SN∕T 5549-2022 庭园象甲检疫鉴定方法[商检].pdf

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1、I C S6 5.0 2 0.2 0C C SB 1 6中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 5 4 92 0 2 2 庭园象甲检疫鉴定方法D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r,1 8 2 6)2 0 2 2-0 7-0 7发布2 0 2 3-0 2-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起

2、草。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:武汉海关技术中心、长春海关技术中心、成都海关技术中心、拱北海关技术中心、中华人民共和国玉林海关、南京海关动植物与食品检测中心、中国质量认证中心武汉分中心、武汉中地检测技术有限公司。本文件主要起草人:王振华、李乔、李凤新、彭超、曾宪东、叶芸、王琴、赵梅荣、张彩霞、郑剑、徐雪、林伟、魏春艳、邵宝林、杨晓军。S N/T5 5 4 92 0 2 2庭园象甲检疫鉴定方法1 范围本文件规定了庭园象甲P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r,1 8 2 6)的检疫鉴定方法。本文

3、件适用于植物及植物产品中庭园象甲的检疫鉴定。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1体长 b o d y l e n g t h 象虫的体长为从复眼的前缘至鞘翅端部的长度,不包括喙、鞘翅的端刺和突起的长度突起。如果臀板的端部超过鞘翅,则臀板应计算在内。3.2喙 r o s t r u m 喙是由额向前延伸而成象鼻状或鸟喙状的结构,端部具口器。3.3触角沟 s c r o b e 触角沟位于喙部,为收纳触角的沟状结构。3.4行纹 s t r i a 行纹是鞘翅背面纵向排列的沟纹,具成行的刻点。3.5行间 i n t e r v a l 鞘翅

4、上每相邻两条行纹之间的区域。3.6臀板 p y g i d i u m 露伸出鞘翅外的体节,为可见的腹部末节背板。3.7鳞片 s c a l e 昆虫体壁由刚毛特化变形而成的扁平外长物。4 庭园象甲基本信息 中文名:庭园象甲1S N/T5 5 4 92 0 2 2 学名:P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r,1 8 2 6)英文名:g a r d e n w e e v i l,b a n d e d f r u i t w e e v i l 异名:P h y l c t i n u s c a l l o s u s

5、(B o h e m a n,1 9 8 4);R h y n c o g o n u s g e r m a n u s(B r o u n,1 8 9 3)分类地位:鞘翅目C o l e o p t e r a,象虫科C u r c u l i o n i d a e,斑象属P h l y c t i n u s。该虫成虫不具飞翔能力,可随受害寄主果实的人为调运远距离传播。其卵、幼虫、蛹和成虫均可随寄主植株的根际土壤传播。庭园象甲其他信息参见附录A。5 方法原理 根据庭园象甲的为害状,在检疫现场肉眼观察寄主植物,取得幼虫,饲养至成虫,在体视显微镜下观察,根据形态特征对种类进行判定。或将虫体

6、通过P C R扩增检测,根据P C R测序结果进行种类的辅助判定。6 仪器、用具和试剂6.1 仪器和用具 体视显微镜、P C R扩增仪、凝胶成像系统、电泳仪、超净工作台、高速冷冻离心机、纯水仪、高压灭菌锅、制冰机、天平、p H计、水浴锅、冰箱、旋涡振荡器、光照培养箱。养虫笼、小型干燥器、防虫网罩、温湿度计、烧杯(2 0 0 m L、5 0 0 m L)、白瓷盘(大号、小号)、昆虫还软器、可封口塑料袋、标签、培养皿、吸水纸、镊子、小毛笔、指形管、纱布、三角纸剪刀、昆虫针、滴管、载玻片、盖玻片、饲养缸。6.2 主要试剂 D NA提取试剂盒,琼脂粉,乳酸,S D S,异丙醇,无水乙醇,T r i s

