病原微生物评估报告.doc

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1、病原微生物风险评估报告模板1、 生物风险评估依据1）病原微生物实验室生物安全管理条例2）实验室生物安全通用要求3）人间传染的病原微生物名录4）WHO实验室生物安全手册2、生物风险评估要素1）病原微生物特征；2）病原微生物相关实验活动；3）实验活动人员；4）实验活动的设施、设备和环境；5）风险认定和评估结论。3 生物风险评估实施3.1病原微生物特征的评估1）一般生物学特性：病原微生物起源、基因组及编码、产物形态特征、培养特性、细菌或病毒属别和型别内容或技术鉴定。2）致病性：临床症状、潜伏期、病程、感染剂量、入侵部位、宿主类型、否产生毒素等。3）感染途径：呼吸道、消化道、血液、媒介、皮肤感染等。4

2、）环境中的稳定性：是指其抵抗外界环境的存活能力，不同的微生物的稳定性不同，对病原微生物的稳定性评估除考虑其在自然界中的稳定性外，还应考虑其对物理因素与化学消毒剂的敏感性。5）致病性和感染剂量：不同病原的致病性不同，即使同类病原不同菌（毒）株也有不同强度的致病力；另微生物的致病性与被感染者的免疫状态、易感性有关；暴露后果取决于病原微生物的致病性和机体的抵抗力；不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不同株的病原微生物，其致病性各异； 还取决于所感染病原微生物的剂量，当大量病原微生物侵袭人体时，潜伏期一般较短，而病情则较为严重；不同个体被传染后，可产生各种不同的结局。6）传播途径：传播方式包括呼吸道

3、传播、通过水和食物等消化道传播、接触传播、血液传播、母婴垂直传播、媒介传播等；传播结果包括一种病原可有多种传播途径和多种病原可以引起相同的症状。7）实验动物研究、实验室感染。8）有效的预防和治疗措施：有效的药物、有效疫苗、疾病监测手段、有效的预防控制措施手段。3.2病原微生物实验活动的评估1）实验活动：是指实验室从事与人病原微生物的菌（毒）种、样本有关的研究、教学培训、检测等活动。2）实验活动的类型包括：标本或样品处理、离心、匀浆、超声、移液操作、锐器的使用、生物安全柜使用、医疗废物消毒或高压灭菌处理等。3）实验活动风险影响因素：3a.气溶胶产生：离心、旋转、匀浆、接种环等。b.潜在伤害：注射

4、器等锐器、酒精灯、玻璃器皿等。c.标本的浓缩：来自临床、现场、培养、浓缩等。d.毒株和细胞：野毒、减毒、疫苗株、毒素产生等。e.操作指导书。4) 病原微生物动物实验风险因素a.标准的实验室废弃物处理程序。b.化学消毒剂选择、配置和使用。c.物理消毒设备的使用和维护。d.各种实验材料、器具，尤其是锐器处理。e.动物实验动物及其排泄物处理。5) 废弃物处理风险影响因素:a.标准的实验室废弃物处理程序。b.化学消毒剂选择、配置和使用。c.物理消毒设备的使用和维护。d.各种实验材料、器具，尤其是锐器处理。e.动物实验动物及其排泄物处理。3.3实验活动人员要求评估1）健康状况和健康历史、耐药和过敏。2）

5、人员资质和心里素质。3）生物安全知识。4）微生物学专业知识。5）操作设施设备技能。6）免疫状况。7）培训状况。8）应急事件处理能力。3.4设施、环境和设备因素要求评估1）生物安全实验室相应等级的设施。2）实验室生物安全的设备。3）实验室检测相关设备。4）应急设施。5）设施设备管理、维护、校准和检验。3.5风险评估结论（降低风险的措施）：1）病原微生物风险分类2）实验活动与相应的设施设备要求3）个人防护装备要求4）人员生物安全和专业技术资质要求5）人员健康和素质要求6）预防和治疗措施要求7）菌（毒）种和实验活动等风险管理要求8）应急预案和措施要求4、生物安全委员会负责审核病原微生物风险评估报告的

