抗体PPT讲课讲稿.ppt

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1、抗体PPT第一节第一节 概述概述 抗体抗体：受抗原刺激后，由：受抗原刺激后，由B淋巴细胞分化成的淋巴细胞分化成的浆细胞产生的能与相应抗原特异结合的免疫球蛋浆细胞产生的能与相应抗原特异结合的免疫球蛋白。白。一、抗体一、抗体抗原抗原B B浆细胞浆细胞浆细胞浆细胞抗体抗体抗体抗体T TT T效应淋巴细胞效应淋巴细胞效应淋巴细胞效应淋巴细胞2v1 1、Ab Ab 的发现：的发现：18901890年，年，Behring Behring 和北里在德国和北里在德国KochKoch实验室使用实验室使用白白喉脱毒外毒素喉脱毒外毒素注射马，在马血清中发现了一种能中和白注射马，在马血清中发现了一种能中和白喉外毒素的

2、物质，称为喉外毒素的物质，称为“抗毒素抗毒素”，并挽救了成千上，并挽救了成千上 万的白喉患儿。万的白喉患儿。60%60%死亡率降到死亡率降到26%26%。医学史上的一个重要里程碑，人类医学史上的一个重要里程碑，人类防治传染病的重要方法防治传染病的重要方法血清疗法血清疗法诞生了。诞生了。获获19011901年的第一届诺贝尔奖年的第一届诺贝尔奖32、证明是球蛋白、证明是球蛋白证明：抗体是证明：抗体是球蛋白；球蛋白；但但球蛋白并非都具有抗体活性球蛋白并非都具有抗体活性4 指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。球蛋白。与抗体概念的异同。与抗体概念的异同。二、免

3、疫球蛋白二、免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）抗体：生物学功能抗体：生物学功能免疫球蛋白：化学结构免疫球蛋白：化学结构 IgAb5免疫球蛋白存在形式免疫球蛋白存在形式分泌型分泌型（secreted immunoglobulin,secreted immunoglobulin,sIg sIg）抗体抗体 膜型膜型（membrane immunoglobulin,membrane immunoglobulin,mIgmIg）BCR(B细胞受体细胞受体)B6第二节第二节 抗体的结构及功能区抗体的结构及功能区 一、四肽链结构一、四肽链结构“Y”字型字型 四肽链四肽链2条重链条重链(heav

4、y chain,H)2条轻链条轻链(light chain,L)二硫键连接二硫键连接7轻链：约轻链：约210210个个AAAA残基，分子量约为残基，分子量约为25kD25kD；可分为；可分为 和和 两型：两型：重链：重链：约约450-550个氨基酸残基个氨基酸残基，分子量分子量约约50-75 kD。重链分重链分、和和链链 IgG IgG（IgG IgG 和和 IgG IgG ）IgMIgM （IgM IgM 和和 IgM IgM ）IgAIgA （IgA IgA 和和 IgA IgA ）IgEIgE （IgE IgE 和和 IgE IgE ）IgD IgD（IgD IgD 和和 IgD IgD

5、 ）-S-S-S-SS-SNCLHHLN8二、可变区和恒定区二、可变区和恒定区可变区可变区（variable region,V 区）：轻链和重链靠近区）：轻链和重链靠近N端的约端的约110个氨基酸变化很大，个氨基酸变化很大，称为可变区。称为可变区。恒定区恒定区（constant region,C 区）：区）：免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸序列较保守的区域。免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸序列较保守的区域。H链有一个链有一个VH及及34个个CH区。区。（其中（其中IgM,IgE有有CH4区）区）L链具有链具有VL，CL两个功能区。两个功能区。铰链区铰链区：位于位于CH1与与CH2之间，之间，含有丰富的

6、脯氨酸，易伸展弯曲，含有丰富的脯氨酸，易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。等水解。910可变区可变区：超变区超变区：重链和轻链：重链和轻链V区各有区各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为称为超变区（超变区（hypervariable region,HVR）或决定簇互补决定区）或决定簇互补决定区（complementary determining region,CDR），），分别为分别为CDR1、CDR2和和CDR3。6个个CDR组成一个抗原结合部位。组成一个抗原结合部位。骨架区骨架区：CDR以外区域的氨基酸

