 2002, 22 (2A):80

12、5-808 2 WallNR, OConnorDS, Plescia J, et al. Sup ression of survivingphosphorylation on Thr34 by flavop iridol enhances tumor cell ap-optosisJ. Cancer Res, 2003, 63(1):230-235 3 Dan HC, J ing K, Coppola D, et al. Phosphatidylinositol-3-OHkinase /AKL and survivin pathways as critical targets for gera

13、-nylgeranyltransferase I inhibitor-induced apop tosis J. Onco-gene, 2004, 23(3):706-715 4 Menendez JA, Vellon L, Mehmi I, et al. Inhibition of fatty acid synthase (FAS) suppresses HER2/neu (erbB- 2) oncogene overexpression in cancer cellsJ. PNAS, 2004, 101(29):10715 10712 5 Zhang T, Guan M, Jin HY,

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15、n species.Biol Chem,2001,276(20);17420-17428 7 Xing H,Li J,Gao QL,et al.impact of cychn-dependent kinase inhibitor p27 on resistance of ovarian cancer multicelluar spheroids to taxol.Zhonghua Yi Xue Za Zhi,2003,83(1):37-41 8 Fei R, Shaoyang L. Combination antigene therapy targetingc-myc and c-erbB (

16、2) in the ovarian cancer COC (1) cellline J. GynecolOncol, 2002, 85(1):40-44 9 Yuan B,MiR. Antisenseoligodeoxynucleondes ofhumantelomerse catalyticsub-unitinhibitstelomeraseactivity andproliferationin SKOV3 and COC1.Chin JObstetGynecol,2002,37(4):198-201 10 Zaffaroni N, Daidone MG. Survivin exp ression and resistance toanti-cancer treatments:perspectives for new therapeutic interventionsJ. Drug Resist Updat, 2002, 5(2):65-72 作者单位：215123 苏州工业园区娄葑医院妇产科(江苏 苏州)