6、适宜性与科学性，并做出评估结论。生物因子生物危害评估报告模板*菌危害评估报告一、危害程度分类(一)分类等级(二)不同实验操作生物安全实验室级别要求二、背景资料(一)一般生物学特性1形态染色2培养特性(二)在外界环境的稳定性1在自然环境中的稳定性与对温度的敏感性2对日光与紫外线的敏感性3对化学因子的敏感性(三)致病性和感染数量 (四)传播途径及暴露的后果1传播途径2暴露后后果(五)*菌的宿主范围(六)*菌的预防、诊断和治疗1预防2诊断3治疗三、实验室实验活动及其危险性与预防措施(一)实验室实验活动背景资料1实验活动内容2实验涉及的*菌菌毒种背景资料3实验室*菌感染动物与培养物最高存量(二)可能造

7、成不良后果的因素与预防措施1实验样品的接收与开启拟采取防护措施：2实验样品涂片拟采取防护措施：3*菌接种培养拟采取防护措施：4*菌培养物与动物器官细菌再分离样品制备拟采取防护措施：5实验样品的研磨6*菌的攻击拟采取防护措施：7感染动物的饲养8感染动物的解剖9动物血清标本与未经灭活组织标本采集10病理观察用组织标本的采集11实验仪器设备12实验动物的病原微生物潜伏感染13培养物与实验废弃物销毁14室内空气、实验用品以及操作台面污染15菌种以及培养物保藏(三)实验室实验活动危害评估四、工作人员素质五、评估结论附表*菌实验室实验活动风险评估*实验室工作人员个人素质评价表金黄色葡萄球菌的生物危害评估报

8、告一、金黄色葡萄球菌的传播与致病 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：

9、食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。 而肠毒素形成条件包括：存放温度，在37内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 葡萄球菌性菌血症可发生于任何与血管内导管或其他异物有关的局限性葡萄

10、球菌脓肿或感染,它是严重烧伤病人死亡的常见原因。持续性发热常见,而且可伴有休克。 葡萄球菌性心内膜炎特别好发于静脉注射给药者和装有人工心脏瓣膜的病人。突然出现心脏杂音,脓毒性栓子和其他经典体征便可作出可疑诊断,确诊需依据超声心动图和血培养。 葡萄球菌性骨髓炎主要见于儿童,可引起寒战,发热和受累骨疼痛,继之出现红肿。关节周围感染常引起关节积液,提示为化脓性关节炎而不是骨髓炎。白细胞计数常15000/l并且血培养常阳性。X线变化在1014日内不明显,骨质疏松和骨皮质反应甚至更长时间仍不能测出,而放射性核素骨扫描则常能较早出现异常。 现在葡萄球菌性小肠结肠炎很罕见,但若住院病人出现发热,肠梗阻,腹痛

11、和腹胀,低血压或腹泻,特别是新近作过腹部手术或接受过抗生素者,可提示本病。若粪便镜检发现大片的嗜中性白细胞和革兰氏阳性球菌,则可能作出诊断,但必须排除产毒性艰难梭状芽胞杆菌感染,这是抗生素相关性结肠炎最常见的原因。 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分、四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱

12、氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。肠毒素可耐受100C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。二、金黄色葡萄球菌的生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m左右，显微镜下呈单个、成双以及排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性衰老、死亡和被白细胞吞噬后的菌体革兰染色呈阴性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需

13、氧或兼性厌氧，最适生长温度3537、最适生长pH7.47.6。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。三、金黄色葡萄球菌的检测与诊断1.标本采集 采自不同感染部位的各种标本，包括血液、脑脊液、穿刺液；痰液、脓液、创伤分泌物、尿液、粪便和呕吐物等。2.直接涂片镜检 直接涂片检查在正常情况下呈无菌状态的体液标本如血液、脑脊液、穿刺液等，若有检出革兰氏阳性，显

14、微镜下呈葡萄状排列、无芽胞、荚膜，直径0.5-1m的球菌。即具有重要的临床价值。3.分离培养 可以选用普通营养琼脂平板、血平板和高盐甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉汤增菌培养基。该菌在普通肉汤中呈均匀迅速混浊生长；若接种于琼脂平板上35过夜后可形成直径约23mm的厚菌落、湿润有光泽、呈金黄色不透明圆形凸起。若接种于血平板，菌落周围可形成明显的透明的溶血环。在高甘露醇平板上金黄色葡萄球菌生成淡橙黄色菌落，以此可与其他凝固酶阴性的葡萄球菌相鉴别。4.鉴别实验（1）血浆凝固酶试验：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的，与其致病力有关的一种侵袭性酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细