7、组成和排列顺序相对不易变化，称为骨以外区域的氨基酸组成和排列顺序相对不易变化，称为骨架区（架区（framework region,FR）。）。可变区可变区1112超变区决定与抗原决定簇结合。超变区决定与抗原决定簇结合。骨架区主要稳定超变区的空间构型。骨架区主要稳定超变区的空间构型。13三、抗体的功能区或结构域三、抗体的功能区或结构域功能区功能区功能区功能区：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链经链内二硫键连接而成的球状结构。经链内二硫键连接而成的球状结构。经链内二硫键连接而

8、成的球状结构。经链内二硫键连接而成的球状结构。Ag Binding抗原结合位点抗原结合位点Complement Binding Site补体结合位点，活化补体补体结合位点，活化补体Placental TransferIgG 胎盘转移胎盘转移Binding to Fc ReceptorsFC段受体，亲细胞活性段受体，亲细胞活性同种异型抗原决定簇同种异型抗原决定簇存在部位，遗传标志存在部位，遗传标志促进可变区与抗原表位结合；促进可变区与抗原表位结合；暴露补体结合位点，活化补体暴露补体结合位点，活化补体14四、抗体的其它成分四、抗体的其它成分1 1、连接链（、连接链（Join Chain,Join

9、Chain,J J 链链)连接多聚体连接多聚体 Ig Ig 的蛋白质，存在于的蛋白质，存在于SIgA SIgA 和和IgMIgM。J 链链SIgASIgA（分泌型（分泌型 IgA)IgA)J J 链链IgM152 2、分泌片（分泌片（Secretory piece,SPSecretory piece,SP）只存在于粘膜分泌型只存在于粘膜分泌型IgAIgA中，由上皮细胞合中，由上皮细胞合成，防止蛋白酶对成，防止蛋白酶对IgAIgA的水解。的水解。SIgASP16五、免疫球蛋白的水解片段五、免疫球蛋白的水解片段17水解水解酶酶作用位点作用位点水解片段及其功能水解片段及其功能 木瓜蛋白木瓜蛋白酶酶铰

10、链区重链间二硫铰链区重链间二硫键近键近N N端端（1 1）两个相同的）两个相同的FabFab段：可与抗原结合段：可与抗原结合（2 2）一个）一个FcFc段：激活补体、结合细胞、通段：激活补体、结合细胞、通过胎盘过胎盘胃蛋白酶胃蛋白酶铰链区重链间二硫铰链区重链间二硫键近键近C C端端（1 1）一个具有双价活性的）一个具有双价活性的 F(abF(ab)2 2段：可段：可同时结合两个抗原表位同时结合两个抗原表位 （2 2）若干个小分子多肽碎片）若干个小分子多肽碎片(pFc(pFc)：无：无生物学作用生物学作用IgG 酶解后的比较酶解后的比较18第三节第三节 抗体的生物学功能抗体的生物学功能19（一）

11、（一）V区区-识别并特异性结合抗原识别并特异性结合抗原 病毒病毒毒素毒素二聚体（二聚体（SIgASIgA）-4-4 价价单体分子（单体分子（IgGIgG，IgEIgE）-2-2 价价五聚体（五聚体（IgMIgM）-5-5 价价意义：意义：（1 1）中和效应）中和效应 -中和毒素和病毒中和毒素和病毒20FabFc固定补体固定补体与与Fc受体结合受体结合BFc受体受体Ig（2 2）与抗原结合）与抗原结合 -C-C区变构，激活补体，与区变构，激活补体，与FcFc受体结合，起多种效应。受体结合，起多种效应。21(二）二）激活补体激活补体-发挥发挥溶解细胞溶解细胞等多种活性等多种活性AbAb（IgMIg

12、M、IgGIgG）+Ag+Ag C1q C1q 补体补体补体补体经典经典经典经典途径途径途径途径 IgG4IgG4、IgAIgA和和和和 IgEIgE的的的的凝聚物凝聚物凝聚物凝聚物 补体补体补体补体旁路旁路旁路旁路途径途径途径途径 22发挥杀伤作用发挥杀伤作用 称称 ADCC 激活激活NK细胞细胞促进吞噬促进吞噬 称称调理作用调理作用 结合吞噬细胞结合吞噬细胞3.超敏反应超敏反应：结合肥大细胞及嗜碱性粒细胞。：结合肥大细胞及嗜碱性粒细胞。（三）与（三）与Fc受体（受体（FcR)结合结合-介导免疫细胞活性介导免疫细胞活性 体内多种细胞具有体内多种细胞具有Fc受体，如吞噬细胞、受体，如吞噬细胞、