7、、HC l,M g C l2,E D T A,N a OH,K C l,C T A B,T B E,蛋白酶K,三氯甲烷,苯 酚三氯 甲烷异 戊醇(2 52 41)溶液,3 m o l/L N a A c(p H 5.2),1 0P C R缓冲液(含2 5 mm o L/L M g S O4),T a q酶,d NT P、琼脂糖,T A E,上样缓冲液,溴化乙锭(E B),1 0%KOH。所用试剂均为分析纯。7 现场检疫 在检疫现场或疑似发生庭园象甲为害的水果,观察有关寄主植物、为害状(见附录A和附录B),解剖样品果实,如发现疑似成虫,用指形管盛装;如发现上述幼虫,连同植物根部,用可封口塑料袋装

8、。上述管、袋均加标签,或编号,记录时间、地点、寄主、采集人等,带回实验室。8 实验室鉴定8.1 饲养 将检出的幼虫或卵随寄主果实一同放入饲养缸中,蛹可以放入有湿沙的饲养缸中,置于2 8 3 0、相对湿度7 0%7 5%的光照培养箱中进行饲养观察,待成虫出现后进行鉴定。2S N/T5 5 4 92 0 2 28.2 成虫标本的制作8.2.1 针插标本 成虫标本可制作为针插标本。标签上注明地点、寄主、时间、采集人等信息。8.2.2 浸泡标本 用无水乙醇浸泡保存成虫标本,常规保存,但如果分子试验用,应冷冻保存。标签上注明地点、寄主、时间、采集人等信息。8.3 斑象属P h y l c t i n u

9、 s成虫鉴定特征 体长4.0 mm9.0 mm。喙粗短。触角膝状,着生于喙中部。柄节长,端部膨大呈棒状。索节7节,第1节短于第2节,4节7节,第3节第6节长大于宽,第7节长稍大于宽,末端呈棒状。棒节纺锤形,第1节长于第2节,边缘稍弯曲。唇基“V”形,基部可达触角窝,无鳞片。复眼突出,圆形。前胸背板宽略大于长,两侧近圆形,密被瘤突。鞘翅覆盖长形鳞片,行间具胝状突。腹部覆盖亮绿色或亮褐色鳞片,着生有直立刚毛,腹部第1节的长度短于第2节、第3节、第4节之和。腿节粗壮,无刺。跗节不发达,爪离生。9 庭园象甲的鉴定特征9.1 成虫9.1.1 整体 体长4.8 mm6.1 mm。体色暗红色,头部和前胸背板

10、较暗为黑色,鞘翅表面覆盖长为宽的2倍的长形鳞片,较小的鳞片长为宽的4倍5倍,鳞片呈棕色、亮绿色、亮棕色,白色鳞片通常在翅鞘的2/3处形成一个横带,前胸侧边从基部至前胸一半的位置有纵条带,前胸顶端有少量小点 见图B.1 a)。9.1.2 头部 喙的长宽比为0.6 8倍,基部是顶部的1.0 5倍,中部两侧稍凹。额侧片宽度与单个复眼等宽,基部宽度比两复眼之间的距离窄,两侧近平行,上面具纵向脊从基部横向沟延伸到唇基,通过鳞片可见;唇基V形,基部可达触角窝,无鳞片,少量刚毛散生在刺孔处,下颚顶部着生3对长刚毛(2对短,1对长);从侧面看,触角窝的毛略微弯曲,有一个比复眼直径还窄的鳞片带将触角窝的毛分开,

11、指向眼睛的中部;上颚刚毛3,无鳞片。前额处的复眼,鳞片和刚毛之间有一条纵向的短沟,复眼基部下方的鳞片和刚毛呈中心排列。复眼突出,圆形。触角膝状,着生于喙中部。柄节长,端部膨大呈棒状,是索节的0.7 5倍;索节7节,第1节为第2节的0.6 5倍,第3节6节长大于宽,顶端圆锥形,第7节长稍大于宽;棒节纺锤形,超过前胸的前缘,第1节长于第2节,边缘稍弯曲 见图B.1 a)。9.1.3 前胸 宽略大于长(宽与长的比率为1.1 6),中部稍前位置最宽,顶部宽度是基部宽度的0.6 8倍,两侧近圆形,顶端的一半稍凹;表面密被瘤突,排列方向与中脊平行,在中脊的两侧各有两个轻微凹凸;中脊突起,光滑而有光泽,未达