15、胞的吞噬。血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上，能直接作用于血浆中的纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白，环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产生后被分泌到菌体外，不能直接作用于纤维蛋白原，但可以激活血浆凝血酶原，使之转化成凝血酶，后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。玻片法:将待试菌落乳化于玻片上的盐水中，经1020S证实无自凝后，用接种环取人或兔血浆一环，与乳化菌液混合，出现凝集者为阳性，另设生理盐水为阴性对照。试管法:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置37培养，每隔半小时观察

16、一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。（2）耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，35培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。（3）甘露醇发酵实验 金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇。（4）Staphaurex 胶乳凝集实验 是鉴定金黄色葡萄球菌的一种快速、简便的商品化直接凝集试验。其基本原理是在纸片上滴加包被有纤维蛋白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，然后用接种环挑取待鉴定菌株的新鲜培养物加入混匀，若出现凝集块现象即为阳性。5.生化鉴定 如上述，注意与其他凝固酶阳性的葡

17、萄球菌的鉴别要点：PYR（吡咯烷酮-萘基酰胺试验阴性；VP试验阳性；鸟氨酸脱羧酶试验阴性。6.免疫学方法 用酶联免疫吸附试验和对流免疫电泳方法可检测金葡菌的磷壁酸抗体。7.分子生物学方法 包括PFGE脉冲场凝胶电泳以及酶切图谱分析等。四、金黄色葡萄球菌的防治及生物安全防护一、细菌的防治金黄色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黄色葡萄球菌污染食品，防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，

18、不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。2）防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。3）无菌措施(如检查病人前后彻底洗手和消毒合用的器械)至关重要。已被感染的病人应与其他易感病人隔离,患有活动性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染(如疖)的医护人员,在其感染治愈前不得接触病人或器械。无症状的鼻

19、腔带菌者,除非所带菌株十分危险或被怀疑为暴发流行的传染源,一般不必隔离。治疗包括脓肿引流,抗生素(重症病人需肠外给药)和全身支持疗法。培养标本应在开始治疗前或更换抗生素之前获取。抗生素的选择和剂量取决于感染的部位,疾病的严重程度和细菌对药物的敏感性。医院获得的葡萄球菌和大多数社区获得的菌株,通常对青霉素G,氨苄青霉素和抗假单胞菌青霉素有耐药性。大多数菌株对耐青霉素酶青霉素(甲氧苯青霉素,苯甲异噁唑青霉素,乙氧萘青霉素,邻氯青霉素,双氯青霉素),头孢菌素(头孢菌素,头孢唑啉,头孢菌素,头孢拉定,头孢羟唑,头孢西丁和第三代头孢菌素),卡巴培南类(亚胺培南,美罗匹宁),庆大霉素,万古霉素,替考拉宁,

20、林可霉素和氯林可霉素,是敏感的。虽然头孢菌素和万古霉素都有效,但通常首选一种耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌株对红霉素,四环素类药物,氨基糖苷类,杆菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的药可用,故很少使用氯霉素和杆菌肽。目前耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多，这种细菌虽可从社区获得感染的病人中分离得到,但多数是从感染的静脉吸毒者和重症监护室的病人中分离获得。MRSA菌株通常对耐-内酰胺酶青霉素,头孢菌素和卡巴培南类有耐药性。这些细菌对氨基糖苷类和大环内酯类(红霉素,克拉霉素,阿齐霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐药性也很普遍。虽然亚胺培南-西拉司丁或喹诺酮类对某些MRSA感染

21、是有效的,但静脉注射万古霉素为首选。肾功能正常成人的通用剂量是每6小时静脉注射500mg 或每12小时静滴注1000mg,至少在1小时内滴完。肾功能受损时,剂量应根据血清中药物的浓度加以调整,疗程视感染部位及病人的反应而定,但一般为 24周。某些严重的或有并发症的感染,可能需要静脉给药治疗68周,然后再口服治疗1个月或更长时间。可用于替代万古霉素治疗MRSA感染的药物有：TMP-SMZ,成人剂量为TMP1015mg /(kg.d)加SMZ5075mg/(kg.d),分剂口服或肠外给药,每次间隔8小时或12小时,连续24周；利福平(600mg/d)口服或肠外给药；肠外给亚胺培南-西拉司丁(500