13、NK细细胞、单核细胞、肥大细胞、粒细胞。胞、单核细胞、肥大细胞、粒细胞。1.ADCC(抗体依赖细胞介导的细胞毒抗体依赖细胞介导的细胞毒)作用作用2.调理作用调理作用：促进吞噬细胞吞噬细菌等：促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性颗粒性抗原。抗原。2324254、通过胎盘、通过胎盘(IgG)和粘膜和粘膜(IgA)IgG是唯一是唯一可通过胎盘可通过胎盘的抗体，在新生儿抗的抗体，在新生儿抗感染中有重要作用。感染中有重要作用。SIgASIgA可通过分泌片介导可通过分泌片介导穿越粘膜穿越粘膜上皮细胞，上皮细胞，在粘膜表面抗感染中起作用重要。在粘膜表面抗感染中起作用重要。2627与抗原作特异性结合与抗原作特异性结合

14、激活补体激活补体结合细胞结合细胞 激活吞噬细胞：调理作用激活吞噬细胞：调理作用 激活激活NKNK细胞：细胞：ADCCADCC作用作用 激活肥大细胞：超敏反应激活肥大细胞：超敏反应穿过胎盘和粘膜穿过胎盘和粘膜V V区区活性活性 C C区区活性活性 抗体生物学活性总结抗体生物学活性总结与具有与具有FcFc受体的细胞结合受体的细胞结合28第四节第四节 五类免疫球蛋白的特性与功能五类免疫球蛋白的特性与功能29301、IgG 1 1、单体分子；单体分子；2 2、四个亚类；四个亚类；3 3、血清中含量最高血清中含量最高(75%Ig75%Ig)；4 4、半衰期最长半衰期最长(21(212323天天)；315

15、 5、抗感染的主要抗体抗感染的主要抗体，具有抗菌、抗病毒、中和，具有抗菌、抗病毒、中和毒素急免疫调节作用，能激活补体。毒素急免疫调节作用，能激活补体。6 6、再次应答的主要抗体再次应答的主要抗体。7 7、唯一能通过胎盘的抗体唯一能通过胎盘的抗体（在新生儿抗感染中起（在新生儿抗感染中起重要作用）；重要作用）；322、IgM3 3、在免疫应答中产生最早。、在免疫应答中产生最早。功能：功能：理论上十价，但由于空间位阻，结合价为五价，理论上十价，但由于空间位阻，结合价为五价，但仍具最强的但仍具最强的溶菌、激活补体、免疫调理溶菌、激活补体、免疫调理作用。作用。2 2、在个体发育中最早合成。、在个体发育中

16、最早合成。4 4、占血清、占血清、占血清、占血清IgIg含量的含量的含量的含量的5 510%10%；1 1、五聚体五聚体五聚体五聚体，分子量最大，分子量最大，分子量最大，分子量最大(900kd)(900kd)，又称巨球蛋白），又称巨球蛋白），又称巨球蛋白），又称巨球蛋白）5 5、半衰期、半衰期、半衰期、半衰期5 5天天天天333、IgA分两型分两型血清型血清型：IgA1,IgA1,单体。占血清单体。占血清Ig10-20%Ig10-20%分泌型（分泌型（SIgASIgA）：）：IgA2IgA2，二聚体；，二聚体；，二聚体；，二聚体；功能：功能：粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；

17、粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；聚合聚合聚合聚合 IgA IgA 激活补体替代途径。激活补体替代途径。激活补体替代途径。激活补体替代途径。粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；34sIgAsIgA的合成的合成和主要作用和主要作用部位在黏膜部位在黏膜354、IgD2 2、血清中含量极少、血清中含量极少,约占血清约占血清IgIg的的

