灵芝提取物质量的研究_灵芝提取物.docx

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1、灵芝提取物质量的研究_灵芝提取物 摘要：目的：对灵芝提取物质量进行了探讨。方法：采纳薄层色谱法，对灵芝提取物中灵芝有效成分进行了薄层定性鉴别；采纳了紫外可见分光光度法对其中的灵芝多糖进行了含量测定。灵芝多糖在波长为625nm处有最大汲取。结果：灵芝多糖在0.00250.0125 mg/ul间线性关系良好，r=0.9963,平均回收率为99.80,RSD为2.13。在TLC图谱中可检出灵芝的特征斑点。结论：本法操作简便、精确、重现性好，能够限制灵芝提取物质量。 关键词：灵芝 提取物 薄层色谱法 紫外可见分光光度法 Ganoderma lucidum extract quantity resear

2、ch Lin Juandan Abstract:Objective :Has conducted the research to the ganoderma lucidum extract quantity. Methods :Uses the thin layer chromatography,has carried on the thin layer qualitative distinction to in the ganoderma lucidum extraction ganoderma lucidum effective component; Used the ultraviole

3、t obvious spectrophotometric method to carry on the content determination to ganoderma lucidum polysaccharide.The ganoderma lucidum polysaccharide is 625nm place has the biggest absorption in the wave length. Results :The ganoderma lucidum polysaccharide the linear relations is good in during 0.0025

4、0.0125 mg/ul,r=0.9963,the average returns-ratio is 99.80 ,RSD is 2.13 .May pick out the ganoderma lucidum in the TLC atlas the characteristic spot. Conclusion :This law operation simple,accurate,the reproduction quality is good,can control the ganoderma lucidum extract quantity. Keywords :Ganoderma

5、lucidum Extraction Thin layer chromatography Ultraviolet obvious spectrophotometric method R91 A 1008-1879(2010)12-0004-03 灵芝提取物是将灵芝药材按优选出的提取工艺水提浓缩，喷雾干燥，干法制粒所得到的颗粒，为了规范药品质量，保证临床疗效，建立了灵芝提取物质量标准。 灵芝是一类大型真菌,属于担子菌类多孔菌科灵芝属。自20世纪70年头起，中国、日本、韩国等国都灵芝子实体、孢子粉和菌丝体等进行了比较全面系统的探讨，开展了菌类分类、栽培、发酵培育、化学、药理和临床等探讨工作。之后。

6、东南亚、印度尼西亚、新加坡、加拿大、法国、美国等国学者对灵芝也赐予极大的关注。近十年来,中外学者对灵芝子实体、菌丝体、孢子粉和发酵液及不同方法提取的有效成分进行了广泛深化的探讨,探讨水平已从整体器官水平深化到分子水平,并对灵芝扶正固本的机理进行了深化的探讨。 灵芝多糖是能够限制细胞分裂分化,调整细胞生长苍老的一类活性多糖,具有抗肿瘤、抗病毒、护肝、排毒、提高免疫力等多种生物活性。有文献表明，对于含有灵芝多糖的药材中灵芝多糖的提取采纳少量多次的水醇法，但含醇量应限制在80%以上1。水提醇沉法提取灵芝多糖的最佳工艺条件为提取时间为3小时，次数为4，温度为80，料液比为1:5,乙醇浓度为95%。具有

7、良好的重复性2。灵芝多糖提取优化工艺（加盐水提取，加入乙酸中和除盐或超滤除盐）及超声，可提高多糖得率iii。灵芝多糖作为一种生物非特异性免疫促进剂,现正为探讨者所关注。所以在提取分析时，以灵芝多糖作为含量测定的对象。 1 仪器与材料 11 试药。蒽酮（上海化学试剂选购供应站经销批号：225） 96%浓硫酸 无水葡萄糖比照品（汕头市光华化学厂批号：20000216）无水乙醇（分析纯）水（为双蒸水）灵芝五批：（第一批：广东深圳一样药业批号20070201 其次批：山东 家种第三批：东北家种第四批：广西 野生第五批：东北野生） 12 仪器。岛津UV-2201型紫外分光光度仪 METTLER AE20

8、0型电子天平 薄层层析用硅胶G板（青岛海洋化工分厂）电热恒温水浴锅（北京市长风仪器仪表公司型号：HH.SY21-Ni）离心机（上海安享科学仪器厂制造） 全自动高速冷冻离心机（湘西仪器仪表总厂科学仪器厂型号：GL20A）KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）苏泊尔微电脑电磁炉（浙江苏泊尔炊具股份有限公司型号：C19S01-A0） 薄层数码成像系统（型号：022.9610） 真空干燥箱（常州制药化工机械总厂有限公司） 2 方法与结果 21 药材检验（按2005年版中国药典）。 211 定性鉴别。 2111 供试品溶液制备:取上述五批灵芝药材各2g，加乙醇30ml,加热回流30