22、mg每6小时1次)或美罗匹宁(0.51.0g每8小时1次。但利福平不要单独应用,因为细菌很易产生抗药性。在治疗异物相关性MRSA感染或浆膜腔MRSA感染时,利福平和氨基糖苷类是有用的辅助药物。邻氯青霉素,双氯青霉素,TMP-SMZ,环丙沙星及局部用莫匹罗星(mupirocin)可用于治疗MRSA带菌状态,但MRSA对这些药物可产生抗药性。抗万古霉素的肠球菌(VRE)菌株的流行日益增加, 这种菌株在实验室中可将引起抗万古霉素的基因转为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中则转变为凝固酶阴性葡萄球菌分离株。可是这些葡萄球菌很容易对治疗这类感染的其他药物产生抗药性。杆菌肽,若有的话,可试用

23、于治疗抗万古霉素的葡萄球菌感染。对这些病人应严格隔离,以防他们的细菌传播。二、细菌的生物安全防护根据病原微生物生物实验室生物安全管理条例中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）金黄色葡萄球菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：（1）操作要求1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针

24、头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关

25、的法规。8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。3

26、、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳

27、胶手套。脱掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害评估报告一、淋病奈瑟菌的传播与致病淋病奈瑟菌又称淋球菌，是淋病的病原菌，人类是本菌的唯一天然宿主和传染源。淋病是淋菌性尿道炎的简称，是由淋球菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎性疾病，它是人类很古老的，也是当前世界范围内流行非常广泛的一种性传播疾病。淋病患者是主要传染源，有症状或无症状的患者均可通过性接触传播，其中轻症或无症状的淋病患者是重要的传染源。其传播途径主要包括性交传染，还可通过非性接触传播，如通过接触患者分泌物污染的用品（衣裤、床上用品、毛巾、浴盆、马桶等）间接感染；孕妇淋病患者当羊膜破裂，可继发羊膜腔内及胎儿感染；新生儿经过患淋病的母体产道时

28、常可引起淋菌性眼炎；另外尚可通过医护人员的手和器具引起医源性感染。本病最初多侵犯尿道、宫颈内膜，继而可波及前列腺、精囊、副睾、子宫内膜及输卵管。有时肛门、直肠、咽粘膜、眼结膜也可受染。尚可经血行播散引起菌血症、关节炎、心内膜炎及脑膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狭窄等后果。由于本病潜伏期短、传染性强、后果严重，因此它是我国当前重点防治的性病之一。二、淋病奈瑟菌的生物学特性淋病奈瑟菌属奈瑟菌属，镜下呈肾形，常成双排列，邻近面扁平或稍凹，像两瓣黄豆对在一起，大小0.6m0.8m。革兰氏染色阴性，呈粉红色，美蓝染色呈蓝色。急性炎症期细菌多在患者分泌物的少部分中性粒细胞的胞浆中，慢性期则多在细

29、胞外，且有些可呈单个球形或四联状。人工培养后形态亦常呈球形、单个、成双或四联排列。淋球菌适于潮湿（相对温度8085）、温暖（35.536.5）、中性偏碱（pH7.27.6）、含510二氧化碳的条件下生长。最怕干燥，在完全干燥环境下只能存活12小时，对温度变化敏感，超过38或低于30则不能生长，在培养基上室温放置12天即可死亡，在39 存活13小时，42存活15分钟，50存活5分钟。如在不完全干燥的衣裤、被褥、毛巾、玩具上则可存活1824小时。一般消毒剂容易将它杀灭，在 1:4000硝酸银溶液中7分钟死亡，1石炭酸溶液中3分钟内死亡。 淋球菌较为娇嫩，酶系统不完整，初代培养普通培养基不易成功，需

30、在含有动物蛋白的培养基上，且含有二氧化碳的条件下才能生长。淋球菌在血琼脂培养基孵育24小时后，可形成直径0.51mm的圆形稍隆起，湿润光滑，半透明，边缘呈花瓣状，有粘性的露滴状菌。 淋球菌的生化反应不发达，只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖及蔗糖。藉助上述生化特性亦可与脑膜炎球菌及其他奈瑟菌相鉴别。淋球菌能产生氧化酶和过氧化氢酶，在诊断上有一定意义。三、淋病奈瑟菌的实验室检查及其诊断细菌的实验室检查及其它检查（1） 涂片检查：取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断

31、。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作进一步检查。（2）培养检查：淋球菌培养是诊断的重要佐证，培养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。目前国外推荐选择培养基有改良的Thayer-Martin（TM）培养基和New York C

32、ity（NYC）培养基。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36，70%湿度，含 5%-10%CO2（烛缸）环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。培养阳性率男性 80%-95%，女性80-90%。培养后需根据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验做出鉴定。培养阳性率男性为8095，女性为 8090。（3）抗原检测1固相酶免疫试验（EIA）：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。2直接免疫荧光试验