12、前胸的顶部和基部 见图B.1 b)c)。9.1.4 鞘翅 有光泽,背面凸出,具刻纹,呈弱网状,宽与长的比率为0.7 6,宽与长的比率为0.8 0,间纹凸起,3S N/T5 5 4 92 0 2 2是一个鞘翅基部行纹宽度的2倍4倍;第3、5、7间纹的顶端上有些较大的胝状突,第2、4、6和8间纹有些较小的胝状突;胝状突周围具半直立的白色鳞片 见图B.1 e)。9.1.5 腹部 腹部覆盖亮绿色或亮褐色鳞片;腹部第1 节的长度是第2、3、4节之和,中间略凸(),或凹内生有爪长的直立刚毛(),腹部第5节的长度稍长于第3节与第4节之和,在近顶部和中部有直立刚毛,在顶部附近有一个小结节(),或在顶部2/3处

13、有一个大孔,在孔的边缘着生长刚毛,在孔的顶部和基部的边缘密生的短卧式刚毛排列呈纵线()。9.1.6 足 腿节粗壮,近中部有一圈小白鳞片。胫节笔直,腹侧具2刺,等长,金黄色;爪等长 见图B.1 f)。9.1.7 雄性生殖器 阴茎的长度是雄性外生殖器的0.7倍,侧凸,距基部1/3处最宽,朝端部逐渐变窄(宽与长的比率为0.4 5),侧面观,基部1/2和近顶端位置,稍弯曲;右边的阳茎侧叶比左边的宽,左边的阳茎侧叶与身体等长,基部有刚毛,右边的梳与刚毛平行。9.1.8 雌性生殖器 第八腹节,背面观呈三角形,顶部锐尖,基部1/3处最宽,侧面观呈披针形,近中部最宽,前缘光滑无毛,中部至后缘粗糙。内突短,粗壮

14、,与腹板等长或稍长;生殖节长度是宽度的4倍,扁平,顶端呈圆形,靠近顶部侧边着生长刚毛。受精囊有阔弧形角状结构;有一发达的分支,与囊管平行,长度为囊管的2倍,圆形结节。9.2 卵 卵小,初产卵乳白色,后两端逐渐变成黑色。长约0.9 mm,宽约0.5 mm,呈卵椭圆形。9.3 幼虫 体白色,头部呈棕色,下颚、单眼黑色,咀嚼式口器,前额没有隆起。无前足,中胸无气门。体长约5 mm,宽约2 mm,细圆筒状,呈C形。腹部第1节第8节有气孔,第8节第1 1节没有腹足。刚毛直立。9.4 蛹 白色,体长约8 mm,宽约2.5 mm,宽椭圆形。离蛹。头部和前胸背板上有圆锥状瘤突,其上着生较长钩状的刚毛。触角膝状

15、;喙长约1 mm。1 0 庭园象甲与近似种区别 斑象属P h l y c t i n u s全世界已知6种,分别为庭园象甲P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r,1 8 2 6)、P h l y c t i n u s g r o o t b o s e n s i s H a r a n.、P h l y c t i n u s x e r o p h i l u s H a r a n、P h l y c t i n u s p l a n i t h o r a x H a r a n、P h l y c t i n

16、 u s l i t t o r a l i s H a r a n、P h l y c t i n u s a l o e v o r u s H a r a n。庭园象甲与其近似种的检索表以及其形态特征、生殖器比较图见附录C。4S N/T5 5 4 92 0 2 21 1 D N A条形码检测鉴定 D NA条形码检测鉴定的实验步骤按照附录D进行操作。1 2 结果判定 以成虫形态特征为依据,符合上述9.1特征者可判定为庭园象。卵、幼虫、蛹的形态特征符合9.2、9.3、9.4的,可作为鉴定参考依据。D NA条形码检测结果所得序列与庭园象甲已知序列(MN 6 2 7 2 3 2.1)的相似度大于