18、1%1%。4 4、B B细胞成熟的表面标志。细胞成熟的表面标志。3.3.3.3.存在形式：分泌型存在形式：分泌型存在形式：分泌型存在形式：分泌型 血清中，功能不清血清中，功能不清血清中，功能不清血清中，功能不清 1 1 1 1、单体分子、单体分子、单体分子、单体分子 膜结合型膜结合型膜结合型膜结合型 B B B B细胞表面。细胞表面。细胞表面。细胞表面。意义：意义：B细胞成熟的标志。细胞成熟的标志。抗原受体，对抗原受体，对抗原受体，对抗原受体，对B B细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节 作用；作用；作用；作用；成熟成熟B细胞

19、可同时表达细胞可同时表达SmIgD和和SmIgM。不成熟不成熟B细胞只表达细胞只表达SmIgM，36未成熟未成熟B细胞细胞 成熟成熟B细胞细胞 活化或记忆活化或记忆B细胞细胞mIgM mIgD 375、IgE1 1、单体分子、单体分子4 4、具亲细胞性（亲细胞抗体）、具亲细胞性（亲细胞抗体）功能：功能：介导介导I I型超敏反应型超敏反应 2 2、血清中含量极微；、血清中含量极微；3 3、呼吸道和消化道粘膜浆细胞产生。、呼吸道和消化道粘膜浆细胞产生。38IgGIgGIgMIgMIgA/SIgAIgA/SIgAIgDIgDIgEIgE存在形式存在形式存在形式存在形式单体单体单体单体五聚体五聚体五聚

20、体五聚体单体单体单体单体/二聚体二聚体二聚体二聚体单体单体单体单体单体单体单体单体相对分子质量相对分子质量相对分子质量相对分子质量(1000)(1000)146146970970160/385160/385184184188188血清中总血清中总血清中总血清中总IgIg百分含百分含百分含百分含量量量量70757075510510152015201 10.0020.002半衰期半衰期半衰期半衰期23235 56 63 33 3出现时间出现时间出现时间出现时间 出生后出生后出生后出生后三个月三个月三个月三个月出生前出生前出生前出生前出生后四个出生后四个出生后四个出生后四个月月月月晚晚晚晚晚晚晚晚五

21、大类免疫球蛋白特性比较（五大类免疫球蛋白特性比较（1）39IgGIgGIgMIgMIgAIgAIgDIgDIgEIgE与补体结合能力与补体结合能力与补体结合能力与补体结合能力 中和作用中和作用中和作用中和作用 调理作用调理作用调理作用调理作用 ADCCADCCADCCADCC 参与粘膜防御参与粘膜防御参与粘膜防御参与粘膜防御 能穿透胎盘能穿透胎盘能穿透胎盘能穿透胎盘 与细胞结合与细胞结合与细胞结合与细胞结合 参与超敏反应参与超敏反应参与超敏反应参与超敏反应 五大类免疫球蛋白特性比较（五大类免疫球蛋白特性比较（2 2）40第五节第五节 抗体的抗原性抗体的抗原性vIg具有双重性：做为抗体能结合抗原

22、 做为大分子蛋白质能被其它抗体结合Ag1Ab1（Ag2）Ab241vIg的抗原性可分为3种：1.1.同种型抗原（同种型抗原（IsotypeIsotype）同一种属每个个体都具有的免疫球蛋白的抗原特异性，其抗原决定簇主要存在于Ig的C区。42 （1 1 1 1）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链C C C C区抗原性的不同）区抗原性的不同）区抗原性的不同）区抗原性的不同）IgG IgG (gamma)(gamma)IgA IgA (alpha)(alpha)IgM IgM (mu)(mu)IgD IgD (delta)(delta)IgE IgE (e

23、psilon)(epsilon)类类亚类亚类亚类亚类IgGIgG：IgG1,IgG2,IgG3,IgG4 IgG1,IgG2,IgG3,IgG4 IgAIgA：IgA1,IgAIgA1,IgA43（2 2 2 2）型和亚型）型和亚型）型和亚型）型和亚型(根据轻链根据轻链根据轻链根据轻链C C区抗原的差异区抗原的差异区抗原的差异区抗原的差异)亚型亚型亚型亚型(链链链链)(kappakappa)型型型型(lambdalambda)型型型型 型型型型1 1 1 1：第：第：第：第190190190190位位位位(亮氨酸亮氨酸亮氨酸亮氨酸)2 2 2 2：第：第：第：第190190190190位位位位

