[不同厂家清开灵注射液指纹图谱研究]指纹图谱.docx

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1、不同厂家清开灵注射液指纹图谱研究指纹图谱 姚金成赵绪元瞿延晖胡领 摘要：目的：比较不同厂家清开灵注射液的HPLC指纹图谱。方法：选择NUDEOSILC18色谱柱(4.6mm250mm，5m)，流淌相(A)甲醇-(B)0.5醋酸梯度洗脱，运行时间65min，检测波长255nm，测定清开灵注射液的指纹图谱。结果：标示出清开灵注射液17个共有峰，以黄芩苷作为参照峰，得出共有峰的相对保留时间和相对峰面积，用中药指纹图谱相像度计算软件计算得出其相像度在0.9以上。结论：不同厂家清开灵注射液的指纹图谱基本一样。可以利用指纹图谱对其进行质量限制。 关键词：清开灵注射液；指纹图谱；HPLC 清开灵注射液由安宫

2、牛黄丸经拆方而来，它由黄芩苷、栀子、金银花、水牛角等7味中药提取制成，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的作用，用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清等症。按国家药品监督管理局颁发的关于中药注射剂指纹图谱探讨的技术要求，本文建立了合适的方法对不同厂家清开灵注射液进行指纹图谱测定，用中药指纹图谱相像度计算软件，对所得的指纹图谱进行了相像度的计算。 1仪器与试剂 11仪器岛津LC-10A系列高效液相色谱仪(含LC-10ATVP泵，LC-10Ai泵，SPD-M10AVP检测器，CTO-10A柱温箱，Class-vp工作站)。 12试剂和样品 甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。黄芩苷比照品购

3、自中国药品生物制品检定所，清开灵注射液为4个不同厂家提的12批产品。 2 方法与结果 21样品的制备取清开灵注射液适量，用50甲醇稀释，通过0.45m微孔滤膜过滤，作为供试品溶液；取黄芩苷比照品适量，加50甲醇溶解，制成含黄芩苷100g/mL的溶液，作为比照品溶液。 22色谱条件及分析方法色谱柱：NUDEOSIL-C18色谱柱(4.6mm250mm，5m)流淌相：(A)甲醇-(B)0.5醋酸，梯度洗脱：0min：10甲醇，50min：100甲醇，65min：100甲醇；检测波长：255nm；流速：1.0mL/min；柱温：40，进样量20L。 23精密度试验取同一批号供试品溶液，连续进样6次，

4、结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一样，其相像度均大于95，符合指纹图谱探讨技术的要求。 24稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一样，其相像度均大于95，符合指纹图谱探讨技术的要求。 25重复性试验取同一批号供试品6份，按21项下制备供试品溶液，分别进样检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一样，其相像度均大于95，符合指纹图谱探讨技术的要求。 26样品测定取12批清开灵注射液，分别按供试品的制备方法制备供试液并检测，用中药指纹图谱相像度计算软件进行了分析，以黄芩苷的色谱

5、峰为参照物峰，其相对保留时间为41.9min，标示了清开灵注射液中17个共有峰，(S1-S3，S4-S6，S7-S9，S10-S12分别为4个不同厂家的3个批号产品的色谱图)，其相对保留时间与相对峰面积。 3探讨 色谱柱的选择：本试验比较了3个不同厂家的色谱柱，NUDEOSILCt8柱(250mm4.6 mm，5m)，PHENOMENEXC1818柱(250mm4.6mm，5m)。SINO-CHROM ODS(200mm4.6mm，5m)，SINOCHROM DOS色谱柱的柱效较差，大多数峰不能分开，NUDEOSILc18柱和PHENOMENEXc18柱的分别状况相近，综合考虑，选用NUDEO