17、9 9%,且N J系统树上聚为一支,可初步判定为庭园象甲。1 3 标本保存 经过鉴定的庭园象甲标本应永久保存,并加注明时间、地点、寄主、采集人等信息的标签。5S N/T5 5 4 92 0 2 2附 录 A(资料性)庭园象甲其他信息A.1 寄主 该虫为多食性害虫,寄主植物已记载有1 1科,包括:石刁柏A s p a r a g u s o f f i c i n a l i s(百合科L i l i a c e-a e)、野胡萝卜D a u c u s c a r o t a、欧防风P a s t i n a c a s a t i v a(伞形科Um b e l l i f e r a e)

18、、胡桃J u g l a n s r e g i a(胡桃科J u g l a n d a c e a e)、黑麦草L o l i u m p e r e n n e(禾本科P o a c e a e)、野罂粟P a p a v e r n u d i c a u l e(罂粟科P a-p a v e r a c e a e)、天竺葵属P e l a r g o n i u m(牻牛儿苗科G e r a n i a c e a e)、草莓属F r a g a r i a、苹果M a l u s p u m i-l a、欧洲李P r u n u s d o m e s t i c a、李P r

19、u n u s s a l i c i n a、桃P r u n u s p e r s i c a、西洋梨P y r u s c o mm u n i s(蔷薇科R o s a c e a e)、酸模R u m e x a c e t o s a(蓼科P o l y g o n a c e a e)、马铃薯S o l a n u m t u b e r o s u m(茄科S o l a n a c e a e)、蒲公英T a r a x a c u m o f f i c i n a l e(菊科A s t e r a c e a e)、葡萄V i t i s v i n i f e r

20、a(葡萄科V i t a c e a e)。A.2 地理分布 现分布于澳大利亚(南澳大利亚州、塔斯玛尼亚州、维多利亚州、西澳大利亚州、新南威尔士州)、新西兰、南非。A.3 生物学特性 庭园象甲羽化6周后开始产卵,持续3个月6个月;在夏末或初秋,成虫将卵产在土壤表层或附近的松散有机物中。在1 5 2 0 下,雌虫在产卵的前3周或4周内每周产卵少于5粒,以后每隔7 d可产卵多达7 0粒。卵通常在1 0 d 1 4 d 内孵化。在5 和8 条件下,庭园象甲的卵仍能存活1 2周;在1 0.5 和2 5.0 之间,卵的存活率一致较高(7 6%8 6%);在高于3 0 条件下,卵的存活率下降到1.7%。幼

21、虫会挖洞钻入土壤中取食寄主植物的根,如胡萝卜和防风草,或块茎植物。大多数幼虫生活在距土壤表面1 0 c m处。幼虫在土壤中越冬,在距离土壤表层1 0 c m的范围内化蛹,蛹期7 d 2 2 d,平均1 4 d。春末夏初,蛹羽化为成虫,白天躲在粗糙的树皮下或土块下,夜间取食寄主植物。成虫鞘翅融合不能飞行,通过枝干爬至寄主植物上部为害。当在恒温条件下饲养时,成虫存活率与幼虫相比表现更好,在1 5 条件下羽化后的前1 0 0 d死亡率为1 5%,而在2 0 条件下前1 0 0 d死亡率为7 0%。大多数研究文献都表明庭园象甲是有性繁殖的。除灌溉作物或开普敦(南非)西南部外,庭园象甲每年繁殖一代,但如

22、果条件适宜秋季可繁殖第二代。A.4 为害情况 庭园象甲成虫取食寄主的叶片、茎杆和果实,为害叶片的典型症状为叶片呈弹孔状。在葡萄种植园中,最明显的为害阶段通常发生葡萄的挂果阶段。发育中的葡萄串受到成虫为害时,会导致葡萄结疤。成虫取食寄主的茎杆或正在生长的葡萄串,葡萄串呈环状取食,从而完全破坏整串葡萄。葡萄幼苗期根系也可受到庭园象甲幼虫的为害,导致发育不良并可能出现水分胁迫。葡萄发育成熟后,庭园象甲幼虫对根的危害生长通常没有像苗期那么严重。另外果实成熟后,庭园象甲可造成苹果、油桃和梨果实的浅6S N/T5 5 4 92 0 2 2层损伤症状。图A.1 葡萄果实成虫为害状图A.2 葡萄茎秆成虫为害状

