流式细胞仪B细胞T细胞比例高 [流式细胞仪检测急性病毒性心肌炎Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞的意义] .docx

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1、流式细胞仪B细胞T细胞比例高 流式细胞仪检测急性病毒性心肌炎淋巴细胞亚群及细胞的意义 摘要：目的视察急性病毒性心肌炎T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的意义，探讨其发病机制。方法 采纳流式细胞术对急性病毒性心肌炎病人(视察组)进行CD3、CD4、CD8和NK细胞淋巴细胞亚群检测，并设正常人群作比照组。结果视察组CD8和NK明显高于比照组(P0.01)，CD4和Th/Tc比值明显低于比照组(P0.01)，视察组CD3的改变不明显(P0.05)。结论急性病毒性心肌炎病人淋巴细胞亚群中CD4、CD8和NK细胞亚群异样增殖；而且Th/Tc比例失衡，揭示细胞免疫功能紊乱与急性病毒性心肌炎有关。 关键词

2、：病毒性心肌炎，急性；T淋巴细胞亚群；NK细胞；流式细胞术 中图分类号：R542.2 R256.2 文献标识码：B 文章编号：16721349(2007)04034802 急性病毒性心肌炎(acute viral myocarditis，AVMC)的发病机制至今未完全清晰，最近，病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)与细胞免疫功能的关系颇受关注。有资料认为，病毒性心肌炎心肌病变的形成，除病毒干脆作用外，还与自身免疫反应有关1。利用流式细胞仪对成人急性病毒性心肌炎病人淋巴细胞亚群的CD3、CD4、CD8、自然杀伤(NK)细胞等进行了检测，现将结果报道如下。 1资料与方法 1.

3、1 一般资料选择2005年1月2006年9月诊断为急性病毒性心肌炎病人23例(视察组)，均符合诊断急性病毒性心肌炎的标准2。其中男9例，女14例，年龄(1645)岁，平均27.5岁，监测前未接受激素及免疫调整剂治疗。比照组选取健康志愿献血者20名，其中女10名，男10名，年龄(2439)岁，平均31.1岁 1.2试剂与仪器 流式细胞仪为BD公司生产的FACSCal-ibur，离心机为法国JUNAN生产的CR422，检测淋巴细胞亚群的CD3、CD4、CD8、NK细胞的荧光标记抗体、红细胞溶解素均为BD供应。 1.3检测方法利用流式细胞分析技术进行检测。比照组和视察组分别于早晨抽取空腹外周血2 m

4、L，EDTAK2抗凝，于采血2 h内检测。取6个试管分别加入FITCCD45/PECD14、FITCIgGl/PEIgGl、FITCCD/PECD19、FITCCD3/PECD4、FITCCD3/PECDk、FITCCD3/PECD1656各20 uL，加EDTAK2抗凝全血100 uL，混匀置室温暗处20 min，然后加入红细胞溶解素2 mL溶解红细胞8min，300 r/min离心5 min，用PBS洗涤2次后，加0.5 mL含1多聚甲醛PBS固定，待测。仪器调整良好后测标本，以FITCIgGl/PEIgGl作为同型比照，计数1104个细胞。 l.4统计学处理采纳SPSS 10.0统计学软

5、件，数据以均数标准差 表示，两组比较采纳t检验，P0.05为差异有统计学意义。 2结果 与比照组相比，视察组CD3的改变不明显(P0.05)。CD4、Th/Tc比值明显低于比照组(P0.01)，CD8、NK细胞明显高于比照组(P0.01)。详见表1。 3讨论 病毒性心肌炎是病毒侵扰心脏引起的心肌实质或间质、局限性或充满性病变，其病理改变主要是广泛或散在的心肌细胞坏死及四周间质细胞浸润3。近年来此病发病率有增高趋势，大多数病人可完全复原正常心功能，少数病人临床症状可改善，但会遗留心功能不全，极少数病人进行性心脏扩大，可能转化为扩张性心肌病、慢性心力衰竭、死亡或需心脏移植4，而该疾病至今仍无特效疗