6、SIL-C18柱作为本试验的色谱柱。 流淌相的选择：本试验先采纳了等度洗脱，发觉用强洗脱实力的流淌相时，出峰时间很早，且峰不能很好的分开，再用弱洗脱实力的流淌相时，出峰少，且出峰时间太迟；故采纳梯度洗脱，分别运用了乙腈一水，乙腈-0.5磷酸。乙腈-0.5醋酸，甲醇一水，甲醇-0.5磷酸，甲醇-0.5醋酸作用流淌相进行线性梯度洗脱，发觉用洗脱实力较弱的甲醇时峰的分别状况较乙腈好，在水相中加入磷酸或醋酸后，出峰明显增多，峰有较大的改善，而用醋酸时的基线较磷酸时平直，综合考虑，选用甲醇-0.5醋酸线性梯度作为本试验的流淌相。 检测波长的选择：本试验设定检测器从200-360nm波长范围内进行测定，在

7、低波段230nm以下时，色谱图的基线有较明显的飘移，而270nm以上时色谱峰明显的削减，故本试验选用了255nm作为指纹图谱的检测波长。 柱温的选择：试验发觉柱温在30以下时，内标物黄芩苷色谱峰与后面成分峰重叠，且45min左右的3个峰无法分别；故本试验选择柱温为40，使上述问题得以改善。 指纹图谱的相像度比较：利用中药指纹图谱相像度计算软件，以12批清开灵注射液的指纹图谱综合平均作为比照模板，计算12批样品的相像度，均大于0.9，说明不同厂家清开灵注射液的质量稳定。此软件推断具有客观性，削减人为误差，也削减了按以前指纹图谱统计方法来统计的工作量，值得推广。 从指纹图谱中可以看出，虽然都出现了

8、相应的成分峰，但是峰面积比值不尽相同。推断存在差别的缘由可能为所运用的原料或原料的提取方法不同，也可能是原料相同而在注射液的制备方面存在差异；同时也发觉有的厂家生产的制剂，不同的批号在含量上存在明显差异，提示在生产工艺或所用的清开灵注射液原料存在来源不稳定问题，中药必需在固定原药材产地及提取工艺的前提下，才可能保证中药的质量稳定可控。 4 展望 中药指纹图谱探讨一般分为两个阶段，在初级阶段，针对中药注射剂这一相对简洁的体系，充分利用指纹图谱这一现代科学技术手段表征中药注射剂的特性，表达成品的质量，以达到对工艺操作和原药材的质控；通过对大量注射剂的指纹图谱探讨，建立系统的测定方法和全面的指标限制

9、系数，找寻肯定的数学模型，最终达到指纹图谱的可操作、可控、稳定、显性和量化的目的，提高整个中药注射剂的质量限制水平，并以此抛砖引玉，逐步建立其它类中药制剂、中药复方制剂的指纹图谱。 在对中药指纹图谱的探讨进行到肯定阶段，得到相对完备的指纹性数据，相对合理的数学模型后，指纹图谱的探讨就应当进入探讨的高级阶段，即指纹特征和药效相关性探讨，指纹图谱的生物等效性的探讨。这也就是多维多息化学特征谱的探讨。所谓多维，是采纳多种分析仪器联用的模式，所得的多维指纹图谱；所谓多息，是指中药的特征谱应努力做到包括化学和药效两方面的信息，化学信息即上面提到的多维谱图，可采纳有效部位来解决包含药效信息这个问题。这样得到的中药多维多息特征谱，包括了体现药效信息的多个有效部位的各种指纹图谱，进一步解决了中药制剂整体性和困难性的难题。 当然，药效相关的指纹图谱质量标准最能反映中成药质量，但由于中药的困难性，中药中活性成分多，目前的技术水平还不能将中药中全部的成分都探讨清晰，再加上指纹图谱质量限制技术的很多方面还有待完善，在这种状况下，要求制订与药效相关的指纹图谱好像为时过早。但假如以指纹图谱来限制工艺的稳定性、确保产品质量的稳定一样则切实可行，在生产上具有现实意义。