23、图A.3 葡萄叶片成虫为害状图A.4 葡萄根系幼虫为害状(图片来源:h t t p s:/www.a g r i c.w a.g o v.a u/p o m e-f r u i t/g a r d e n-w e e v i l-v i n e y a r d s)7S N/T5 5 4 92 0 2 2附 录 B(资料性)庭园象甲形态特征图 图B.1列出庭园象甲成虫整体及成虫喙、触角、前胸背板、鞘翅、足的形态特征图,可用于该种类的形态鉴定。注:图片拍摄人为王振华、王琴。图B.1 庭园象甲成虫特征图8S N/T5 5 4 92 0 2 2附 录 C(资料性)庭园象甲与近似种鉴定检索表1.雄虫第

24、1和第5腹节具有直立的金色刚毛,聚集成两个环状毛簇;第5腹节从顶部凹陷,其长度超过体节长的4/5,第24腹节的鳞片基部有细长的结节;复眼外缘为圆弧形,背面观略呈圆锥形。P h l y c t i n u s g r o o t b o s e n s i s 雄虫第1和第5腹节具有或多或少的刚毛但不聚集成簇,第5腹节从顶部凹陷,其长度超过体节长的2/3,第24腹节光滑,其鳞片基部不具有细长的结节;复眼外缘为圆弧形,表面稍呈圆锥形或背面呈典型圆锥形。22.雄虫第5腹节的凹处的中间部位着生直立刚毛;体长大于 7 mm;雌虫的鞘翅具大胝状突,斜面基部具一条对比明显的横向白带;前胸背板的鳞片致密,体壁

25、表面密披细长瘤突,排列方向与中隆线平行,在中脊两侧各有两个轻微凹凸;阴茎短,为被毛长度的0.5,阴茎内生殖器,在阴茎体基部下面形成一个正方形角的硬化板。P.x e r o p h i l u s雄虫第5腹节的凹处的中间部位不着生直立刚毛,或仅存在于基部;体长小于7 mm;雌虫鞘翅缺或仅具小胝状突,斜面无或模糊的横向白带;前胸背板的鳞片散生,未覆盖体表;阴茎较长,长于被毛长度的0.6,无硬化板。3 3.鞘翅上的鳞片形状为宽窄混合,鞘翅间纹不直,第3、5、7间纹的顶端上有较大的胝状突;复眼凸出,背面观呈圆锥形;在前胸中脊的两侧各有两个轻微凹突;中脊突起,光滑而有光泽,未达前胸的顶部和基部。雌虫鞘翅

26、具明显的灰色V形条纹,该条纹贯穿鞘翅底部。P.c a l l o s u s 鞘翅鳞片呈椭圆形;鞘翅间纹不直,第3、5、7无或有小胝状突,复眼明显突出,背面观呈圆锥状或不呈圆锥状;前胸有规则凸出,无凹陷;雌虫鞘翅仅1-3行具淡色横带或无淡色横带。44.体表均匀覆盖灰色鳞片,鞘翅上散生一些色泽较浅的斑点;复眼边缘背面观为圆形,或具一定角度;阴茎近基部最宽,两侧笔直,顶端汇合。P.l i t t o r a l i s体表覆盖棕色,黑色或珍珠绿鳞片;复眼突出,背面观呈明显圆锥形;阴茎两侧凸出,最宽处接近基部1/3或接近长度中部。55.前胸背板中部具明显光滑隆凸;鞘翅退化形成一些浅色斑点或无;腹节第