24、(精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸)3 3 3 3：第第第第154154154154位位位位(甘氨酸甘氨酸甘氨酸甘氨酸)4 4 4 4：第第第第154154154154位位位位(丝氨酸丝氨酸丝氨酸丝氨酸)442 2、同种异型抗原（、同种异型抗原（AllotypeAllotype）同一种属不同个体所具有的Ig在抗原性上的差异，主要存在于重链和轻链的稳定区特定部位的某个或数个氨基酸的不同中。453 3）独特型抗原（）独特型抗原（IdiotypeIdiotype）同一个体不同Ig的抗原性各不相同，主要存在于Ig 的V区。46同一物种同一物种Ig共有的抗共有的抗原性，存在于原性，存在于C区。区。同一物种不同个

25、体同一物种不同个体Ig抗原抗原性差异，差异在于性差异，差异在于C区某区某些些AA不同。不同。同一个体内各同一个体内各Ig抗原性抗原性差异，存在于差异，存在于V区。区。同一个体内各同一个体内各Ig抗原性抗原性差异，存在于差异，存在于V区。区。（个体型标志）（个体型标志）（种属型标志）（种属型标志）（细胞型标志）（细胞型标志）47第六节第六节 人工制备抗体人工制备抗体 多克隆抗体多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）单克隆抗体单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）基因工程抗体基因工程抗体 （engineering antibody）48 利用抗原免疫

26、动物后从血清中获得的抗体，含有由不同由不同B细胞克隆产生的针对细胞克隆产生的针对不同抗原决定簇不同抗原决定簇的多种类型抗体。（1 1）预防、治疗感染性疾病（特异性差，可发生超敏反应）预防、治疗感染性疾病（特异性差，可发生超敏反应）一、多克隆抗体（一、多克隆抗体（polyclonal antibody）（2 2）临床诊断）临床诊断Ag49抗血清（多克隆抗体）的制备抗血清（多克隆抗体）的制备50 1975年建立的技术，通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体。二、单克隆抗体（二、单克隆抗体（monoclonal antibody）概念：由单一克隆概念：由单一克隆B B细胞产生的细胞产生

27、的,只针对只针对某一某一特定抗原决定簇特定抗原决定簇的抗体。的抗体。5152多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体来源来源动物免疫血清、恢复期病人血动物免疫血清、恢复期病人血清或免疫接种人群清或免疫接种人群多为鼠源性多为鼠源性特点特点来源广泛、制备容易来源广泛、制备容易纯度高、特异性强、效价高、少纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应、制备成本低或无血清交叉反应、制备成本低组成组成针对不同抗原表位的抗体的混针对不同抗原表位的抗体的混合物合物针对单一表位，结构和组成高度针对单一表位，结构和组成高度均一，抗原特异性及同种型一致均一，抗原特异性及同种型一致应用应用疾病的被动免疫治疗疾病的被动

28、免疫治疗广泛用于疾病诊断、特异性抗原广泛用于疾病诊断、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、疾病的被或蛋白的检测和鉴定、疾病的被动免疫治疗和生物导向药物制备动免疫治疗和生物导向药物制备缺点缺点特异性不高、易发生交叉反应，特异性不高、易发生交叉反应，不易大量制备不易大量制备人体应用后可导致人鼠抗体反应人体应用后可导致人鼠抗体反应多克隆抗体与单克隆抗体的比较多克隆抗体与单克隆抗体的比较53三、基因工程抗体（三、基因工程抗体（Genetically engneering antibody）利用基因重组技术在工程细胞（如大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞等）生产的高特异性抗体。545556 掌握免疫球蛋白的结构和主要生物学功能掌握免疫球蛋白的结构和主要生物学功能 熟悉免疫球蛋白抗原性熟悉免疫球蛋白抗原性 熟悉单克隆抗体概念和特点熟悉单克隆抗体概念和特点 了解单克隆抗体制备、概念、特点了解单克隆抗体制备、概念、特点 本章学习要求本章学习要求57谢谢58此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