9、分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。 2112 比照品溶液制备：另取灵芝比照药材2g，同供试品溶液制备法制成比照药材溶液。 2113 薄层层析：吸取供试品和比照药材溶液各5ul，分别点于同一硅胶板上，以石油醚（6090）乙酸乙酯甲酸（1551）为绽开剂，取出，晾干。置紫外灯（365nm）下检视。在供试品色谱中，在与比照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 22 药材的含量测定（按2005年版中国药典）。 221 供试品溶液的制备：取本品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml,电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻

10、度，摇匀，精密量取10ml，加乙醇150ml,摇匀，4放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释到刻度。摇匀，即得。 222 测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，精密加入硫酸蒽酮溶液（精密称取蒽酮0.1g，加80%的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀）6ml,摇匀，置水浴锅中加热15分钟，取出，放入冰水浴冷却15分钟，以2ml水加6ml硫酸蒽酮试液作空白，照紫外可见分光光度法4，在625nm波特长测定吸光度，在30分钟内完成。测定结果见表1。 2005年中国药典第一部中灵芝的含量规定为含灵芝多糖以无水葡萄糖计，不得少于0.50%。测定结果

11、表明，试验所用的五批灵芝药材为合格药材。 23 灵芝配方颗粒原料的制备。 231 灵芝的前处理：选择上述合格的优质灵芝，将其切成小条状。 232 灵芝的煎煮：取灵芝饮片适量，加10倍量水在60温浸1小时，再按煎煮法在常压下提取二次，分别为10倍量水/25小时，8倍量水/1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置12小时，取上清液浓缩至相对密度为1.151.20的清膏。减压干燥，制成干清膏。（见表2） 233 干膏的鉴别：取本品粉末1g,加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝比照药材2g，同法制成比照药材溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点

12、于同一硅胶G板上，以石油醚（6090）乙酸乙酯甲酸（1551）为绽开剂，取出，晾干。置紫外灯（365nm）下检视。在供试品色谱中，在与比照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 234 含量测定。 2341 供试品溶液的制备：取药材干清膏约1g,精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，加入乙醇10ml，摇匀，4放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，即得。 2342 比照品溶液的制备：精密称取105干燥至恒重的葡萄糖比照品适量，加水制成1ml含0.1mg的溶液，即得。 2343 最大汲取波长的确定：

13、精取葡萄糖标准溶液1.0ml,置试管中，加水至2ml,再加硫酸蒽酮6ml，混匀，置水浴中加温15分钟，取出，冰浴冷却15分钟，加水2ml和6ml硫酸蒽酮作空白比照。在岛津UV-2201型分光光度计上，于580700nm波长范围内测定汲取度。结果在625nm处有最大汲取，同法测得灵芝药供试液均在625nm处有最大汲取。见所以选择625nm波特长测定吸光度。 2344 测定法： 234.4.1 供试品溶液的制备：取本品约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml,电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，加乙醇150ml,摇匀，4放置

14、12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释到刻度。摇匀，即得。 234.4.2 测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml,摇匀，置水浴锅中加热15分钟，取出，放入冰水浴冷却15分钟，以2ml水加6ml硫酸蒽酮试液作空白，照紫外可见分光光度法，在625nm波特长测定吸光度，在30分钟内完成。结果如表3。 24 方法学考察。 241 线性关系考查：分别精密吸取比照品溶液0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，照药材含量测定测定法项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶

15、液6ml”起，依法测定吸光度。线性关系如图2： 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得：y=35.12x-0.0094r=0.9963.线性范围：0.00250.0125 mg/ul 242 精密度试验。 取同一供试品（取第一批制备供试品），重复测定6次，吸光度为0.282,0.282,0.280,0.279,0.279,0.280.RSD=0.49%试验表明，本方法具有良好的精密度。 243 稳定性试验。 取供试品（取第一批制备供试品），隔一段时间测量一次，记录吸光度。（见 表4）。试验结果表明，本方法具有良好的稳定性。 244 重现性试验。取第一批制备供试品溶液，按样品含量测定项下方法重复测定5次，分别测定。（见表5） 245 精确度试验。 采纳加样回收法。取已知含量的样品五批（第五批为每1g含60mg的多糖），取0.5g左右，精称称定,再精密加入40mg的无水葡萄糖，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。（按含量测定项下方法进行）并根据下式公式计算，结果见表6。