33、：通过检测淋球菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐用来诊断淋球菌感染。（4）基因诊断1淋球菌的基因探针诊断:淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒DNA探针，染色体基因探针和rRNA基因探针。2、淋球菌的基因扩增检测 PCR技术和连接酶链反应的出现进一步提高了检测淋球菌的灵敏性，它具有快速、灵敏、特异、简便的优点，可以直接检测临床标本中极微量的病原体。（5）药敏试验 对培养阳性者可进一步用纸片扩散法做药敏试验，或用琼脂平皿稀释法测定药物最小抑菌浓度（MIC），以及用纸片酸度定量法检测内酰胺酶（使用 W

34、hatman I号滤纸PP-NG菌株能使其颜色由蓝变黄，阳性为PPNG，阴性为N-PPNG），以确定淋球菌对抗生素的敏感性，合理选择用药。四、淋病的预防淋病奈瑟菌的预防要点如下：1.避免婚外性行为。2.在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以防止淋球菌感染。3.预防性使用抗生素可减少感染的危险，可应用于已知与淋病患者有性接触者。4.按淋病治疗方案对病人进行合理治疗，彻底消灭传染源。5.对性伴侣应进行检查和治疗。6.患者宜注意个人卫生与隔离，不与家人、小孩（尤其女孩）同床、共浴。7.执行对新生儿硝酸银溶液或红霉素溶液预防滴眼的规定，防止新生儿淋病性眼炎发生。8.病人需经彻底治愈后，方可结婚、生育和

35、安排工作。五、淋病奈瑟菌的生物安全防护根据病原微生物生物实验室生物安全管理条例中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）霍乱弧菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：（1）操作要求1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。4、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要

36、不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。5、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。6、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。7、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记

37、录。8、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。（2）安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心

38、。4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。结核杆菌的生物危害评估报告一、结核杆菌的传播与致病结核杆菌通常指结核分枝杆菌和牛分枝杆菌，其中结

39、核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起人类结核病的主要病原体。结核分枝杆菌的主要传染途径是经呼吸道传播，由排菌的肺结核病人在咳嗽、喷嚏或大声说话时随呼吸道分泌物排出到空气中，或排菌的肺结核病人随地吐痰通过再生气溶胶(尘埃)，携带结核杆菌，飞扬在空气中，被健康的人吸入后发生感染和发病，因此排菌的肺结核患者(尤其是痰涂片阳性未经治疗者)是结核病的主要传染源。一般结核病患者痰中结核杆菌越多，传播的危险性越大。患者排出的飞沫在1-10微米者，在空气中漂浮时间长，传染性越大。患者病变和症状越严重，传染性也越大。周围人群与患者接触越密切者，受感染的机会越多。与患者同处于空

40、气不流通的室内的密切接触者，受感染的可能性增大。未受结核感染的人是结核病易感人群，由于结核病是人畜共患病，哺乳类动物如牛、鹿、猴、猪、猫、狗等也都可以患结核病。感染结核杆菌后，终身都有可能发病，发病时间因人而异，一般2个月20年才发病。典型肺结核起病缓慢，病程较长，有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多数患者病灶轻微，无显著症状。（1）症状全身症状表现为午后低热、乏力、食欲不振、消瘦、盗汗等。呼吸系统症状通常为干咳或带少量黏液痰；继发感染时，痰呈粘液脓性。约1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克，偶因血块阻塞大气道引起窒息。病灶炎症累及壁层胸膜时，相应胸壁有刺

41、痛，一般多不剧烈，随呼吸及咳嗽而加重。若并发气胸或大量胸腔积液，呼吸困难症状尤为严重。（2）体征早期病灶小或位于肺组织深部，多无异常体征。若病变范围较大，患侧肺部呼吸运动减弱，叩诊呈浊音，听诊时呼吸音减低，或为支气管肺泡呼吸音。因肺结核好发于肺上叶尖后段及下叶背段，故锁骨上下、肩胛区叩诊略浊，咳嗽后偶可闻及湿啰音，对诊断有参考意义。肺部病变发生广泛纤维化或胸膜粘连增厚时，患侧胸廓常呈下陷、肋间隙变窄、气管移位与叩浊，对侧可有代偿性肺气肿征。二、结核杆菌的生物学特性从分类学上看结核杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌，菌体长1