27、14(腹面)上的鳞片长度小于爪;左边交配骨片的基部具有刚毛。P.a l o e v o r u s前胸密被点状,缺纵隆凸;鞘翅退化,除横带外,散生苍白斑点;腹节第14(腹面)上的鳞片长度长于爪;左边交配骨片的基部无刚毛。P.p l a n i t h o r a x(注:检索表引自H a r a n,H a n s e n&B e n o i t e t a l.,2 0 2 0)9S N/T5 5 4 92 0 2 2标引序号说明:A P.c a l l o s u s;B P.g r o o t b o s e n s i s;C P.x e r o p h i l u s;D P.p l

28、 a n i t h o r a x;E P.l i t t o r a l i s;F P.a l o e v o r u s。注:标尺 3 mm,图引自H a r a n,H a n s e n&B e n o i t e t a l.,2 0 2 0。图C.1 庭园象甲与其近似种形态特征比较图01S N/T5 5 4 92 0 2 2标引序号说明:A P.c a l l o s u s;B P.g r o o t b o s e n s i s;C P.x e r o p h i l u s;D P.p l a n i t h o r a x;E P.l i t t o r a l i

29、s;F P.a l o e v o r u s。注:标尺5 0 0 m,图引自 H a r a n,H a n s e n&B e n o i t e t a l.,2 0 2 0。图C.2 庭园象甲与其近似种生殖器比较图()11S N/T5 5 4 92 0 2 2附 录 D(规范性)庭园象甲D N A的提取方法D.1 基因组D N A提取D.1.1 试剂盒提取 D NA 的方法将昆虫样品用液氮碾碎;取4 0 m g到1.5 m L离心管,加6 0 0 L核酸裂解液;6 5 水浴2 0 m i n,温和地混匀;取出回温到3 7,加R NA酶3 L;温和地混匀,放3 7 1 5 m i n;冷

30、却至室温,加蛋白沉淀液2 0 0 L,混匀;1 4 0 0 0 r/m i n离心3 m i n,取上清6 0 0 L;加入异丙醇6 0 0 L,温和地混匀,静置5 m i n;1 4 0 0 0 r/m i n离心1 m i n,弃掉上清,加7 0%乙醇6 0 0 L,温和地颠倒混匀;1 4 0 0 0 r/m i n离心1 m i n,弃上清(用枪吸干),放置于吸水纸上晾干(1 5 m i n);加入1 0 0 L D NA重悬液,如果D NA很少,就加3 0 L,6 5 温育1 h或4 过夜;1 4 0 0 0 r/m i n离心1 m i n,取1 L进行P C R扩增。D.1.2 C

31、 T A B法提取庭园象甲核酸的方法称取经液氮处理的疑似昆虫粉末0.1 g 0.2 g,移到灭菌的2.0 m L离心管中。离心管中加入3 0 0 L5 0 0 L C T A B缓冲液(其中含0.1 g蛋白酶K)混匀,6 5 水浴1 h;1 3 0 0 0 g离心5 m i n1 0 m i n,保留上清液;加入5 0 0 L三氯甲烷异戊醇(2 41)混匀;1 3 0 0 0 g离心5 m i n1 0 m i n,保留上清液;再加入5 0 0 L三氯甲烷异戊醇(2 41)混匀;1 3 0 0 0 g离心5 m i n 1 0 m i n,保留上清液;加入1 m L异丙醇轻轻混匀,-7 0 放

32、置1 h或-2 0 过夜;1 3 0 0 0 g离心3 0 m i n,可见D NA沉淀;7 0%乙醇洗涤D NA沉淀,室温干燥;用3 0 L5 0 L T r i s-E D T A缓冲液溶解D NA,待用。D.2 P C R扩增D.2.1 P C R扩增引物 选定的C O基因片段通过P C R反应获得,引物序列为L C O 1 4 9 0:5-G G T C AA C AA AT C AT A AAG AT A T T G G-3/HC O 2 1 9 8:5-T AA A C T T C A G G G T GA C C A AAA AAT C A-3。D.2.2 P C R反应体系与反