6、法，从病理生理学角度来看，早期以心肌细胞的干脆损伤为主，后期以免疫介导心肌细胞损伤为主，对其免疫机制及感染因素探讨，对治疗病毒性心肌炎有很大帮助。 通过分子模拟的原理证明了T细胞在心肌炎中的重要作用5。T细胞通过识别宿主和微生物的抗原表位而促进自身免疫反应的发生和发展。心肌损伤时，作为隐藏抗原的肌凝蛋白就会释放出来与免疫系统接触，激活对它有交叉反应的T细胞，从而引发自身免疫反应。 本组探讨显示病毒性心肌炎发病过程中，病人细胞免疫检测指标下降。细胞免疫主要包括T淋巴细胞、NK细胞和巨噬细胞等，T淋巴细胞是重要的免疫细胞，在自身免疫性炎症中起重要作用。在胸腺中发育成熟后进人外周血中。CD为细胞分化

7、抗原，是细胞表面的一种标记。依据T细胞不同的表面标记和功能可分为CD3、CD8和CD8亚群。本探讨中的CD4、Th/TcCD4/CD8比值明显低于照组(P6探讨多病毒感染的报道一样，CD4水平降低提示细胞免疫功能低下。CD8是参加抗肿瘤作用的主要效应细胞，CD4/CD8比值下降提示协助性T淋巴细胞损害。 在本探讨中，视察到NK细胞明显增殖活跃。Deguchi等7发觉，在急性病毒性心肌炎阶段，炎性细胞浸润可分为两个时相：第一时相即病毒感染后(39)d，主要为NK细胞和巨噬细胞浸润心肌并达到高峰；其次时相在病毒感染后(714)d，T细胞替代NK细胞和巨噬细胞成为主要浸润细胞。NK细胞是VMC早期最

8、主要的炎性浸润细胞，因其不受主要组织相容复合物分子限制，可干脆作用于病毒感染心肌细胞，主要通过释放穿孔素途径溶解细胞，达到清除病毒的作用，并通过分泌干扰素(INF)等细胞因子，进一步扩大反应。NK细胞的杀伤作用虽然参加了VMC的病理损害，但因其主要杀灭病毒感染心肌细胞，是VMC早期主要的抗病毒屏障，所以对心肌的病理损害是有限的。 由于利用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群对病毒性心肌炎探讨时间较短，且本探讨的样本量比较小，是本探讨的不足之处，这有待在后续进一步的探讨中改进提高。 参考文献： 1杨利格，安肃英，李会茹，等哮喘儿童T细胞亚群的动态视察J临床荟萃，2004，19(15)：881 2 中华心血

9、管病杂志编辑委员会心肌炎心肌病对策专题组关于成人急性病毒性心肌炎诊断标准和接受世界卫生组织及国际心脏病学会联合工作组关于心肌病定义和分类的看法J中华心血管病杂志，1999，27：405407 3李家宜心肌炎与心肌病J中国循环杂志，1994，9(3)：129131 4 Wheeler DSA formidable challenge：The diagnosis and treatment ofviral myocarditis in childrenJCrit Care Clin，2003，19(3)：365391 5Cunningham MWT cell mimicry in inflamma

10、tory heart diseaseJMol lmmunol，2004，40(11415)：11211127 6欧阳建华，方月，汪隽瑛，等多病毒感染时T细胞亚群、NK细胞、LAK细胞活性的改变及其意义J其次军医高校学报，2000，21(4)：340 7Deguchi H，Kitaura Y，Hay&shi TCellmediated immune cardiocyteinjury in viral myocarditis of mice and patientsJJpn Circ J，1989，53(1)：6177 作者简介：何世东(1971)，男，主管检验师，医学学士，现工作于河北省唐山市工人医院(邮编：063000)；张春来、高潮，工作于河北省唐山市工人医院。 (本文编辑郭怀印) 注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”