42、-4纳米，宽0.3-0.6纳米，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。镜下常呈单个散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌体多时细菌扭集一起呈绳索状、束状或丛状。此外结核杆菌菌体还具有多形态特征，受不良生长条件的影响可分别表现为杆菌型 (基本形态)、滤过型、颗粒型和球菌型(L型)4种不同的类型。分枝杆菌生长缓慢，在人工培养基内繁殖一代约需15-20小时，一般需2-4周或更长时间始见菌落生长，甚至有极少数生长极为缓慢者需8周以上才开始有菌落生长。它为专性需氧菌，生长的温度范围是35-40，pH 5.5-7.2。培养营养要求较高且特殊，培养基需含鸡蛋、血清、氨基酸、甘油等营养丰富的复杂有

43、机物及少量无机盐类。而且结核杆菌随着环境的改变易发生菌落形态、毒力、L型及药物耐药性变异，如在人工培养基上反复连续传代，可产生变异而致毒力降低，三、结核杆菌的检测与诊断（1）细菌的实验室检查及其它检查 结核菌检查是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌为确诊肺结核的主要依据。涂片抗酸染色镜检快速简便。在我国非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性，肺结核诊断基本即可成立。痰菌阳性表明其病灶是开放性的，具有传染性。培养法更为精确，尚可作药物敏感试验与菌型鉴定。但结核菌生长缓慢，培养较为费时，但精确可靠，特异性高。若涂片阴性或诊断有疑问时，培养尤其重要；而且，培养后可做药物敏感性测定，指导临床用药

44、。PCR技术检测结核菌 DNA快速、简便，并可鉴定菌型，不足之处是可能出现假阳性或假阴性。 影像学检查胸部X线检查可以发现肺内病变的部位、范围、有无空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X线对各类结核病的透过度不同，通过X线检查能大致估计结核病灶的病理性质，并能早期发现肺结核，以及判断病情发展及治疗效果，有助于决定治疗方案。肺结核的常见X线表现包括：纤维钙化的硬结病灶、浸润性病灶以及干酪样病灶等。胸部CT检查对于发现微小或隐蔽性病变，了解病变范围及病变鉴别等方面均有帮助。 结核菌素试验是诊断结核感染的参考指标。使用的变应原有旧结核菌素（old tuberculin, OT）和结核菌素的纯化蛋白衍化物（p

45、urified protein derivative, PPD），现临床多用PPD。皮内注射0.1ml（5IU），硬结平均直径5mm为阳性反应。结核菌素试验有助于判断有无结核菌感染。若呈强阳性反应，常表示为活动性结核病。结核菌素试验阳性反应仅表示曾有结核感染，并不一定现在患病。结核菌素试验阴性反应除表示没有结核菌感染外，尚需考虑以下情况：结核菌在感染48周后才建立充分变态反应，在这之前，结核菌素试验可呈阴性；应用糖皮质激素等免疫抑制剂，或营养不良、麻疹、百日咳等患者，结核菌素反应亦可暂时消失。 其它检查结核病患者血像通常无改变，严重病例常有继发性贫血，急性粟粒型肺结核时白细胞总数减低或出现类白

46、血病反应。血沉增快常见于活动性肺结核。用ELISA法检测患者血清中特异性抗体，可对无痰或痰菌阴性者和肺外结核的诊断提供参考。纤支镜检查对于发现气管内膜结核、了解有无肿瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脱落细胞检查，以及取活组织作病理检查等，均有重要诊断价值。浅表淋巴结活检，有助于结核的鉴别诊断。（2）诊断和鉴别诊断痰结核菌检查不仅是诊断肺结核的主要依据，亦是考核疗效、随访病情的重要指标。X线检查是诊断肺结核的必要手段，对早期诊断、确定病变部位、范围、性质、了解其演变及选择治疗等均具有重要价值。在临床诊断中，我国现用的分类法包括四部分，即肺结核类型、病变范围及空洞部位、痰菌检查、活动性及转归。肺结核分为五型：型为原发型肺结核；型为血行播散型肺结核；型为浸润型肺结核；型为慢性纤维空洞型肺结核；型为结核性胸膜炎。还应注意将结核病与肺癌、肺炎、支气管扩张、慢性支气管哮喘和其它发热性疾病如伤寒、败血症、白血病、纵隔淋巴瘤及结节病等进行鉴别。四、结核杆菌的防治及生物安全防护细菌的防治根据中华人民共和国传