33、应条件 P C R反应体系为2 5 L,包括:1 0P C R 缓冲液(含2 5 mm o l/L M g C l2)2.5 L,2.5 mm o l/L d N T P 1.0 L,2 0 m o l/L正义引物和反义引物各1.0 L,5 U/L T a q D NA聚合酶0.5 L,5 0 n g/L D NA模板1.0 L,d d H2O补至2 5 L。P C R反应程序为:9 4 变性1 5 m i n;9 4 变性 3 0 s,5 2 退火1 m i n,7 2 延伸1 m i n,3 5个循环;7 2 延伸1 5 m i n。用庭园象甲阳性核酸的标准样品作阳性对照,用灭菌蒸馏水作空

34、白对照。D.2.3 P C R扩增产物检测及测序 利用1.5%琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。扩增产物经电泳检测为单一明亮的目的条带后,对扩增产物进行纯化和测序。D.2.4 D N A序列数据的处理 获得测序结果后,先对峰图进行检查,确定测序的准确性,利用软件进行序列拼接,去除引物区,获21S N/T5 5 4 92 0 2 2得6 5 8 b p大小的C O基因片段,保存为F A S T A格式备用。利用软件检测其是否能翻译成氨基酸序列,以保证核苷酸序列的准确性。D.2.5 D N A条形码序列数据分析 将所得C O序列,在N C B I网站上进行B L A S T相似性检验(h t t

35、p s:/b l a s t.n c b i.n l m.n i h.g o v/B l a s t.c g i),或在B O L D S Y S T EM S上的B O L D i n d e n t i f i c a t i o n S y s t e m(I D S)中的物种水平条形码数据库(S p e c i e s L e v e l B a r c o d e R e c o e d s)进行鉴定(h t t p:/www.b o l d s y s t e m s.o r g/i n d e x.p h p/I D S_O p e n I-d E n g i n e)。D.3

36、庭园象甲与其他5个近似种的基因序列庭园象甲与其他5个近似种的基因序列见表D.1。表D.1 庭园象甲与其他5个近似种的基因序列种类基因序列号片段大小/b pP h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r,1 8 2 6)MN 6 2 7 2 3 2.16 5 8P h l y c t i n u s g r o o t b o s e n s i s H a r a nMN 6 2 7 2 4 8.16 5 8P h l y c t i n u s x e r o p h i l u s H a r a n MN 6 2 7 2 4

37、 1.16 5 8P h l y c t i n u s p l a n i t h o r a x H a r a n MN 6 2 7 2 4 6.16 5 8P h l y c t i n u s l i t t o r a l i s H a r a n MN 6 2 7 2 4 7.16 5 8P h l y c t i n u s a l o e v o r u s H a r a n MN 6 2 7 2 4 4.16 5 8注:参考文献见J u l i e n M.H a r a n e t a l.(2 0 2 0)。31S N/T5 5 4 92 0 2 2参 考 文 献

38、1 J u l i e n M.H a r a n,S t e f f a n H a n s e n,L a u r e B e n o i t&P i a A d d i s o n.D e s c r i p t i o n o f f i v e n e w s p e c i e s i n t h e g e n u s P h l y c t i n u s S c h o e n h e r r(C o l e o p t e r a,C u r c u l i o n i d a e):a f i r s t s t e p i n d e c i p h e r i n g

39、 t h e P.c a l l o s u s c o m p l e x J.E u r o p e a n J o u r n a l o f T a x o n o m y,2 0 2 0,6 6 9:1-2 9.2 A r n B.R.W i t t,R o b i n M.L i t t l e,T i m o t h y M.C r o w D.T h e e f f e c t i v e n e s s o f h e l m e t e d g u i n-e a f o w l N u m i d a m e l e a g r i s(L i n n a e u s 1

40、 7 6 6)i n c o n t r o l l i n g t h e b a n d e d f r u i t w e e v i l P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h n h e r r 1 8 2 6),a n d t h e i r i m p a c t o n o t h e r i n v e r t e b r a t e s i n a p p l e o r c h a r d s i n t h e W e s t e r n C a p e P r o v i n c e,S o u t h A f r i c

