双缩脲法测定血清总蛋白资料讲解.ppt

《双缩脲法测定血清总蛋白资料讲解.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《双缩脲法测定血清总蛋白资料讲解.ppt（15页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、双缩脲法测定血清(xuqng)总蛋白临床(ln chun)生化实验室第一页，共15页。一、实验(shyn)目的掌握(zhngw)双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。了解血清总蛋白测定的临床意义。第二页，共15页。二、实验(shyn)原理尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反应(fnyng)称为双缩脲反应(fnyng)。第三页，共15页。二、实验(shyn)原理 蛋白质分子(fnz)中含有肽键（CO NH ）与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。第四页，共15页。二、实验(shyn)原理紫红

2、色络合物在波长(bchng)为540nm处的吸光度与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得溶液中蛋白质的含量。C测=C标A测测A标标第五页，共15页。三、实验(shyn)操作加入物（ml）调零管 标本空白管(B)试剂空白管(RB)标准管(S)测定管(U)血清0.10.1蛋白质标准液0.1蒸馏水5.00.1双缩脲空白试剂5.0双缩脲试剂5.05.05.0第六页，共15页。三、实验(shyn)操作混匀，置25 水浴(shu y)放置30min或37水浴(shu y)放置10min，以空白管调零，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度值。第七页，

3、共15页。四、结果(ji gu)计算计算公式：血清(xuqng)总蛋白（g/L）=C标AU-ARB-ABAS-ARB参考(cnko)范围：正常人：6080g/L第八页，共15页。五、方法学评价(pngji)目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下五目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下五种经典种经典(jngdin)(jngdin)方法：方法：双缩脲法（双缩脲法（BiuretBiuret法）：法）：12mg 12mg 定氮法：灵敏度定氮法：灵敏度0.21.0mg 0.21.0mg FolinFolin酚试剂法（酚试剂法（LowryLowry法）：法）：50100g 50100g 紫外吸收法：紫外吸收法

4、：5g 5g 考马斯亮蓝法（考马斯亮蓝法（BradfordBradford法）：法）：15g15g第九页，共15页。五、方法学评价(pngji)双缩脲法优缺点：优点 操作简单，使用方便，作为(zuwi)临床测定血清总蛋白的首选常规方法且重复性好。缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。第十页，共15页。六、临床意义血清总蛋白降低血清总蛋白降低 1 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合症等大出血；肾病综合症等 3 3、营养不良或消耗增加、营养不良或消耗增加(z

5、ngji)(zngji)：如低蛋白饮：如低蛋白饮食；慢性消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等食；慢性消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留。因引起的水钠潴留。第十一页，共15页。六、临床意义血清总蛋白升高血清总蛋白升高 1 1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤患者瘤患者(hunzh)(hunzh)，主要是因为异常球蛋白，主要是因为异常球蛋白增加增加 2 2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。等。第十二页，共15页。七、注意事项双缩脲反应并非是

6、蛋白质特有的颜色反应！凡分子内含有2个或2个以上(yshng)肽健（CO NH ）的化合物均可呈双缩脲反应。双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系。第十三页，共15页。七、注意事项黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对本黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对本法有明显法有明显(mngxin)(mngxin)干扰，故用标本空白管干扰，故用标本空白管来消除；因双缩脲试剂中含有来消除；因双缩脲试剂中含有CuSO4CuSO4具有颜具有颜色，故用试剂空白管消除干扰。色，故用试剂空白管消除干扰。第十四页，共15页。七、注意事项高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用(ciyng)(ciyng)下列方法消除：取下列方法消除：取2 2支离心管，各支离心管，各家待测血清家待测血清0.1ml0.1ml，再加蒸馏水，再加蒸馏水0.5ml0.5ml和丙酮和丙酮10ml10ml，混匀后离心。，混匀后离心。因血清取量少，取量尽量准确。因血清取量少，取量尽量准确。碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料瓶碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料瓶装。装。第十五页，共15页。