41、a J.A g r i c u l t u r e,e c o s y s t e m s&e n v i r o n m e n t,1 9 9 5,5 5(3):1 6 9-1 7 9.3 B a r n e s B N;P r i n g l e K L.O v i p o s i t i o n b y t h e b a n d e d f r u i t w e e v i l,P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r)(C o l e o p t e r a:C u r c u l i o n i d a e)

42、,i n d e c i d u o u s f r u i t o r c h a r d s i n S o u t h A f r i c a J.B u l l e t i n o f E n t o m o l o g i c a l R e s e a r c h,1 9 8 9,7 9(1):3 1-4 0.4 B a r n e s,B.N.D i f f e r e n t l i f e a n d s e a s o n a l c y c l e s o f b a n d e d f r u i t w e e v i l,P h l y c t i n u s c

43、a l l o s u s(C o l e o p t e r a:C u r c u l i o n i d a e),i n a p p l e o r c h a r d s i n t h e s o u t h-w e s t e r n C a p e J.P h y t o p h y l a c t i c a,1 9 8 9,2 1(2):1 4 7-1 5 7.5 B a r n e s,B.N.E v a l u a t i o n o f t e c h n i q u e s f o r m o n i t o r i n g e m e r g e n c e o

44、f t h e b a n d e d f r u i t w e e-v i l,P h l y c t i n u s c a l l o s u s,i n d e c i d u o u s f r u i t o r c h a r d s J.E n t o m o l o g i a e x p e r i m e n t a l i s e t a p p l i c a t a,1 9 9 1,6 0(1):7-1 1.6 B a r n e s,B.N.,C a p a t o s,D.E v i d e n c e f o r a n a g g r e g a t i

45、o n p h e r o m o n e i n a d u l t f r a s s o f b a n-d e d f r u i t w e e v i l,P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r)(C o l.,C o l e o p t e r a)J.J o u r n a l o f a p p l i e d e n t o-m o l o g y,1 9 8 9,1 0 8(5):5 1 2-5 1 8.7 D r.B.N.B a r n e s,P r o f.J.H.G i l i o m e D

46、.F r u i t-f e e d i n g b e h a v i o u r o f b a n d e d f r u i t w e e v i l,P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h n h e r r)(C o l.,C u r c u l i o n i d a e),i n a p p l e o r c h a r d s J.J o u r n a l o f A p p l i e d E n t o m o l o g y,1 9 9 2,1 1 3(4):4 0 7-4 1 5.8 E B r e d e n h a

47、 n d,A V a n H o o r n,F M a y,T F e r r e i r a,S J o h n s o n.E v a l u a t i o n o f t e c h n i q u e s f o r m o n i t o r i n g b a n d e d f r u i t w e e v i l,P h l y c t i n u s c a l l o s u s(S c h o e n h e r r)(C o l e o p t e r a:C u r c u l i o n i d a e),i n-f e s t a t i o n i n b

48、 l u e b e r r y o r c h a r d s J.A f r i c a n e n t o m o l o g y,2 0 1 0,1 8(1):2 0 5-2 0 9.9 M y b u r g h A C,K r i e g l e r P J,1 9 6 7.E x p e r i m e n t s o n s t e r i l i z a t i o n o f t h e S n o u t b e e t l e s,P h l y c t i n u s c a l l o s u s B o h.a n d E r e m n u s s e t u

49、l o s u s B o h.o n e x p o r t g r a p e s i n c o l d-s t o r a g D.J o u r n a l o f t h e E n t o m o l o g i c a l S o c i e t y o f S o u t h e r n A f r i c a J.1 9 6 7,V o l.2 9,N o.1.1 0 W a l k e r P L.L a b o r a t o r y r e a r i n g o f t h e g a r d e n w e e v i l,P h l y c t i n u s

50、c a l l o s u s B o h e m a n(C o-l e o p t e r a:C u r c u l i o n i d a e),a n d t h e e f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n i t s g r o w t h a n d s u r v i v a lJ.A u s t r a l i a n J o u r n a l o f Z o o l o g y,1 9 8 1,2 9(1),2 5-3 2.1 1 昆虫学名词审定委员会.昆虫学名词 M.科学出版社.2 0 0 0.1 8-2 4.41S N/T5